分子生物學(xué)練習(xí)題及答案

1、1分子生物學(xué)試題一、名詞解釋一、名詞解釋1cDNAcDNA與cccDNAcccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉(zhuǎn)錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質(zhì)粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2標(biāo)準折疊單位標(biāo)準折疊單位：蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)單元α－螺旋與β－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結(jié)構(gòu)塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結(jié)構(gòu)。幾乎所有的三級結(jié)構(gòu)都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標(biāo)準折疊單位。3C

2、APCAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptprotein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）4回文序列回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5micRNAmicRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。6核酶核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。

3、7模體模體：蛋白質(zhì)分子空間結(jié)構(gòu)中存在著某些立體形狀和拓撲結(jié)構(gòu)頗為類似的局部區(qū)域8信號肽信號肽：在蛋白質(zhì)合成過程中N端有15~36個氨基酸殘基的肽段，引導(dǎo)蛋白質(zhì)的跨膜。9弱化子弱化子：在操縱區(qū)與結(jié)構(gòu)基因之間的一段可以終止轉(zhuǎn)錄作用的核苷酸序列。10魔斑魔斑：當(dāng)細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產(chǎn)生一個應(yīng)急反應(yīng)，停止全部基因的表達。產(chǎn)生這一應(yīng)急反應(yīng)的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGp

4、p的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調(diào)控子或稱為魔斑。11上游啟動子元件上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調(diào)節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。12DNADNA探針探針：是帶有標(biāo)記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應(yīng)用。13SDSD序列序列：是核糖體與mRNA結(jié)合序列，對翻譯起到調(diào)控作用。14單克隆抗體單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇

5、起作用的抗體。15考斯質(zhì)?？妓官|(zhì)粒：是經(jīng)過人工構(gòu)建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質(zhì)粒連接構(gòu)成。16藍白斑篩選白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍白斑篩選。17順式作用元件順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調(diào)控作用的基因元件

6、。18KlenowKlenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性19錨定錨定PCRPCR：用于擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。20融合蛋白融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結(jié)合在一起所組成的蛋白質(zhì)。二、填二、填空1DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內(nèi)切酶酶解限

7、制性內(nèi)切酶酶解）片段的排列順序。2RNA酶的剪切分為（自體催化自體催化）、（異體催化異體催化）兩種類型。3原核生物中有三種起始因子分別是（IF1IF1）、（IF2IF2）和（IF3IF3）。4蛋白質(zhì)的跨膜需要（信號肽信號肽）的引導(dǎo)，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構(gòu)象的蛋白質(zhì)）。5啟動子中的元件通常可以分為兩種：（核心啟動子元件核心啟動子元件）和（上游啟動子元件上游啟動子元件）。6分子生物學(xué)的研究內(nèi)容主要包含（結(jié)構(gòu)分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)分子

8、生物學(xué)）、（基因表達與調(diào)控基因表達與調(diào)控）、（DNADNA重組技術(shù)重組技術(shù)）三部分。7證明DNA是遺傳物質(zhì)的兩個關(guān)鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠肺炎球菌感染小鼠）、（T2T2噬菌體感染大腸桿菌噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物體吸收的外源生物體吸收的外源DNADNA改變了其遺傳潛能改變了其遺傳潛能）。8hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點：（hnRNAhnRNA在轉(zhuǎn)變?yōu)樵谵D(zhuǎn)變?yōu)閙RNAmRNA的過程中經(jīng)過剪接的過

9、程中經(jīng)過剪接，）、（mRNAmRNA的5′5′末端被加上一個末端被加上一個m7pGpppm7pGppp帽子，在帽子，在mRNA3′mRNA3′末端多了一個多聚腺苷酸末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)(polyA)尾巴尾巴）。9蛋白質(zhì)多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對亞基對DNADNA的利用來說是一種經(jīng)濟的方法的利用來說是一種經(jīng)濟的方法）、（可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機可以減少蛋白質(zhì)合成過程中隨機的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響的錯誤對蛋白質(zhì)活性的影響

10、）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關(guān)閉）。10蛋白質(zhì)折疊機制首先成核理論的主要內(nèi)容包括（成核成核）、（結(jié)構(gòu)充實結(jié)構(gòu)充實）、（最后重排最后重排）。11半乳糖對細菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細胞生長可以作為碳源供細胞生長）；另一方面（它又是細胞壁的成分它又是細胞壁的成分）。所以3增強子GCCAATTATAA—5mGpp—起始位點11070253對天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？對天然

11、質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個以上，易于用作選擇通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4舉例說明差示篩選組織特異舉例說明差示篩選組織特異cDNAcDNA的方

12、法？的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達的基因。5雜交瘤細胞系的產(chǎn)生與篩選？雜交瘤細胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細胞骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG）促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃嘌呤、氨基

13、蝶呤、T）生長出來的脾B骨髓瘤融合細胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。骨骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。骨脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃嘌呤，骨細胞提供細胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（、利用雙脫氧末端終止法（SangerSanger法）測定法）測定DNADNA一級結(jié)構(gòu)的原理與方法？一級

14、結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。由于它缺少形成35磷酸二脂鍵所需要的3OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長短不一的

15、DNA片段。方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。7、激活蛋白（、激活蛋白（CAPCAP）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？）對轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptprotein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當(dāng)大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，

16、CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：①CAP通過改變啟動子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向以便與10區(qū)結(jié)合，起到取代35區(qū)功能的作用。②CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結(jié)合，從而提高與其特定啟動子結(jié)合的概率。8、典型的、典

17、型的DNADNA重組實驗通常包括哪些步驟？重組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。b、將這個重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細胞并在受體細胞中復(fù)制保存，這個過程稱為轉(zhuǎn)化。c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。d、對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。9、基因文庫的構(gòu)建對重組子的篩選舉出、基因文庫的構(gòu)建對重組子的篩選舉

18、出3種方法并簡述過程。種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭白斑篩選或PCR篩選、差式篩選、DNA探針多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能