基因工程復(fù)習(xí)題答案版

1、1基因工程原理復(fù)習(xí)題思考題基因工程原理復(fù)習(xí)題思考題考試時(shí)間：考試時(shí)間：2009.06.21上午上午9：0011：00地點(diǎn)地點(diǎn)5D305基因工程緒論基因工程緒論1、基因工程的定義與特征。、基因工程的定義與特征。定義：在體外把核酸分子（DNA的分離、合成）插入載體分子，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合（重組DNA），引入原先沒有這類分子的受體細(xì)胞內(nèi)，穩(wěn)定地復(fù)制表達(dá)繁殖，培育符合人們需要的新品種（品系），生產(chǎn)人類急需的藥品、食品、工業(yè)品等。特征：1、具跨

2、越天然物種屏障的能力。2、強(qiáng)調(diào)了確定的DNA片段在新寄主細(xì)胞中的擴(kuò)增。2、試述基因工程的主要研究內(nèi)容。、試述基因工程的主要研究內(nèi)容。1）、目的基因的分離2）、DNA的體外重組（載體、受體系統(tǒng)等）3）、重組DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞及其篩選4）、基因在受體細(xì)胞內(nèi)的擴(kuò)增、表達(dá)、檢測及其分析。3、基因工程在食品工業(yè)上有何應(yīng)用發(fā)展？、基因工程在食品工業(yè)上有何應(yīng)用發(fā)展？主要是通過基因重組，使各種轉(zhuǎn)基因生物提高生產(chǎn)谷氨酸、調(diào)味劑、酒類和油類等有機(jī)物的

3、產(chǎn)率；或者改良這些有機(jī)物組成成分，提高利用價(jià)值。4、轉(zhuǎn)基因是一把雙刃劍，請客觀談?wù)剬D(zhuǎn)基因及轉(zhuǎn)基因食品安全性的認(rèn)識。、轉(zhuǎn)基因是一把雙刃劍，請客觀談?wù)剬D(zhuǎn)基因及轉(zhuǎn)基因食品安全性的認(rèn)識。轉(zhuǎn)基因技術(shù)所帶來的好處是顯而易見的，在人類歷史進(jìn)步和發(fā)展中起到了積極作用。首先，通過該項(xiàng)技術(shù)可以提供人們所需要的特性，改良培育新品種；第二，延長食品保存時(shí)間或增加營養(yǎng)成分；第三，將抗蟲防菌基因轉(zhuǎn)入到作物中，使作物本身產(chǎn)生抵抗病蟲害侵襲的能力，減少了農(nóng)藥的使用

4、量，有利于環(huán)境保護(hù)；第四，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及基因食物在醫(yī)學(xué)方面得到廣泛研究和應(yīng)用。人們對轉(zhuǎn)基因技術(shù)的主要擔(dān)憂在于環(huán)境方面。外源基因的導(dǎo)入可能會造就某種強(qiáng)勢生物，產(chǎn)生新物種或超級雜草、損害非目標(biāo)生物、破壞原有生物種群的動態(tài)平衡和生物多樣性，也即轉(zhuǎn)基因生物存在潛在的環(huán)境安全問題。轉(zhuǎn)基因作物的大面積種植已有數(shù)年，食用轉(zhuǎn)基因食品的人群至少有10億之多，但至今仍未有轉(zhuǎn)基因食品對生命造成危害的實(shí)例；更何況目前每一種基因工程食品在上市前，都要經(jīng)過國家法律認(rèn)

5、可，食品衛(wèi)生部門和環(huán)境部門的嚴(yán)格檢測。只有測試合格了，才能投放市場。因此公眾完全可以安全地消費(fèi)、大膽地食用轉(zhuǎn)基因食品。第一章第一章DNA的分子特性與利用的分子特性與利用1、原核生物和真核生物的基因表達(dá)調(diào)控有何差別？原核生物和真核生物的基因表達(dá)調(diào)控有何差別？1）原核基因表達(dá)調(diào)控的三個(gè)水平：轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、翻譯水平調(diào)控、蛋白質(zhì)加工水平的調(diào)控原核基因表達(dá)調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。2）真核生物基因表達(dá)的特點(diǎn)：?1基因組DNA存在的形式與原核生

6、物不同；?2真核生物中轉(zhuǎn)錄和翻譯分開進(jìn)行；?3基因表達(dá)具有細(xì)胞特異性或組織特異性；?4真核基因表達(dá)的調(diào)控在多個(gè)水平上進(jìn)行：DNA水平的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控、轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控、翻譯水平調(diào)控、蛋白質(zhì)加工水平的調(diào)控；33.PCR的原理和主要反應(yīng)過程，并分析影響的原理和主要反應(yīng)過程，并分析影響PCR擴(kuò)增的影響因素。擴(kuò)增的影響因素。PCR原理：變性溫度下，DNA雙鏈變性雙螺旋解開成單鏈DNA，在退火溫度中人工合成的特異引物根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則與單鏈D

7、NA特異結(jié)合，然后在DNA聚合酶的作用下，在延伸溫度下不同的脫氧核苷酸按照堿基互補(bǔ)配對原則在引物的引導(dǎo)下合成與模板DNA互補(bǔ)的新鏈，實(shí)現(xiàn)DNA的擴(kuò)增。影響PCR擴(kuò)增的影響因素：(1)Taq酶：常用1U25L?濃度低，擴(kuò)增產(chǎn)物不夠；?濃度高，非特異性擴(kuò)增增加；?酶的活性；(2)dNTP的濃度：常用100200molL，不能低于20molL，特異性、保真性；(3)模板：主要考慮純度及使用量，對純度要求不高，但含有酚、氯仿等雜質(zhì)則難以成功。使

8、用量從幾個(gè)ng到100ng.(4)引物濃度：0.10.5molL之間，過多則非特異擴(kuò)增增加，形成引物二聚體；(5)Mg2濃度：常用0.52.5mmolL；影響：酶的活性、引物模板退火、特異性(6)PCR反應(yīng)程序設(shè)定：變性溫度和時(shí)間、引物退火溫度Tm與時(shí)間、引物延伸溫度與時(shí)間和循環(huán)數(shù)4.PCR引物設(shè)計(jì)的原則，若給一指定引物設(shè)計(jì)的原則，若給一指定DNA序列并需要通過序列并需要通過PCR擴(kuò)增此序列，如何設(shè)計(jì)擴(kuò)增此序列，如何設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物？（關(guān)于

9、如何設(shè)計(jì)這個(gè)問題，靠自己了）擴(kuò)增引物？（關(guān)于如何設(shè)計(jì)這個(gè)問題，靠自己了）引物設(shè)計(jì)原則：1、GC含量4555%；2、Tm值高于55；3、引物特異性；4、引物擴(kuò)增跨度；5、是否形成引物二聚體5.定量定量PCR的原理？的原理？Ct值的含義。值的含義。原理：通過實(shí)時(shí)檢測PCR每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物相對應(yīng)的熒光信號，來實(shí)現(xiàn)對起始模板進(jìn)行定量及定性的分析。初始模板量X0的對數(shù)值與C(T)值之間呈線性關(guān)系：logX0=log(1Ex)CtlogNCt值的