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文檔簡介
1、實驗四實驗四DNADNA的瓊脂糖凝膠電泳的瓊脂糖凝膠電泳帶電荷的物質(zhì)在電場中的趨向運動稱為電泳。電泳的種類多,應(yīng)用非常廣泛,它已成為分子生物學(xué)技術(shù)中分離生物大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡單、快速、靈敏等優(yōu)點,已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康模赫莆窄傊悄z電泳的原理,學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。熟練DNA電泳的點樣技術(shù)。實驗材料實驗材料:基因組DNA。實驗原理實驗原理:在pH值為8.0~8.3時,核酸分子堿基
2、幾乎不解離,磷酸全部解離,核酸分子帶負(fù)電,在電泳時向正極移動。采用適當(dāng)濃度的凝膠介質(zhì)作為電泳支持物,在分子篩的作用下,使分子大小和構(gòu)象不同的核酸分子泳動率出現(xiàn)較大的差異,從而達到分離核酸片段檢測其大小的目的。核酸分子中嵌入熒光染料(如EB)后,在紫外燈下可觀察到核酸片段所在的位置。實驗步驟實驗步驟:1用膠帶將洗凈、干燥的制膠板的兩端封好,水平放置在工作臺上;2調(diào)整好梳子的高度;3稱取0.24g瓊脂糖于30ml0.5TBE中,在微波爐中使
3、瓊脂糖顆粒完全溶解,冷卻至4550C時倒入制膠板中;4凝膠凝固后,小心拔去梳子,撕下膠帶;7)電泳緩沖液(0.5TBE)的組成及其離子強度影響DNA的遷移率,無離子存在時,核酸基本不泳動,離子強度過大產(chǎn)熱厲害,熔化凝膠并導(dǎo)致DNA變性,一般采用1TAE,1TBE,1TPE(均含EDTApH8.0)。2溴化乙錠(EB)為致癌劑,操作時應(yīng)戴手套,盡量減少臺面污染。3電泳指示劑:核酸電泳常用的指示劑有兩種,溴酚藍(bromophenolblu
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