獸醫(yī)傳染病試驗

1、實驗二實驗二病料的采集、保存及送檢病料的采集、保存及送檢一、目的一、目的掌握被檢病料的采取、保存、送檢的方法。二、材料二、材料實驗動物（雞）、瓷盤、剪子、鑷子、酒精燈、酒精、接種環(huán)、載玻片、火柴棒等。三、病料的采取三、病料的采取1.采取病料的基本原則(1)采集最適病料理想的病料，應(yīng)是無菌采取的含病原微生物量高的血液、器官組織或分泌物和排泄物。因此要根據(jù)疾病的病性采取合適的病料，如無法估計是何種疾病時，應(yīng)根據(jù)臨床癥狀和病理變化采集病料或全

2、面采取病料。取材時應(yīng)注意病原微生物感染所致疾病的類型(如呼吸道感染疾病、胃腸道感染疾病、皮膚和粘膜性疾病、敗血性疾病等)、病原微生物的侵入部位、病原微生物感染的靶器官等。細(xì)菌檢驗病料應(yīng)當(dāng)是采自未經(jīng)抗菌藥物治療的患病動物，并且應(yīng)多做幾張涂片。(2)適時采集采集病料的時間一般在疾病流行早期、典型病急性期，此時病原微生物的檢出率高；后期由于體內(nèi)免疫力的產(chǎn)生，病原微生物減少，檢測病原微生物比較困難，同時可能出現(xiàn)交叉感染，增加判斷的困難性。在采集

3、供抗體測定用的血清時，可適時地采集急性期和恢復(fù)期的兩份血清樣品，一般兩份血清的間隔時間為14～2ld。內(nèi)臟病料的采取，須于動物死后立即進(jìn)行；夏季最遲不超過4～6h，冬天不超過24h，否則時間過長，由腸內(nèi)侵入其他細(xì)菌，致使尸體腐敗，有礙于病原菌的檢出。供做切片的樣品采取后必須立即投入固定液，否則時間過長，會使細(xì)菌和組織細(xì)胞死亡、溶解，影響檢驗結(jié)果。有條件做現(xiàn)場培養(yǎng)時，剖開尸體后應(yīng)進(jìn)行接種培養(yǎng)，然后采樣，最后剖檢。(3)無菌操作采集病料所用

4、的器械及容器要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒：刀、剪、鑷子等金屬用具可煮沸消毒30min，使用前最好用酒精擦拭，并在火焰上燒一下；器皿（玻制、陶制及琺瑯制等）在高壓滅菌器或干烤箱內(nèi)滅菌；軟木塞和橡皮塞應(yīng)高壓滅菌；載玻片用2%～5%碳酸鈉煮沸消毒5～10min，煮沸后用清水沖洗干凈，拭干保存或浸泡于95%酒精中以備使用；注射器和針頭放于清潔水中煮沸30min即可，或用一次性注射器。病料采取過程都應(yīng)該無菌操作，盡量避免雜菌污染。采取一種病料，使用一套器械，

5、或器械酒精擦拭火焰滅菌后再采取另一種病料；一種病料放入一種容器，不可混放。(4)剖前檢查若有突然死亡或病因不明的尸體，須先采取末梢血液制成涂片，鏡檢，觀察是否有炭疽桿菌存在。若疑似炭疽時，不得進(jìn)行解剖；如需要剖檢并獲取病料時，應(yīng)經(jīng)上級有關(guān)部門同意，選擇合適的場地，做好嚴(yán)格的防范工作，剖后要進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。只有在確定不是炭疽后，方可進(jìn)行剖檢。2.病料采集的方法（1）液體材料一般用滅菌棉拭子采取破潰的膿汁、鼻液、陰道分泌物與排泄物。未破

6、的膿腫、胸水、腹水在皮膚表面消毒后，用無菌注射器抽取。（2）血液無菌采取血液，供病原培養(yǎng)、抗體檢測和血液檢查之用。體型較大的單蹄和偶蹄類動物少量血樣可以從耳背靜脈采血；毛皮動物少量采血可通過耳殼外側(cè)靜中性蒸流水150ml混合分裝后，0.105Mpa高壓滅菌30min（3）10%福爾馬林溶液取福爾馬林10ml加入蒸餾水90ml即成。（4）飽和鹽水溶液取一定的蒸餾水加入純NaCl，不斷攪拌至不能溶解為止（一般為38%～39%左右），然后用濾

7、紙過濾。（5）雞蛋生理鹽水溶液先將新鮮雞蛋的表面用碘酒消毒，然后打開內(nèi)容物傾入滅菌的三角瓶中，加入滅菌鹽水（占總量的10%），搖勻后，用無菌紗布過濾，然后加熱至56～58℃30min，第2d及第3d按上法再加熱一次，即可應(yīng)用。2.常用保存方法（1）液體病料檢查抗體用的血液，不加抗凝劑，待凝血后，分離血清放入青霉素小瓶中。供病原分離培養(yǎng)用的液體病料，同容器一起放入有冰的保溫瓶或4℃冰箱內(nèi)。（2）供細(xì)菌學(xué)檢驗的實質(zhì)臟器若1～2d內(nèi)能送到實驗

8、室，可放在有冰的保溫瓶或冰箱內(nèi)，也可放入滅菌液體石蠟或30%甘油緩沖鹽水內(nèi)。如無冰，也可在保溫瓶內(nèi)放氯化銨500g加水1500ml，使保溫瓶內(nèi)保持O℃左右達(dá)24h。（3）供病毒學(xué)檢驗的實質(zhì)臟器應(yīng)盡快送檢，如不能即刻送檢而需要保存時，必須保持在冷的環(huán)境中，48h內(nèi)送到實驗室。一般放在50%甘油緩沖鹽水溶液或雞蛋生理鹽水溶液中，4℃保存最好，原因是凍化過程能使病毒破壞。如需保存較長時間才能進(jìn)行檢查，最好放在一20℃以下或干冰中保存。（4）病

9、理組織病料采取的病料立即放入10倍體積的10%福爾馬林溶液或95%～100%酒精中，如用10%福爾馬林溶液固定組織時，經(jīng)24h應(yīng)重?fù)Q新鮮液一次。神經(jīng)系統(tǒng)組織（腦、脊髓等），需固定于10%中性福爾馬林溶液內(nèi)（福爾馬林溶液的總?cè)莘e中加入5%～10%碳酸鎂）。在寒冷季節(jié)，為了避免病料凍結(jié)，在運送前，可將預(yù)先固定的病料置于含有30%～50%甘油的10%福爾馬林溶液中。三、病料的送檢病料的送檢供細(xì)菌檢驗用的病料，要防止腐敗，必須及時送檢。一般可用