熒光定量pcr之絕對定量分析——標準曲線的繪制

1、熒光定量熒光定量PCR之絕對定量分析之絕對定量分析——標準曲線的繪制標準曲線的繪制1.絕對定量定義絕對定量是用已知濃度的標準品繪制標準曲線來推算未知樣品的量。將標準品稀釋至不同濃度，作為模板進行PCR反應。以標準品拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標，以測得的CT值為縱坐標，繪制標準曲線，對未知樣品進行定量時，根據(jù)未知樣品的CT值，即可在標準曲線中得到樣品的拷貝數(shù)。Log(起始濃度)與循環(huán)數(shù)呈線性關系，通過已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，即得到

2、該擴增反應存在的線性關系由樣品CT值，就可以計算出樣品中所含的模板量2.絕對定量標準品標準品的一些標準必須用與擴增目的基因相同的引物進行擴增，并且擴增效率相同標準品必須是經(jīng)過準確定量的（我們通常用的是ASP3700紫外光可見光微量分光光度計）標準品必須是標準化的（例如，同一化的細胞數(shù)）在每組實驗時，必須用相同的閾值設定來確定CT值標準品可以是含有目的基因的線性化的質(zhì)粒DNA，也可以是比擴增片段長的純化后的PCR產(chǎn)物，當然也可以是基因組D