醫(yī)藥衛(wèi)生hav余

1、甲型肝炎與甲肝減毒活疫苗,浙江普康生物技術(shù)股份有限公司 重慶智飛生物制品有限公司,浙江普康生物技術(shù)股份有限公司位于美麗的西子湖畔，是以浙江省醫(yī)學科學院為技術(shù)依托建立起來的高科技企業(yè)。公司創(chuàng)立于1991年。生產(chǎn)甲型肝炎減毒活疫苗(H2減毒株)凍干粉針劑。,甲型肝炎減毒活疫苗（H2毒株)發(fā)明者、中科院院士、公司董事長毛江森研究員,國際先進水平的生產(chǎn)、檢驗設備,一 概述：,.甲型肝炎是由甲型肝炎病毒HAV（hepatitis

2、A virus）引起的急性傳染性疾病。? 甲型肝炎世界各地都有發(fā)病，年發(fā)病數(shù)>200萬。經(jīng)濟欠發(fā)達國家，特別是熱帶、亞熱帶地區(qū)，幼兒期普遍受感染。? 我國是甲肝高發(fā)的國家，不少地區(qū)甲肝年發(fā)病率>100/10萬。90年代以前全國年發(fā)病60 ~ 100萬例。? 青少年 及兒童是主要的發(fā)病對象。近幾年，成年人的發(fā)病率也呈上升趨勢。,流行特征（1）：,甲肝每5-10年為一個流行周期，冬春季是高發(fā)季節(jié)。甲肝的流行與社會經(jīng)濟的

3、發(fā)達和環(huán)境衛(wèi)生水平密切相關(guān)。甲肝病毒感染率，發(fā)展中國家高，發(fā)達國家低。我國沿海地區(qū)、北方地區(qū)高，南方地區(qū)低。免疫水平低者，當水、食物等被病毒污染時，就比較容易引起流行。,流行特征（2）：,潛伏期和發(fā)病后幾天內(nèi)的糞便和血液有傳染性。甲肝病毒從糞便中排出起始于發(fā)病前1-2周，發(fā)病時達高峰。甲肝的流行通常發(fā)生在人口密集的群體。如幼托機構(gòu)，學校，部隊，廠礦等。病毒可通過人直接接觸或通過被病毒污染的食物、飲水和飲料等傳播；多次發(fā)現(xiàn)生吃貝殼

4、類食物而引發(fā)流行。,全球最嚴重的一次甲肝暴發(fā)流行：,1988年上海甲肝暴發(fā)，集中發(fā)病32萬例，發(fā)病率4082.6/10萬。波及江蘇、浙江等省。 20-39歲年齡占發(fā)病總數(shù)的83.5%。 生食被HAV污染的毛蚶所傳播。,二、甲肝疫苗的種類,1.甲肝滅活疫苗：Merck（默沙東）的Vaqta；GSK（葛蘭素史克）的Havrix；Baster（巴斯德）的Bavition。甲醛滅活（有效的滅活方法）；可誘導產(chǎn)生

5、高水平的血清抗體和陽轉(zhuǎn)率；但無法阻止HAV在消化道內(nèi)的一級繁殖；增加HAV的陰性感染。2.甲肝減毒活疫苗：普康的H2 strain(H2毒株）,長春的 L-A1 strain（L-A1毒株）。安全性好，無毒力返祖；免疫反應全面，保護作用持久；可阻止HAV在消化道內(nèi)的一級繁殖。,二、甲肝疫苗的種類,3.聯(lián)合疫苗：HA-Hb疫苗； HA-Typhoid（甲肝-傷寒）疫苗；毒粒HA疫苗。4.研制中的HA分子疫苗：亞單位疫苗：重組DNA

6、技術(shù)，Vp1, Vp3的載體表達合成肽疫苗：Vp1, Vp2, Vp3 存在構(gòu)象依賴性HAV空殼疫苗：用重組痘苗病毒表達的核殼多聚蛋白量較少。,甲肝減毒活疫苗的研究,甲肝滅活疫苗的研究,甲肝減毒活疫苗的優(yōu)點,活病毒增殖與死抗原刺激的綜合作用活疫苗不但能產(chǎn)生體液免疫（抗體），還能誘導產(chǎn)生細胞免疫.活疫苗有很強的免疫回憶反應?；钜呙绫Ｗo作用持久。（實際觀察已達15年以上）,三、甲肝活疫苗的安全性,基因序列的改變H2株與野毒株的生

7、物學特征不同疫苗株口服感染能力的減弱與喪失無毒力返祖。局部接種反應輕微，無明顯不良反應無疫苗接種相關(guān)病例，已觀察15年以上,,甲型肝炎病毒（Hepatitis A Virus ) 顆粒由60個衣殼蛋白組成20面立體對稱結(jié)構(gòu),60個衣殼蛋白,小核糖核酸病毒,無細胞壁二十面體,單個衣殼蛋白結(jié)構(gòu),單股RNA,1、H2疫苗株的減毒基因表現(xiàn),,2、疫苗病毒的遺傳穩(wěn)定性

8、 ---核苷酸序列測定,3、 甲肝病毒野毒株與H2疫苗株的特性比較,接種H2株疫苗感染途徑改變，口服感染能力減弱或消失,4、疫苗株毒力返祖試驗,在人二倍體細胞中于36 0C傳5代; 37 0C傳8代; 35 0C傳11代;猴體內(nèi)傳3代;疫苗接種者排出病毒;疫苗接觸者排出病毒,疫苗株毒力返祖試驗,樣品來源 接種猴體毒力測定

9、 癥狀 血清肝功能 肝臟病理改變疫苗接種者排出-- -KMB17細胞傳代:-- - 36 0C傳5代-- - 37 0C傳8代-- - 35 0C傳11代-- -猴體內(nèi)傳3代 -- -,疫苗株毒力返祖試驗,結(jié)果: 無發(fā)病和明顯肝

10、功能改變 無肝臟病理變化 無毒力返祖現(xiàn)象結(jié)論: 疫苗對人對環(huán)境無害,H2株甲肝活疫苗在中國使用15年，接種人群大于1億，沒有發(fā)現(xiàn)任何類甲肝病例，流行病學證明，沒有因接種甲肝活疫苗而發(fā)生甲肝病例。,舉例如下：1、大規(guī)模人體安全性觀察(九五研究) 接種觀察26萬人，未有全身及局部副反應2、接種一億人份，無明顯不良反應3、浙江省嵊泗縣、椒江市約14萬人，接種15年追蹤觀察，沒有發(fā)現(xiàn)甲

11、肝疫苗接種相關(guān)病例。,四、甲肝減毒活疫苗先進的生產(chǎn)工藝,人二倍體細胞生產(chǎn)（KMB17 Cell Line)提取和純化，純化的活疫苗疫苗保護劑不含人血白蛋白（國家專利，避免來自血液制品的安全風險）,甲肝活疫苗后處理工藝,純化的必要性：細胞內(nèi)增殖。純化的方法：物理+化學。純化的結(jié)果：牛血清白蛋白低于規(guī)程標準； 雜蛋白大幅減少；

12、 滅活可能存在的其它病原體。,甲肝活疫苗（H2株）2002 – 2003年牛血清蛋白含量(本結(jié)果為中國生物制品檢定所抽檢結(jié)果）,五、甲肝減毒活疫苗的有效性,抗體陽轉(zhuǎn)率免疫效果疫苗接種率與甲肝發(fā)病率的關(guān)系免疫回憶反應,甲肝疫苗H2株接種后抗HAV-IgG陽轉(zhuǎn)率,浙江省紹興縣前瞻性研究4年觀察結(jié)果（1991-1994）,大規(guī)模人群考核 （國家九五攻關(guān)課題）,疫苗：H2株，浙醫(yī)科院普康，滴度10 7.0 TCID50

13、 研究現(xiàn)場：上海、河北省八個縣、石家莊市等地方法：個體隨機分組研究： 非篩選研究13.5萬人； 篩選易感者研究1.6萬人。

14、 整群隨機分組研究： 接種組19.1萬人；對照組16.8萬人。 共約50萬人的大現(xiàn)場流行病學考核。,甲肝活疫苗保護效果,甲肝疫苗接種率與發(fā)病率之間的相關(guān)性 ( 浙江省，嵊泗縣， 1-15歲兒童組 ),甲肝疫苗接種率與甲肝發(fā)病率的相關(guān)性---1 -15歲兒童，椒江區(qū),甲肝活疫苗免疫回憶反應,免疫回憶反應對于免疫保護的持久

15、性和有效性來說是非常重要的，記憶性B細胞的存在和IgG抗體的特異性，確保了再次暴露于同一種抗原的二次反應比第一次反應更快速和有效。,七、關(guān)于活疫苗的免疫持久性,在免疫學機理上，接種活疫苗可持久免疫甲肝活疫苗實際觀察免疫保護作用15年以上。甲肝活疫苗與滅活疫苗的對比研究中，更具優(yōu)越性,甲肝活疫苗與滅活疫苗的對比研究,活疫苗與滅活疫苗均有較好的免疫效果, 二者幾何平均滴度(GMT) 水平相當甲肝活疫苗免后2周抗體陽轉(zhuǎn)率及GMT顯著高于

16、滅活疫苗甲肝活疫苗遠期保護效果好, 免后24月抗體滴度無明顯下降.活疫苗細胞免疫功能持久而明顯 (免后2月淋巴細胞轉(zhuǎn)化率高, 下降緩慢) 在甲肝流行期間, 活疫苗具有更好的應急保護效果*文獻（北京CDC):甲肝滅活疫苗與減毒活疫苗對不同人群免疫效果的研究. 中國計劃免疫, 2002, 8(5):254-257.),甲肝減毒活疫苗加強免疫能誘導很好的免疫回憶反應, 其免疫學效果與史克

17、滅活疫苗相當. 中華醫(yī)學雜志, 2000, Vol.80, No.6.,凍干甲肝疫苗的應用,凍干甲肝減毒活疫苗是在液體甲肝減毒活疫苗基礎研究, 臨床考核及大規(guī)模流行病學考核取得顯著的免疫保護效果的基礎上, 研制成功的新劑型疫苗.,凍干甲肝減毒活疫苗H2株,生產(chǎn)工藝獲國家專利, 達到國際先進水平進口的疫苗生產(chǎn)線國內(nèi)第一個向世界衛(wèi)生組織申報的甲肝疫苗第一個在國外（印度）完成注冊，成功出口 的疫苗,凍干疫苗的優(yōu)點,提高了

18、疫苗的穩(wěn)定性 血清陽轉(zhuǎn)率可達100% GMT 水平: 從 127-212 mIU/ml 到 280-1607 mIU/ml保持有效期: 從5個月提高到18個月 減少反復凍融對活疫苗感染性滴度的影響. 利于儲運,便于大規(guī)模推廣使用.使用方便，只需注射一針就可獲得持久保護。,凍干疫苗的安全性,?基因結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性: 基因組穩(wěn)定,同源性高達99.5% 抗原決定簇不變, 只有基因亞型的改變?基因序列分析：基因發(fā)生

19、變異，不同于野毒株.?使用經(jīng)過純化,傳代的二倍體細胞, 符合WHO的要求 ?穩(wěn)定劑不含任何污染因子? 動物及猴體試驗：無肝細胞損傷。? 人體接種觀察表明，無明顯不良副反應, 未有全身及局部副反應。,凍干甲肝活疫苗 (H2株)人體接種反應觀察,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）不引起人體接種部位局部反應和其他不良的全身反應。 * 2例為一過性體溫37.7C0, 隨后正常.,凍干甲肝減毒活疫苗(

20、H2株） 人體接種反應觀察,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）免后二個月 血清ALT無異常，抗體反應良好。,凍干疫苗接種后肝功能SGPT檢測,Examine objects:檢測對象；Abnormal objects:出現(xiàn)不正常者,免疫原性強,凍干甲型肝炎減毒活疫苗（H2株）具有高度免疫原性，注射一針血清陽轉(zhuǎn)率為100%。,凍干甲肝減毒活疫苗（H2株）免后抗體水平測定,注: (1) * 示數(shù)據(jù)引自中檢所對批號G

21、990225凍干苗（H2株）臨床研究報告。 (2) *血清標本同時由中檢所和浙江醫(yī)科院病毒所同時檢測 。,結(jié)果表明,1. 凍干苗一針免疫程序，免后二個月抗體反 應達到高峰值，免后13個月該高峰值仍然 保 持不變。2. 與液體劑型苗對照組相比，凍干劑型苗抗 體滴度高于液體劑型苗數(shù)倍。,幾種甲肝疫苗免后抗體水平的比較,穩(wěn)定性好,凍干甲肝減毒活疫苗, 具有良好的穩(wěn)定性。在4-8℃條件

22、下存放21個月疫苗病毒CCID50/ml不變.,四個批號凍干甲肝減毒活疫苗 4-8 ℃保存穩(wěn)定性測定,凍干甲肝減毒活疫苗37℃保存熱穩(wěn)定性試驗,5個不同批號的凍干甲肝減毒活疫苗，放置37 ℃恒溫箱7天, 4℃冰箱存放苗作為原始滴度對照苗，檢測甲肝病毒細胞感染性滴度。(見下表),凍干甲肝減毒活疫苗37℃保存穩(wěn)定性測定,結(jié)果表明：凍干甲肝減毒活疫苗37℃放置7天，細胞感染性滴度平均下降為0.38CCID50/ml。 (國

23、家標準≤1.0 CCID50/ml),接種方法,臨用前用1.0ml滅菌注射用水溶解,上臂外側(cè)三角肌附著處，皮膚消毒待干后，皮下一次注射。,貯存、運輸及有效期,于8℃以下避光保存和運輸有效期18個月,接種時注意的問題,局部紅、腫、熱、痛一般72小時內(nèi)自行緩解注射時不要使消毒劑接觸疫苗 （待酒精揮發(fā)干）接種疫苗時避免空腹,特殊人群的免疫,對慢性乙肝病人肝功能正常者及HBsAg陽性攜帶者可以接種對TB 穩(wěn)定期病人可以接種對孕