病毒的傳分析

1、Chapter 5,病毒的遺傳分析 Genetic Analysis of Virus,病毒(virus)既不同于原核生物，也不居于真核生物，因?yàn)樗鼈儧]有一般的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。在病毒中沒有合成蛋白質(zhì)外殼所必需的核糖體，所以只能寄生在動(dòng)物、植物和細(xì)菌的細(xì)胞內(nèi)繁殖，它能使宿主細(xì)胞的機(jī)構(gòu)轉(zhuǎn)而合成它自身新的病毒物質(zhì)。盡管病毒能形成晶體，自身不能進(jìn)行代謝等，但仍將病毒視為生物，因?yàn)樗鼈兡軌蚍敝场?病毒離開宿主細(xì)胞雖然不能繁殖，但仍可以存活

2、。根據(jù)宿主細(xì)胞的不同而將病毒分為動(dòng)物病毒、植物病毒和細(xì)菌茵病毒3種。細(xì)菌病毒又稱噬茵體(phage)。,根據(jù)宿主不同，可以分為：動(dòng)物病毒植物病毒細(xì)菌病毒-----噬菌體（bacteriophage, phage),,,,冠狀病毒,,SARS病毒為單鏈（+）RNA病毒，全長29.725kb,具有11個(gè)ORF（Open Reading Frames），分別編碼：依賴于RNA的RNA聚合酶、4種結(jié)構(gòu)蛋白（S，E，M，N蛋白）、5種未知蛋

3、白（圖5）。與其它宿主來源冠狀病毒的序列比較，進(jìn)化分析，呈一單獨(dú)的分支。病毒在增殖過程中雖沒有逆轉(zhuǎn)錄過程，但RNA聚合酶沒有矯正機(jī)制，變異較大，SARS的變種很多。,Phage T4,研究最為廣泛的是T噬菌體：,Viruses - non-living particles -reproduce only within a hostVirus has protein coat + nucleic acid core- ssDNA, d

4、sDNA, ssRNA, dsRNA - may be linear or circular moleculeViral genome integrated into host genome or separate,病毒的一般特性：,病毒在遺傳學(xué)研究中的優(yōu)越性 :1、繁殖快, 世代短。 病毒一小時(shí)可繁殖百個(gè)。2、易于培養(yǎng)化學(xué)分析。 一個(gè)試管可裝很多; 易于獲得大的數(shù)量用于分析。 3、遺傳物質(zhì)簡單, 只含裸露DNA或RNA。適

5、用基因結(jié)構(gòu)和功能研究。4、便于研究基因突變。 5、便于研究基因的作用。 6、可用作研究高等生物的簡單模型。,第一節(jié) 噬菌體的繁殖和突變型,一、噬菌體的形態(tài)結(jié)構(gòu),1. 噬菌體的形態(tài),（1）20面體，無尾,PM-2,（2）20面體，有尾,SPO1,（3）絲狀,M13,2. 幾種噬菌體的染色體特點(diǎn),,,3. T4 噬菌體的結(jié)構(gòu),,二、噬菌體的生活周期,1. 噬菌體吸附到宿主細(xì)胞上,2. 尾絲鞘收縮，中軸刺穿宿主細(xì)胞,

6、3. 頭部的DNA被送入宿主細(xì)胞,4. 在數(shù)分鐘內(nèi)，所有的細(xì)菌核酸和蛋白質(zhì)合成都被抑制。,5. 噬菌體大分子合成，細(xì)菌的核酸被降解。,,（1） 噬菌體DNA復(fù)制。,（2） 噬菌體外殼蛋白合成。,(1) DNA被包到頭部,(2) 組裝尾部,(3) 裝上尾絲,6. 噬菌體組裝,約200個(gè)噬菌體導(dǎo)致細(xì)菌被噬菌體基因編碼的溶菌酶（lysozyme)溶解。,7. 宿主細(xì)胞破裂,二、噬菌體的繁殖,1951年，J. Lederberg 的妻子Esth

7、er lederberg證明了Lederberg和Tatum使用的K12 E.coli中含有原噬菌體，并命名為?。 10年后終于搞清了溶源化的實(shí)質(zhì)。,二、噬菌體的繁殖,1．烈性噬菌體（virulent phages） 概念：感染細(xì)菌后立即在菌體內(nèi)復(fù)制和合成蛋白質(zhì)外殼，重新組裝成噬菌體顆粒，并導(dǎo)致細(xì)菌細(xì)胞解體，釋放出噬菌體。繁殖：吸附在特異的受體上→酶→細(xì)胞壁形成微孔→注入核酸→停止細(xì)菌的代謝→合成phage的成分→裂解

8、，釋放。,烈性噬菌體溶菌,,2. 溫和噬菌體（temperate phage）,溫和噬菌體感染細(xì)菌后，將自己的DNA整合到細(xì)菌的染色體DNA中，形成原噬菌體（prophage)，這一過程稱為溶源化（lysogenization)。,整合到細(xì)菌染色體的噬菌體DNA隨細(xì)菌的染色體復(fù)制而復(fù)制。經(jīng)過若干世代后才從寄主的染色體上脫離下來復(fù)制和合成噬菌體蛋白，組裝成新的噬菌體，并導(dǎo)致菌體細(xì)胞裂解。,溫和型噬菌體（temperate phage）

9、： 具有裂解和溶源兩種途徑 ： (1)裂解途徑：和烈性噬菌體相同,,,溫和噬菌體溶源,,(2)溶源途徑：溶源周期經(jīng)誘導(dǎo)進(jìn)入裂解周期。,?噬菌體的生活史,λ噬菌體：噬菌體侵入后，細(xì)菌不裂解,附在E.coli染色體上的gal和bio位點(diǎn)間的attλ座位上,通過交換整合到細(xì)菌染色體，并能阻止其它λ噬菌體的超數(shù)感染。,②P1噬菌體：不整合到細(xì)菌的染色體上，而是獨(dú)立存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。　　原噬菌體：整合到宿主基因組中的噬菌體。僅少數(shù)基因活動(dòng)，表

10、達(dá)出阻礙物關(guān)閉其它基因。原噬菌體經(jīng)誘導(dǎo)可轉(zhuǎn)變?yōu)榱倚允删w 裂解途徑。,P1和λ噬菌體的生活周期特性,,3、溶源性： 有些細(xì)菌帶有某種噬菌體，但并不立即導(dǎo)致溶菌，這種現(xiàn)象稱為溶源性，具有溶源性的細(xì)菌稱為溶源性細(xì)菌（lysogenic bacteria），受溫和噬菌體感染的細(xì)菌，幾乎都成為溶源菌。在細(xì)菌中處于潛伏狀態(tài)的噬菌體稱為原噬菌體（prophage）或原病毒（provirus），帶有原噬菌體的細(xì)菌稱溶源性細(xì)菌（l

11、ysogenic bacterium），失去原噬菌體的細(xì)菌和為非溶源性細(xì)菌（non－lysogenic bacterium）。,溶源性細(xì)菌有兩個(gè)重要特性: (1)免疫性： 原噬菌體產(chǎn)生一種陰遏蛋白，抑制同類噬菌體DNA的復(fù)制，因而能抵抗同類噬菌體的超感染。 (2)可誘導(dǎo)性： 自發(fā)――萬分之一； 紫外線或絲裂霉素90%。,,三、噬菌體的突變型,噬菌斑（plaque）：由于噬菌體的侵染，使細(xì)菌細(xì)胞裂解，有菌落上出現(xiàn)的一些園形而清亮的小

12、洞。 1、快速溶菌突變體 (1)野生型r+形成小的噬菌斑1mm，周邊有朦朧的光環(huán)。 原因 ：有兩個(gè)以上的噬菌體侵染一個(gè)細(xì)菌時(shí)，出現(xiàn)溶菌阻礙現(xiàn)象，混有裂解和未裂解的細(xì)胞。 (2)快速溶菌突變體r（rapid lysis）形成大的噬菌斑2mm，邊緣清晰。 原因：無溶菌阻礙現(xiàn)象。 (3)鑒別：噬菌斑大小。,2、寄主范圍突變體,(1)野生型h+ 能感染野生型的大腸桿菌Ttos，但不能感染Ttor (2)突變型h 對(duì)Ttos

13、和Ttor都能感染。 (3)鑒別 ：混合Ttor 和 Ttos ，野生型h+出現(xiàn)混濁噬菌斑，突變型出現(xiàn)清亮噬菌斑。 (4)噬菌體與細(xì)菌的關(guān)系—侵染與抗性。,部分溶菌,,3、條件致死突變體,所謂條件致死突變型，就是在某些條件下，這些突變型是致死的，那么這些條件就稱為限制條件(restrictive condition)；而在另一些條件下仍可進(jìn)行繁殖，從而得以擴(kuò)增進(jìn)行研究，所以這些條件稱為許可條件(permissive conditio

14、n)。,常用的有兩大類條件致死突變：,（1）“溫度敏感”突變(temperature sensitive mutation),（2）“抑制因子敏感”突變(suppressor-sensitive mutation, sus),（1）“溫度敏感”突變(temperature sensitive mutation)： 野生型噬茵體能在很大的溫度范圍內(nèi)感染宿主并進(jìn)行繁殖。 ①熱敏感突變型(heat sensitive mutants，ts

15、)：通常在30℃(許可條件)感染宿主進(jìn)行繁殖，但在40一42℃(限制條件)條件下就是致死的，不能形成噬菌斑； ②冷敏感突變型(cold sensitive mutation，cs)：在較低溫度下就是致死的。,原因：溫度敏感性幾乎總是一種突變的結(jié)果，基因突變后所編碼的蛋白質(zhì)中有一個(gè)氨基酸的替換，而這種蛋白質(zhì)在“限制溫度”下不穩(wěn)定而喪失活性。,（2）“抑制因子敏感”突變(suppressor-sensitive mutation, sus

16、)： 實(shí)質(zhì)是原來正常的密碼子變成了終止密碼子，因而翻譯提前終止，不能形成完整肽鏈而產(chǎn)生有活性的蛋白質(zhì)，屬于無義突變（nonsence mautation）。帶有sus突變的噬菌體在感染一種帶有抑制基因(suppressor, su＋)(許可條件)的宿主菌時(shí)能產(chǎn)生子代，但在感染另一種沒有抑制基因(su－)(限制條件)的宿主菌時(shí)，不能產(chǎn)生子代。野生型噬菌體在這兩種宿主中都能產(chǎn)生子代。 sus突變不像“宿主

17、范圍突變”那樣影響噬菌體對(duì)宿主的吸附，這種突變的噬菌體能正常地吸附、注入自身的DNA，殺死宿主細(xì)胞，但不產(chǎn)生子代。,（1）抑制因子敏感突變的概念：例如：噬菌體mRNA基因 細(xì)菌tRNA基因反密碼子 正常 突變 突變 正?；颍?`TAC 3`?5`TAG 3` 3`ATC 5`?3`ATG 5` ? ? ? ?

18、mRNA 5`UAC 3` 5`UAG 3` 3`AUC 5` 3`AUG 5` ? ?表型：酪氨酸 終止 5`UAG 3`,,?酪氨酸,?酪氨酸,3`AUC 5` ?酪氨酸,表5-2攜帶不同專一性抑制基因宿主中sus突變噬菌體的表現(xiàn),（2）噬菌體的抑制因子敏感突變型類型及表現(xiàn) 琥珀型（amber）UAG 赭石型（ocher）UAA 乳白型（op

19、al） UGA,sus突變分為三類；,,無義抑制基因（su＋）實(shí)質(zhì)：tRNA基因發(fā)生了突變，例如琥珀型抑制基因‘su3＋’在UAG密碼于上插入了一個(gè)酪氨酸，這是因?yàn)閠RNA加基因的反密碼子的一個(gè)突變，tRNATry，正常的反密碼于是GUA，它按擺動(dòng)規(guī)則譯讀酪氨酸密碼子UAU(C)?！畇u3＋’菌株的tRNATry含有反密碼子CUA，它識(shí)讀琥珀型密碼子UAG，并插入酪氨酸而防止終止。,（二）無義突變與無義抑制突變,無義突變：指一個(gè)為氨基酸

20、編碼的密碼變?yōu)榻K止密碼的突變。 無義抑制突變：指能抑制無義突變表現(xiàn)的突變。,四、噬菌斑分析（The plaque assay）,1. 噬菌斑（plaque）,噬菌體感染固體培養(yǎng)基上的菌苔（lawn），溶菌后形成的圓形清亮的斑。,,Opaque lawn of bacteria,Clear areas of plaque,2. 噬菌體濃度的測(cè)定方法,（1）逐步稀釋原溶菌液（10-1、10-3、10-5、 10

21、-7）,（2）感染平板培養(yǎng)基上的細(xì)菌菌苔（lawn）,（3）計(jì)數(shù)形成的噬菌斑,（4）計(jì)算原溶菌液中的噬菌體數(shù)目。,公式：,噬菌斑數(shù)/mL×稀釋倍數(shù),原始噬菌體濃度=,23×105,,,,10ml,原始濃度：,,phages/ml,?噬菌體感染E.coli,第二節(jié) 噬菌體突變型的重組實(shí)驗(yàn),一、T2突變型的兩點(diǎn)測(cè)交,但10年未引起重視！,（1）1936年F.M.Burnet發(fā)現(xiàn)了噬菌體能產(chǎn)生突變體，形成的噬菌斑的外形與野

22、生型噬菌體的噬菌斑有明顯的區(qū)別。,（2）Hershey和Luria的發(fā)現(xiàn),1946年第11屆冷泉港會(huì)議上Hershey和Luria宣布發(fā)現(xiàn)噬菌體r、h突變，Delbruck和Hershey發(fā)表了噬菌體重組。,三人獲1969年Nobel prize（生理或醫(yī)學(xué)）,① 噬菌斑的形態(tài)：,② 宿主范圍：,h：噬菌體能在E.coli B和B/2品系上生長,h+：只能在E.coli B品系上生長。,（3）Hershey使用兩個(gè)表型特征,能在B和B/

23、2混合菌苔上產(chǎn)生透明斑。,能在B和B/2混合菌苔上產(chǎn)生半透明斑。,r：,快速溶菌，噬菌斑大，邊緣清楚。,噬菌斑小，邊緣模糊。,r+：,噬菌斑與基因型,B和B/2混合菌苔,（4）、噬菌體雜交,①. 親本噬菌體（T2）基因型,hr+：透明，小斑，邊緣模糊,h+r：半透明，大斑，邊緣清楚，,②雜交過程——混合感染實(shí)驗(yàn),兩個(gè)親本噬菌體混合感染E.coli B和B/2，觀察菌苔上出現(xiàn)的噬菌斑特征。推斷噬菌體的基因型。,mixed infectio

24、n experiments,混合感染（mixed infection）,E.coliB或B/2,T2 phage,,,（5） 雜交結(jié)果,在B和B/2混合菌苔上出現(xiàn)了4種噬菌斑。,,半大,半小,透小,透大,（6） 重組機(jī)理,,,,,,,h+r,,h+r,,h+r,,h r+,,h r+,,h r+,,,,,,,h+r,,h+r,,h+r,,hr+,,hr+,,h r+,噬菌體染色體在細(xì)菌體內(nèi)復(fù)制,不同的噬菌體染色體在細(xì)菌體內(nèi)交換重組,,,

25、,,,,h+r,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,h+r,,,,,,,,,h+r+,,h+r,,h+r,,hr+,hr+,,h r,,,,,,,h+r,,,,,,,,,,,,,,,,,,h+r+,,h+r,,h r+,h r,,,,,h+r,,,,,,,,,,,,釋放出的4種子代噬菌體,部分噬菌體DNA重組,,,（7）噬菌體重組值與基因作圖,①重組值的計(jì)算,重組噬菌體的噬菌斑數(shù),總噬菌斑數(shù),,×100%,②基因圖距,用

26、兩個(gè)基因的重組值表示基因間的遺傳距離。,,（h+r+ + hr）,,total plaques,×100%,,Hershey和Rotman1949年的T2雜交結(jié)果,,,,r,h,24,,,,（8）、T2噬菌體的遺傳圖,①Hershey的迷惑,a. Hershey后來分離出多種突變的T2 噬菌體：,r1、r7、r13,b.詳細(xì)的雜交分析,,用hr的不同突變體雜交，計(jì)算h與不同r之間的重組值并繪制遺傳圖。,h與不

27、同r之間的重組值,,,,r1,h,24,,,,,,r7,h,13,,,,,,r13,h,1.7,,,h與不同r之間的位置關(guān)系,,,,r1,h,,r7,,r13,,,,r1,h,,r7,,r13,,,,r1,h,,r7,,r13,,,,r1,h,,r7,,r13,,4種可能,進(jìn)一步雜交確定各r之間的位置,r13r7+ × r13+r7,h r13r7,,排列結(jié)果,,,,,r1,h,,r7,,r13,,,,r1,h,,r7,,r1

28、3,或？,,到底是那種排列？,②Streisinger和Edgar的判斷,10年后（1964），G. Streisinger和Edgar研究了噬菌體的很多標(biāo)記基因的雜交重組，才判斷出T2噬菌體的遺傳圖是環(huán)形的。,,,,,,h,r1,r7,r13,二、T4噬菌體突變型的三點(diǎn)測(cè)交,噬菌體也能進(jìn)行三點(diǎn)測(cè)交（06A/9/4）突變型：小噬菌斑(m)、快速溶菌®、渾濁溶菌班(tu),往往,M 12.9

29、 R 20.8 tu,,,,,三 ?X174突變型的兩點(diǎn)和三點(diǎn)測(cè)交 P127,(一) ?X174的兩點(diǎn)測(cè)交 ——兩個(gè)琥珀突變型間雜交 amA x amB ? su+,,su+: amA、amB

30、 su-,,,,,,,,,,基因型：amA- amB+ amA+ amB- amA+ amB+ amA+ amB+ amA- amB- A+B+ X 2 amA-amB間重組值： X 100% su+:amA、amB總數(shù),,許可條件:只有在這種均中才能產(chǎn)生子代,,,重組類型,,兩個(gè)不同抑制因

31、子敏感突變型間的雜交 sus amber x sus opal ?,,,,,,,,,,,限制條件：su+amber、opal su-,基因型：amb-opal+ amb+opal- amber+opal+ amb+opal+ amb-opal-,su+amber；su+opal,10-6 10-2,P128 表5-6

32、?174突變型之間雜交觀察到的雙因子重組率,(二)?X174的三點(diǎn)測(cè)交,1 確定三個(gè)基因的順序的前提條件 只有兩種可能順序的條件下進(jìn)行； 例如：要確定amA、amB、tsC三基因的順序 已知：amA與amB較近，amA和amB離tsC都較遠(yuǎn)； 三個(gè)基因順序有： 或：amA amB tsC 或：tsC amA amB 不存在：amA tsC am

33、B,2 確定三個(gè)基因的順序原理: 雜交：amA + tsC X + amB + ? amA + tsC + amB + ? P127 圖5-4,,,如果基因

34、順序是: amA amB tsC 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)是: + + tsC為大類，+++為小類 圖5-4 (正交順序I或反交順序I),如果基因順序是: tsC amA amB 實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)是: + + + 為大類， tsC + + 為小類 圖5-4 (正交順序II或反交順序II),四 噬菌體基因重組的特點(diǎn) P130,四、烈性噬菌體的遺傳體制,①噬菌體在雜交中，每個(gè)親代對(duì)子代所提供的遺傳貢獻(xiàn)取決于感染細(xì)

35、菌時(shí)每種親代噬萄體的相對(duì)數(shù)量；     ②噬菌體的基因重組是發(fā)生在噬菌體的DNA復(fù)制以后，重組型和親本型一起復(fù)制； ③噬菌體不同基因型之間可以發(fā)生多次交換； ④在噬菌體中基因重組頻率可以隨著宿主細(xì)胞裂解時(shí)間的延長而增加，直到DNA與外完蛋白裝配成為完整的噬菌體時(shí)，重組才停止。 因此噬菌體雜交時(shí)，應(yīng)該注意： ①控制每種親代噬菌體基因型的投放量： ②控制允許發(fā)生復(fù)制和重組的時(shí)

36、間。只有控制這兩個(gè)因素并在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行雜交所得重組頻率才能用于繪制近似的遺傳圖。,第三節(jié) 噬菌體突變型的互補(bǔ)試驗(yàn),一?X174條件致死突變型的互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)(一) ?X174 DNA結(jié)構(gòu)復(fù)制 圖5-1 (二) ?X174的突變型與互補(bǔ)測(cè)驗(yàn) 1 互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)原理 在限制條件下，能長出噬菌斑： 說明：兩個(gè)突變型能發(fā)生功能互補(bǔ)，是兩個(gè)基因。 在限制條件下，不能長出噬菌斑： 說明：兩個(gè)突變型不能發(fā)生功能互補(bǔ)，是同

37、一基因。,,,,2 互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)及結(jié)果,P124 表5-4 ?X174突變的互補(bǔ)測(cè)驗(yàn)結(jié)果 順反子 突 變 型 A am8,am18,am30,am33,am35,am50,am86,tsl28, B am14,am16,och5,ts9,tsl16,och1,och8,och11, C och6 D am10,amH81, E am3,am6,am27, F am87,am88

38、,am89, amH57,op6, op9,tsh6,ts41D G am9,am32,ts,ts79 H amN1,am23,am80,am90,ts4,二 T4突變型的互補(bǔ)試驗(yàn),第四節(jié) ?噬菌體基因組與原噬菌體一 ?噬菌體的基因組：由49000bp構(gòu)成 1 基因分類 頭部基因： 7個(gè)（必需基因：相鄰） 尾部基因： 11個(gè)（必需基因：相鄰）

39、 噬菌斑形成必需的基因 復(fù)制所需基因：O、P 裂解、釋放所需基因：S、R基因 正調(diào)控基因：N、Q 附著區(qū)：att； 專一性重組所必需：int、xis 噬菌斑形成非必需的基因 溶源化所需：

40、CI、CII、CIII 重組所必需：exo、red,,,,,P133 圖5-6,Λ噬菌體的包裝過程,,Λ噬菌體的基因組,2 ?噬菌體基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn):二 ?原噬菌體與合子誘導(dǎo) 1 ?原噬菌體： 2 合子誘導(dǎo)： Hfr(λ)X F-→受體菌裂解(λ進(jìn)入F-后),,b+,原點(diǎn),λ,d+ c+,a+,3 合子誘導(dǎo)與整合部位的確定,Jacob和Wollman（195

41、6年）發(fā)現(xiàn)了合子誘導(dǎo)（zygotic induction）現(xiàn)象，并利用合子誘導(dǎo)確定了幾個(gè)E.coli染色體上原噬菌體的整合位點(diǎn)。他們發(fā)現(xiàn)Hfr（λ）×F－所得到的重組子頻率要比Hfr×F－（λ）或Hfr（λ）×F－（λ）要低得多。這是由于在Hfr（λ）×F－的雜交中，原噬菌體進(jìn)入無阻遏物的受體細(xì)胞質(zhì)中，進(jìn)行大量復(fù)制使受體細(xì)胞裂解，因此不易得到重組子，此現(xiàn)象就稱為合子誘導(dǎo)?，F(xiàn)在我們?cè)倩剡^頭來查閱一下

42、傳遞等級(jí)作圖，中斷雜交實(shí)驗(yàn)以及重組作圖都是采用Hfr×F－（λ）就是不致產(chǎn)生合子誘導(dǎo)的緣故。,第四節(jié) ?噬菌體基因組與原噬菌體,λ噬菌體整個(gè)基因組如圖所示，可分為三個(gè)部分， ①左臂：從A到J長約20kb，其中的基因編碼構(gòu)成頭部、尾部、尾絲對(duì)組裝完整噬菌體所需要的蛋白質(zhì)。②中段：長約20kb，是λDNA整合和切出，溶原生長所需的序列。③右臂：長約10kb，是調(diào)控區(qū)，控制溶菌和溶原生長最重要的調(diào)控基因和序列、以及λDNA

43、復(fù)制起始均在這區(qū)域內(nèi)。左右臂包含λDNA復(fù)制、噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白合成、組裝成熟噬菌體、溶菌生長所需全部序列；對(duì)溶菌生長來說，中段是非必需的。,三 原噬菌體的插入與切除,1 原噬菌體的插入與正常切除 P135 圖 5-7 2 原噬菌體的異常切除 P135 圖5-8 （1）轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體：指帶有細(xì)菌基因的噬菌體。 （2）?d 轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的特點(diǎn)：3 溫和性性噬菌體的互補(bǔ)試驗(yàn)與作圖 (1)與眾多已知位點(diǎn)的點(diǎn)突變作互補(bǔ)試驗(yàn)，確定缺

44、失區(qū)域 P136(2)用眾多已知缺失區(qū)域的缺失品系對(duì)點(diǎn)突變進(jìn)行缺失作圖,整合態(tài),,,,,,,,attP,?dgal1?dgal2 ?dgal3 ?dgal4 ?dgal5,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,A,B,E,G,H,M,第五節(jié) 環(huán)狀排列與末端重復(fù),一 線狀DNA具有環(huán)狀遺傳圖 1 噬菌體DNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：具末端重復(fù)（末端冗余） 末端冗余:指DNA分子兩端核苷酸順序相同的現(xiàn)象.

45、 致環(huán)交換：指基因在遺傳圖上呈環(huán)狀排列。 2 末端重復(fù)的實(shí)驗(yàn)證據(jù) 圖5-11 3 基因呈環(huán)狀排列的實(shí)驗(yàn)證據(jù) P138 圖5-12二 環(huán)狀排列與末端重復(fù)的形成 1 基因的環(huán)狀排列 圖5-13（A） 2 末端重復(fù)雜合子的形成 圖5-13（B）,,,,,,,,,,,,,環(huán)狀排列與末端冗余,環(huán)狀排列： T2或T4 DNA分子的核苷酸排列雖然是不變的，但從哪一個(gè)核苷酸開始則有種種可能。末端冗余： T2或T4 DNA分