產(chǎn)堿桿菌DN25降氰酶類型判斷及其分離純化.pdf

1、氰化物在工業(yè)中的廣泛應用造成大量含氰廢水，環(huán)境污染問題嚴重。與傳統(tǒng)化學處理法相比，生物降解具有無害化、可資源化的優(yōu)點，是一種很有發(fā)展前景的污染治理方法。自然界中存在多種具有降氰能力的細菌、真菌和植物。本實驗室篩選保藏的一株產(chǎn)堿桿菌Alcaligenes sp. DN25對無機氰具有較強降解活性，具有一定的工業(yè)應用前景。
　　 本文通過分析菌株DN25催化氰降解的產(chǎn)物和氰降解反應進程，初步判定菌株的降解途徑是由氰水解酶、氰水合酶和

2、酰胺酶共同作用的水解途徑，其中氰水解酶起主要作用。同時添加氰化物對菌株降氰酶的生物合成無誘導作用。
　　 根據(jù)氰水解酶和氰水合酶的催化作用機理，在培養(yǎng)基中分別添加四種金屬離子和四種含硫物質(zhì)來考察其對培養(yǎng)物比活力的影響。Co2+對菌體生長有抑制作用，而Zn2+、Mn2+、MoO42-對菌體生長有促進作用：Co2+、MoO42-的加入使菌體降氰活性顯著降低。DL-半胱氨酸對菌體產(chǎn)酶有明顯促進作用，DL-甲硫氨酸可同時提高菌株的產(chǎn)酶水

3、平和細胞生長量。在1L三角瓶中進行放大培養(yǎng)優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)條件：在基本培養(yǎng)基中添加0.8％(W/V)的DL-甲硫氨酸，裝液量l00mL，pH9.0，接種量8％。培養(yǎng)物比活力平均值為2.18U·mL-1，是優(yōu)化前的3.46倍。菌株DN25的生長曲線和產(chǎn)酶曲線趨勢基本一致，培養(yǎng)40h后生長進入穩(wěn)定期。
　　 選用超聲波破碎法破碎細胞并提取粗酶，最適破碎條件為：超聲功率400W，每次工作時間4s，間歇時間7s，凈工作時間9min。采