麝香保心丸治療性血管新生和系統(tǒng)生物學(xué)研究新

1、1,麝香保心丸：治療性血管新生和系統(tǒng)生物學(xué)研究Therapeutic Angiogenesis and the Systems Biologic Research of SXBX Pill,2,冠心病的治療，要解決血氧供需平衡，不是減少心肌耗氧，就是增加冠脈供血血管新生背景與概念血管新生的研究方法促進(jìn)治療性血管新生的方法麝香保心丸促血管新生研究,提 要,3,治療性血管新生研究背景,Folkman在1970年代早期發(fā)

2、現(xiàn)血管新生：腫瘤生長(zhǎng):血管生長(zhǎng)因子與血管新生相關(guān)1983年, Kumar 等發(fā)現(xiàn)：心肌梗塞后有“血管生長(zhǎng)因子” 1980年代中期，確定并純化了多種與血管新生有關(guān)的多肽1994年 Jeff Isner’s 實(shí)驗(yàn)室倡導(dǎo)將血管生成用于心血管研究中。Ellis Unger’s 實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)應(yīng)用促血管生成的蛋白質(zhì)可以改善冠脈側(cè)支。,Judah Folkman （1933-2008）美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院士，于70年代提出了腫瘤新生血管學(xué)說(shuō)，

3、該理論后被心血管領(lǐng)域應(yīng)用于促血管新生研究,4,側(cè)支血管形成的種類,微血管生長(zhǎng)（Angiogenesis）血管發(fā)生（Vasculogenesis）動(dòng)脈生成（Arteriogenesis） 三者的機(jī)理是不同的,5,血管新生(angiogenesis),相當(dāng)于廢墟上重建 在缺血區(qū)域現(xiàn)有血管基礎(chǔ)上通過(guò)芽生(sprouting)、分枝方式形成成熟的血管，由初級(jí)網(wǎng)狀血管結(jié)構(gòu)到復(fù)雜網(wǎng)狀血管結(jié)構(gòu)的過(guò)程。 血管內(nèi)皮細(xì)胞

4、基底膜降解、細(xì)胞外基質(zhì)消化吸收。 內(nèi)皮細(xì)胞向血管生長(zhǎng)刺激物方向移行和增殖。 移行的血管內(nèi)皮細(xì)胞伸展，彼此相連形成血管芽孢。 血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖使中空的管腔延長(zhǎng)。,6,血管發(fā)生（Vasculogenesis）,相當(dāng)于原材料新建血管增生——來(lái)源于中胚層前體的內(nèi)皮細(xì)胞原位分化、增殖形成初級(jí)毛細(xì)血管叢。血管重構(gòu)——初級(jí)毛細(xì)血管形成互相連接、分支眾多、成熟的血管結(jié)構(gòu)。,7,動(dòng)脈生成（Arteriogenesis）,相當(dāng)于休閑動(dòng)脈的動(dòng)

5、員原有的側(cè)支血管——正常心臟冠脈間存在的交通吻合血管，直徑20至200μm ,呈薄壁樣管狀結(jié)構(gòu)，通常狀態(tài)下呈關(guān)閉狀態(tài)。開(kāi)放不僅僅是一個(gè)被動(dòng)過(guò)程，開(kāi)放后會(huì)出現(xiàn)一系列細(xì)胞生長(zhǎng)因子分泌、DNA合成和細(xì)胞增殖 等血管主動(dòng)生長(zhǎng)過(guò)程。,8,治療性血管新生（Therapeutic Angiogenesis ）,手術(shù)搭橋（冠脈旁路血管移植術(shù)）藥物搭橋（藥物促進(jìn)的治療性血管新生）,通過(guò)藥物、基因治療或其他手段促進(jìn)冠狀動(dòng)脈的血管新生，以達(dá)到改善心肌

6、缺血癥狀和患者預(yù)后的目的。,9,治療性血管新生的意義,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,增加供需失衡中的供給量,,10,血管新生的研究方法和進(jìn)展,11,篩選模型—雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn),雞胚絨毛尿囊膜(CAM)實(shí)驗(yàn) 目前血管新生藥物初步研究主要采用CAM 模型。CAM 作為一項(xiàng)研究體內(nèi)血管效應(yīng)的技術(shù)，實(shí)驗(yàn)材料易得、操作簡(jiǎn)便、實(shí)驗(yàn)周期短、結(jié)果易于觀察，尤其適用于大批量血管效應(yīng)藥物的初步篩選。,12,動(dòng)物急性心肌缺血模型,兔

7、、鼠選擇性冠狀動(dòng)脈結(jié)扎、栓塞造成動(dòng)物缺血模型，給予干預(yù)后觀察梗死周邊區(qū)血管新生情況。,大鼠心梗模型的制備,13,慢性心肌缺血模型,3周后左冠造影,狹窄明顯、前向血流緩慢,,14,血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng),血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)：因?yàn)槿四氺o脈(HUV) 在某些方面具有與動(dòng)脈生物學(xué)特征相似的優(yōu)點(diǎn)，較之動(dòng)物血管內(nèi)皮更符合人體情況。增殖：MTT比色法遷移：Transwell小室體外成血管：體外血管生成試劑盒分泌：培養(yǎng)液內(nèi)NO、VEGF,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)

8、胞培養(yǎng),15,血管生長(zhǎng)因子/抑制因子,干預(yù)因素對(duì)組織生長(zhǎng)因子/抑制因子的影響生長(zhǎng)因子：VEGF、 bFGF，TGF、促血管生成素-1（Ang-1）抑制因子：血管新生抑制素、內(nèi)皮細(xì)胞抑制素、組織金屬蛋白酶抑制劑、血栓反應(yīng)素-1，2 (thrombospodin-1&2，TSP-1&2)、血小板因子-4(PF-4)等,缺血心肌中的VEGF染色顆粒,16,促進(jìn)治療性血管新生的方法,促血管生長(zhǎng)因子的應(yīng)用干細(xì)胞移植藥物干預(yù)

9、,17,外源性輸注生長(zhǎng)因子,目前，研究最廣泛的血管生成生長(zhǎng)因子家族為VEGF和FGF。給急性心肌梗死動(dòng)物冠脈內(nèi)注射bFGF，心肌梗死的面積顯著縮小，缺血或梗塞心肌內(nèi)毛細(xì)血管及小動(dòng)脈數(shù)目增加。 VEGF是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性有絲分裂原和活體血管新生誘導(dǎo)物。VEGF因其對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞作用的特異性而廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)性肢體及心肌缺血的研究。,18,導(dǎo)入生長(zhǎng)因子基因,近來(lái)病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染已作為一種血管形成生長(zhǎng)因子釋放的方法應(yīng)用于慢性缺血?jiǎng)游锬Ｐ汀?/p>

10、 VEGF基因，PDGF基因 將含VEGFcDNA的真核表達(dá)載體pVS121吸附在球囊上，并定位轉(zhuǎn)移至梗塞冠狀動(dòng)脈近心端。轉(zhuǎn)染VEGF基因后心肌血管密度明顯增加，有效促進(jìn)了血管新生。,19,臨床試驗(yàn)結(jié)果：并不理想,首次：冠脈內(nèi)和靜脈內(nèi)灌注VEGF165蛋白，在60天的運(yùn)動(dòng)耐量、心肌灌注、心絞痛癥狀或功能分級(jí)等方面，治療組并未獲得顯著性益處。 FGF血管重建臨床試驗(yàn)(FIRST)：一次冠脈內(nèi)灌注FGF

11、-2，患者功能狀況和癥狀分級(jí)顯著改善，但90天后運(yùn)動(dòng)耐量和心肌灌注與安慰劑相比沒(méi)有差異VEGF、FGF的一系列雙盲、隨機(jī)的臨床研究并沒(méi)有成功的提出絕對(duì)清晰的治療效果證據(jù)，與獲臨床承認(rèn)仍有很大的差距。,20,骨髓干／祖細(xì)胞移植,成人EPC和造血干細(xì)胞發(fā)生于共同的干細(xì)胞，都來(lái)源于造血器官骨髓。 有希望促進(jìn)血管新生并改善心功能，為缺血性心臟病提供了一種新的治療選擇。用PCR法對(duì)人工血管內(nèi)側(cè)再內(nèi)皮化細(xì)胞的基因進(jìn)行分析，證實(shí)移植的骨髓細(xì)胞能

12、參與內(nèi)皮的形成。,21,胞外基質(zhì)的研究,在血管新生過(guò)程中，內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和管腔形成不但與促進(jìn)/拮抗血管生成因子有關(guān)，而且也受基質(zhì)降解蛋白酶和細(xì)胞間基質(zhì)的調(diào)節(jié)。胞外基質(zhì)的重建可能產(chǎn)生促或抗血管生成效應(yīng)。蛋白酶類重塑胞外基質(zhì)可以促進(jìn)細(xì)胞遷移，這是血管新生的重要條件。 胞外基質(zhì)分子和胞外基質(zhì)重塑事件在血管新生調(diào)節(jié)中扮演了一個(gè)關(guān)鍵角色。,22,Miranda D. Grounds, et al. The Journal of

13、Histochemistry & Cytochemistry 2002,50(5): 589–610,干細(xì)胞移植,23,Nature/Vol428/3 April 2004/664-8,145例HSC移植入正?；蛘邠p傷的成年小鼠心臟的實(shí)驗(yàn)研究，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)由干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化而來(lái)的心肌，并且干細(xì)胞移植組相對(duì)于假移植組心肌細(xì)胞數(shù)量沒(méi)有明顯的增加，為心肌修復(fù)的臨床研究提出了質(zhì)疑。 心臟功能上的改善可能是由于移植對(duì)左心室重塑的影響或者是產(chǎn)

14、生了新生血管，而不是心肌再生。過(guò)去兩年來(lái)，開(kāi)展了一些使用骨髓祖細(xì)胞進(jìn)行心臟修復(fù)臨床試驗(yàn)。在目前研究中，HSC不能轉(zhuǎn)化形成新的心肌，動(dòng)搖了這些試驗(yàn)的理論基礎(chǔ)。,造血干細(xì)胞（HSC）治療的不足,24,干細(xì)胞治療心肌梗死患者的臨床試驗(yàn),,,,Circulation. 2006;114:353-358.,25,Is stem cell therapy for cardiac repair ready for patients?,26,作為

15、一項(xiàng)新生事物，干細(xì)胞移植可能是治療缺血性心臟病令人激動(dòng)的新選擇。尤其是那些有大面積心肌梗死患者，因其預(yù)后不佳，更有可能從細(xì)胞移植治療中獲益。但迄今為止，臨床試驗(yàn)結(jié)果相互矛盾，仍然處于實(shí)驗(yàn)性治療階段。,27,促進(jìn)血管新生 中醫(yī)藥如何？,中醫(yī)藥益氣活血、祛瘀生新等許多治療法則以及臨床的有效性，也為中醫(yī)藥血管新生的研究提供了理論和臨床依據(jù)。,28,,,血管新生研究的中醫(yī)藥理論基礎(chǔ),“活血生肌”、“袪瘀生新”,,創(chuàng)傷愈合不良、潰瘍不愈、心肌缺血

16、側(cè)枝代償不足等。,戴瑞鴻…，冠心病心肌缺血的治療性血管生成與中醫(yī)藥中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2000,20(3).-163-164,29,麝香保心丸的血管新生研究,30,中西醫(yī)結(jié)合治療冠心病的特色,“血”“脈”兩條途徑，整體治療，體現(xiàn)中醫(yī)藥特色,,中西醫(yī)結(jié)合治療心腦血管疾病,,31,,32,起效時(shí)間： 麝香保心丸和硝酸甘油相似，最快30秒，一般在3～5分鐘之內(nèi)心電圖有效率： 麝香保心丸和硝酸甘油無(wú)顯著性差異副反應(yīng)：

17、 麝香保心丸的副反應(yīng)明顯低于硝酸甘油。,麝香保心丸與硝酸酯類療效對(duì)比,33,保護(hù)血管內(nèi)皮，抑制動(dòng)脈粥樣硬化,麝香保心丸能提高內(nèi)源性一氧化氮合酶(eNOS)基因的表達(dá)，增強(qiáng)血管一氧化氮合酶(NOS)活力，以及抗炎、減少脂質(zhì)浸潤(rùn)等途徑保護(hù)血管內(nèi)皮臨床可見(jiàn)長(zhǎng)期治療后血管內(nèi)皮功能改善，動(dòng)脈粥樣硬化程度減輕 ——與緩釋單硝酸異山梨酯（DRIM）比較,反應(yīng)性充血肱動(dòng)脈內(nèi)徑明顯增加,麝香保心丸組頸動(dòng)脈IMT顯著變薄,34,麝香保心丸的促血管新生

18、作用,對(duì)血管生長(zhǎng)因子的影響雞胚絨毛尿囊膜（CAM）試驗(yàn)大鼠缺血?jiǎng)游锬Ｐ团R床研究（心肌核素顯像)對(duì)腫瘤及斑塊血管新生的影響對(duì)骨髓干細(xì)胞的動(dòng)員對(duì)生長(zhǎng)因子受體的影響（正在進(jìn)行）尸檢回顧性分析（正在進(jìn)行）,35,體外細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)麝香保心丸促進(jìn)培養(yǎng)的牛腎上腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和形成管腔結(jié)構(gòu),（ 生理鹽水對(duì)照組細(xì)胞 ）,（麝香保心丸組細(xì)胞）,麝香保心丸促進(jìn)血管新生作用的證據(jù),汪珊珊，李勇等。麝香保心丸對(duì)雞胚絨毛尿囊膜及培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)

19、胞的促血管生成作用，《中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志》2003,23(2),36,麝香保心丸的促血管新生作用的證據(jù),,體外組織學(xué)實(shí)驗(yàn)：麝香保心丸能促進(jìn)雞胚絨毛尿囊膜的血管生成作用,（加有生理鹽水的CAM）,（加有麝香保心丸的CAM）,汪珊珊，李勇等。麝香保心丸對(duì)雞胚絨毛尿囊膜及培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞的促血管生成作用，《中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志》2003,23(2),37,增加心肌梗塞大鼠心肌VEGF含量（免疫組化染色）,資料來(lái)源:麝香保心丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗

20、塞大鼠心臟的促血管生成作用《中成藥 》2002；24（6）：446-449,（生理鹽水組）,（麝香保心丸組）,促進(jìn)缺血心肌血管生長(zhǎng)因子表達(dá),38,1、2. 小、大劑量麝香保心丸 3. 貝復(fù)濟(jì)與肝素聯(lián)用組 4. 模型組 5. 假手術(shù)組 6 .正常組 7 .卡托普利組,在體研究：大鼠心肌梗死模型梗死邊緣區(qū),1 2 3 4 5

21、 6 7麝小 麝大 bFGF M F N K,39,麝香保心丸對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響,,A為L(zhǎng)SCM激發(fā)綠色為結(jié)合FITC-UEA-I的EPCs；B為L(zhǎng)SCM激發(fā)紅色的為攝取DiI-Ac-LDL的EPCs；C為L(zhǎng)SCM激發(fā)呈現(xiàn)橙色為FITC-UEA-I和攝取DiI-Ac-LDL的EPCs（C為正在鑒定的分化祖細(xì)胞）,梁春、吳宗貴等，中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，Ju

22、ne2009,Vol.29,No.6,40,麝香保心丸對(duì)分化祖細(xì)胞的影響,,與對(duì)照組比較，麝香保心丸1mg/ml、2mg/ml、4mg/ml組可以增加EPCs增殖、遷移、粘附、及體外血管形成能力。,41,中藥促血管新生作用的可能機(jī)制,研究發(fā)現(xiàn)麝香保心丸培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞釋放 VEGF 和 bFGF 增加，VEGF與bFGF 的 mRNA表達(dá)增高。麝香保心丸使血管生長(zhǎng)抑制因子的減少。麝香保心丸提高內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）遷徙、粘附

23、和血管形成能力。,42,雙向調(diào)節(jié)— 對(duì)斑塊血管新生的抑制,在同一動(dòng)物雙模型（同時(shí)有心肌缺血和動(dòng)脈粥樣斑塊）發(fā)現(xiàn)：麝香保心丸促進(jìn)缺血心肌血管新生麝香保心丸抑制斑塊血管新生,43,對(duì)斑塊內(nèi)新生血管的影響,對(duì)照組斑塊　　　　 麝香保心丸組斑塊　　 CD34 免疫組化染色 CD34 免疫組化染色 　　　　

24、 250倍,,CD34抗原是跨膜細(xì)胞糖蛋白，主要表達(dá)于人或鼠的造血干細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞中，有學(xué)者認(rèn)為CD34為細(xì)胞間黏附及信號(hào)傳導(dǎo)提供了條件，促使內(nèi)皮細(xì)胞分裂 、新生的細(xì)胞在CD34的參與下向血管外遷移黏附，構(gòu)建成新生血管的骨架。,44,斑塊內(nèi)MMP-3陽(yáng)性面積比較，能抑制基質(zhì)降解,對(duì)照組斑塊　　

25、 麝香保心丸組斑塊　　 MMP-3 免疫組化染色 MMP-3 免疫組化染色

26、 放大250倍,斑塊內(nèi)新生血管情況,45,斑塊內(nèi)的血管新生,研究證實(shí)：具有促進(jìn)治療性血管新生作用的中成藥麝香保心丸，能特異性地抑制斑塊內(nèi)的血管生長(zhǎng)，改變斑塊內(nèi)的基質(zhì)變化，抑制基質(zhì)降解，從而有利于斑塊的穩(wěn)定。,中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志 2008.05.28;,46,麝香保心丸對(duì)裸鼠人LoVo結(jié)腸癌的影響,麝香保心丸對(duì)腫瘤組織血管生成因子（VFGF、bFGF）的影響,,組別

27、n 肝轉(zhuǎn)移數(shù) 瘤重（g） 抑瘤率（％）模型組 10 10 0.67±0.10 0小劑量組 10 10 0.59±0.08 11.4中劑量組 10 9

28、 0.51±0.11* 23.6大劑量組 10 9 0.49±0.08* 27.1,,,麝香保心丸對(duì)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響,藥學(xué)實(shí)踐雜志 2007 ， 25（5）：295,47,結(jié) 論,臨床常用的冠心病治療藥物中，麝香保心丸等有明確的促血管新生作用。中藥促血管新生的機(jī)理復(fù)雜，可能涉及血管生長(zhǎng)因

29、子及其受體，以及血管抑制因子等多方面。對(duì)同時(shí)伴有的心梗范圍受限、心室重構(gòu)的改善和心功能的改善，血管新生可能是參予機(jī)理之一。雙向調(diào)節(jié)：抑制斑塊內(nèi)血管新生和基質(zhì)降解，穩(wěn)定斑塊；降低腫瘤微血管密度，減少腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。,48,麝香保心丸的血管新生研究,2002年，發(fā)現(xiàn)麝香保心丸對(duì)心肌梗塞大鼠的促血管新生2003年，發(fā)現(xiàn)麝香保心丸促進(jìn)CAM血管新生及血管內(nèi)皮細(xì)胞管腔結(jié)構(gòu)形成2004年，麝香保心丸促進(jìn)血管新生研究結(jié)果發(fā)表于美國(guó)life s

30、cience雜志2006年，麝香保心丸促進(jìn)血管新生系列研究榮獲中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)2007年，發(fā)現(xiàn)麝香保心丸的雙向血管新生調(diào)節(jié)2008年，發(fā)現(xiàn)麝香保心丸對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的動(dòng)員作用,49,治療各種類型的心絞痛——Meta分析（25項(xiàng)）,50,麝香保心丸治療后增加心肌灌注,總有效率 70.6%,羅海明，戴瑞鴻等。麝香保心丸改善心肌缺血作用的核心臟影像學(xué)研究，《中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志》1996,16(6):325-5,心肌影像學(xué)實(shí)驗(yàn)——SP

31、ECT,51,10例病人（CAG或OMI），麝香保心丸長(zhǎng)期治療后對(duì)心肌灌注/代謝的改善,服藥前PET心肌掃描 6月時(shí)PET心肌掃描,PET評(píng)價(jià)麝香保心丸對(duì)冠心病心肌血流的影響,52,心肌影像學(xué)實(shí)驗(yàn)——PET,,,,,10例受試者共取得180個(gè)心肌節(jié)段作靜息－負(fù)荷和麝香保心丸治療前－后自身對(duì)照分析,,相對(duì)冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)治療前后無(wú)顯著差異，但治療后似有可提高相對(duì)儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)的趨勢(shì)。(P＝0

32、.077 ),相對(duì)血流密度分?jǐn)?shù),,,相對(duì)血流密度分?jǐn)?shù),53,臨床研究,表1－1強(qiáng)化治療組與常規(guī)治療組給藥方案,每丸22.5mg，每日含服<3次。兩組在治療期間均不得使用其他抗缺血中藥。藥物由試驗(yàn)藥品由上海和黃藥業(yè)提供，生產(chǎn)批號(hào)G040603－G060603。,上海市科委基金：中藥現(xiàn)代化專項(xiàng)課題04DZ19856資助,54,治療穩(wěn)定性心絞痛－減少危險(xiǎn)事件主要臨床事件：心梗、心絞痛住院或急診、卒中、心衰、心血管原因住院或急診,*,

33、55,治療穩(wěn)定性心絞痛－減少危險(xiǎn)事件總臨床事件：主要臨床事件＋其他原因住院或急診,*,56,長(zhǎng)期服用治療穩(wěn)定性心絞痛,*,57,麝香保心丸合并用藥情況,200名冠心病穩(wěn)定性心絞痛患者：硝酸酯類藥物在治療6個(gè)月時(shí)明顯減少。,58,麝香保心丸治療性血管新生作用小結(jié),麝香保心丸具有明確的促血管新生的作用，且臨床應(yīng)用能取得良好的收益 促進(jìn)治療性血管新生通過(guò)對(duì)機(jī)體自身的生長(zhǎng)因子及受體調(diào)節(jié)，促進(jìn)缺血心肌血管新生治療性血管新生的雙向調(diào)節(jié)機(jī)制

34、麝香保心丸促進(jìn)缺血心肌血管新生的同時(shí)，通過(guò)保護(hù)內(nèi)皮、抑制炎癥、改善缺氧等因素，抑制斑塊內(nèi)血管新生對(duì)冠心病的遠(yuǎn)期預(yù)后有改善作用，合并應(yīng)用化學(xué)藥物安全,59,麝香保心丸的系統(tǒng)生物學(xué)研究,60,系統(tǒng)生物學(xué)破解中藥黑匣,需要知道中藥復(fù)方的物質(zhì)組成；這些物質(zhì)組成在藥物中是否穩(wěn)定可控；進(jìn)入人體的代謝情況如何；進(jìn)入人體的多種物質(zhì)成分在機(jī)體中發(fā)揮什么樣的生物效應(yīng)。對(duì)疾病的轉(zhuǎn)歸有何影響,中藥復(fù)方“理論上”要解決的問(wèn)題,系統(tǒng)研究中藥復(fù)方的藥效物

35、質(zhì)基礎(chǔ)、配伍規(guī)律、廣泛的藥理及其作用機(jī)理，為打破長(zhǎng)久以來(lái)困擾中醫(yī)藥研究的“黑匣”問(wèn)題提供了契機(jī)。,61,,,明確了28個(gè)藥物入血成分,代謝組學(xué),麝香保心丸調(diào)節(jié)心梗時(shí)炎癥反應(yīng)、能量代謝、心肌肥大的代謝過(guò)程,麝香保心丸對(duì)心梗相關(guān)功能基因/差異基因的影響,基因組學(xué),血管新生關(guān)鍵促進(jìn)因子/抑制因子研究,蛋白組學(xué),冠心病治療相關(guān)受體調(diào)控研究,麝香保心丸增效減毒機(jī)理研究,測(cè)定了蟾酥等藥物組分的體內(nèi)代謝,,,,,,,麝香保心丸系統(tǒng)生

36、物學(xué)研究,,,專項(xiàng)名稱： “重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng) 麝香保心丸現(xiàn)代科學(xué)研究與技術(shù)創(chuàng)新 申報(bào)專題編號(hào)： 2008ZX09202,62,,,分離并鑒定95個(gè)化合物,現(xiàn)代分離技術(shù)與LC-MS快速分離鑒定,鑒定入血成分30個(gè),血清藥物化學(xué),,,化學(xué)物質(zhì)組學(xué)研究,,Chromatography

37、：2010,11(4):417-430Biomedical Chromatography：2011, 7(3): 824-831,,復(fù)方化學(xué)成分研究,體內(nèi)化學(xué)成分研究,麝香保心丸化學(xué)物質(zhì)組學(xué)研究,1- hydroxyl-cinobufagin,nicotinamide,adenine,63,麝香保心丸中的組效關(guān)系研究,體現(xiàn)了君臣佐使配伍，減毒增效，整合調(diào)節(jié)特點(diǎn),64,麝香保心丸機(jī)制研究 ---

38、----基因組學(xué)研究,進(jìn)一步篩選得到34個(gè)共性差異基因。其中14個(gè)基因在麝香保心丸組和心肌缺血組中呈現(xiàn)表達(dá)量相反的結(jié)果?？梢?jiàn)麝香保心丸對(duì)這14個(gè)基因的作用明顯（逆向表達(dá)）。這些基因主要與心肌能量代謝相關(guān)。,65,,麝香保心丸差異基因涉及的信號(hào)通路分析,麝香保心丸作用后的差異基因涉及能量代謝、整聯(lián)蛋白、催化活性、氧化應(yīng)激、肌動(dòng)蛋白、激肽原酶激活、胰島素生長(zhǎng)因子，而這些靶點(diǎn)多為心血管疾病中的重要分子機(jī)制。,66,1.Tpm1基因（原肌球蛋白

39、家族，可以阻止心臟突發(fā)死亡）,,重點(diǎn)差異基因Real-time PCR 分析,麝香保心丸組,陽(yáng)性藥組,,模型組中，Tpm1基因表達(dá)明顯增加，麝香保心丸干預(yù)后其表達(dá)恢復(fù)正常，使Tpm1對(duì)心肌收縮的調(diào)節(jié)恢復(fù)正常，保護(hù)心臟收縮功能；結(jié)合病理形態(tài)可知麝香保心丸對(duì)心臟的恢復(fù)及保護(hù)作用更強(qiáng)。,,67,Fndc1和 Fn1基因 （纖維連接蛋白家族，與心臟組織纖維化呈正相關(guān)）,麝香保心丸干預(yù)后， Fndc1基因表達(dá)顯著下調(diào)，

40、纖維化減輕，推測(cè)麝香保心丸具有抑制缺血心肌纖維化的作用 。,麝香保心丸干預(yù)后Fn1基因表達(dá)上調(diào)至正常水平麝香保心丸對(duì)心肌缺血后纖維化過(guò)程具有抑制或逆轉(zhuǎn)的作用。,,,Fndc1結(jié)果,Fn1結(jié)果,,,68,血液代謝組學(xué)評(píng)價(jià)-心梗后治療,術(shù)后5h,術(shù)后15d,3-15d動(dòng)態(tài)變化,體內(nèi)調(diào)控途徑：a：減少類固醇生成，抑制心肌細(xì)胞的肥大，促進(jìn)心肌功能的恢復(fù) b：調(diào)控糖酵解過(guò)程，恢復(fù)能量代謝所需能量的正常供應(yīng)

41、 c：抑制花生四烯酸代謝通路，減輕心肌梗死后的炎癥反應(yīng),麝香保心丸代謝組學(xué)評(píng)價(jià),69,,,,麝香保心丸組,模型組,正常組,從圖中可以看出盡管麝香保心丸組沒(méi)有回調(diào)至正常狀態(tài)，但仍然和模型組有明顯改變，并且向正常組偏移?？梢钥闯鲼晗惚Ｐ耐杞M對(duì)心肌梗死有預(yù)保護(hù)作用。,麝香保心丸代謝組學(xué)評(píng)價(jià),血液代謝組學(xué)評(píng)價(jià)-心梗預(yù)保護(hù),,麝香保心丸組,70,尿液代謝組學(xué)評(píng)價(jià),術(shù)后15d,3-15d動(dòng)態(tài)變化,麝香保心丸對(duì)心肌梗死大鼠體內(nèi)異常代謝物

42、的回調(diào)作用明顯,Mol BioSyst：2011, 7(3): 824-831,麝香保心丸代謝組學(xué)評(píng)價(jià),71,IF = 4.015,,,,麝香保心丸主要通過(guò)調(diào)控能量代謝途徑，抑制心肌肥大及氧化損傷來(lái)多途徑治療心肌梗死引起的危害，其中以恢復(fù)三羧酸循環(huán)相關(guān)能量代謝通路為主要手段。,,72,麝香保心丸代謝組學(xué)總結(jié),Aldosterone,Corticosterone,Cortisol,Epinephrine,Creatine,Uridine

43、,Glutamate,Oxalosuccinic acid,LTA4,Deoxyinosine,Glycerate,Thymidine,Deoxycorticosterone,抑制心肌肥大,糾正能量代謝紊亂,減輕炎癥反應(yīng),,,,,,,,,,,,,,調(diào)控代謝物,作用效應(yīng),,,下調(diào),上調(diào),代謝組學(xué)得分圖充分的反映了麝香保心丸的正向干預(yù)效果。在血液的15個(gè)標(biāo)志物中5個(gè)（心肌肥大，炎癥）可以被麝香保心丸逆轉(zhuǎn)；在尿液的16個(gè)生物標(biāo)志物中5個(gè)（能量

44、代謝相關(guān)）可以被其逆轉(zhuǎn)。從血液和尿液的3-15天動(dòng)態(tài)代謝圖譜中可以看出，麝香保心丸在心肌梗死的長(zhǎng)期治療中有著很好的調(diào)控作用，有時(shí)間依賴作用。SX通過(guò)改善心肌能量代謝，提高心肌能量利用程度，從而減少心肌細(xì)胞凋亡，延緩心肌梗死進(jìn)展,73,麝香保心丸系統(tǒng)生物學(xué)研究意義,揭示了麝香保心丸組方干預(yù)心肌缺血作用的藥效物質(zhì)群與作用機(jī)理； 證實(shí)其治療冠心病、心絞痛是多個(gè)有效成分通過(guò)多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)起作用； 為麝香保心丸臨床療效與安

45、全性評(píng)價(jià)提供了重要基礎(chǔ)；,,74,謝 謝！,75,冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)（一）,冠脈造影及血管內(nèi)超聲均被認(rèn)為是診斷冠脈病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但僅是對(duì)病變狹窄程度進(jìn)行影像學(xué)評(píng)價(jià)，不能評(píng)價(jià)對(duì)遠(yuǎn)端血流產(chǎn)生多大的影響，及是否會(huì)導(dǎo)致心肌的缺血，引起癥狀。一種新技術(shù)——冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)（FFR），為評(píng)價(jià)心肌缺血提供了一種良好方法。,76,冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)（三）,FFR最有應(yīng)用價(jià)值之處在于對(duì)中等度狹窄病變的評(píng)價(jià)，非侵入性檢查無(wú)心肌缺血證據(jù)時(shí)決定是否行血管成型術(shù)