三體綜合征產(chǎn)前診斷

1、案例一 ——遺傳病的產(chǎn)前診斷,產(chǎn)前診斷是在遺傳咨詢的基礎(chǔ)上，主要通過遺傳學(xué)檢測(cè)和影像學(xué)檢查，對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)胎兒進(jìn)行明確診斷，通過對(duì)患胎的選擇性流產(chǎn)達(dá)到胎兒選擇的目的，從而降低出生缺陷率，提高優(yōu)生質(zhì)量和人口素質(zhì)。產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷。它是為了了解胎兒在子宮內(nèi)的健康情況，有無先天性畸形或遺傳病，用某些特殊檢查方法在子宮內(nèi)對(duì)胎兒進(jìn)行診斷，以便及早采取措施避免殘疾兒的出生，提高出生人口的素質(zhì)，

2、是有生學(xué)的重要組成部分。,產(chǎn)前診斷對(duì)象,35歲以上的高齡孕婦；夫婦雙方有一人為染色體畸變，或曾生育過染色體異常患兒的孕婦；曾生育過單基因遺傳病患兒的孕婦、已知或推測(cè)為AR或XR遺傳病攜帶者的孕婦夫婦；夫婦之一有開放性神經(jīng)管畸形，或出生過這種畸形患兒的孕婦；有原因不明的自然流產(chǎn)史、畸胎史、死胎及新生兒死亡史的孕婦；具有遺傳病家族史又系近親婚配的孕婦；夫婦之一有致畸因素接觸史的孕婦；羊水過多、宮內(nèi)生長發(fā)育遲緩或疑為嚴(yán)重宮內(nèi)感染

3、的孕婦,產(chǎn)前診斷方法,1.X線檢查 2.超聲波檢查 3.胎兒鏡 4.羊膜穿刺術(shù) 5.絨毛吸取術(shù)6.臍帶穿刺術(shù) 7.孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞 8.植入前診斷,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握遺傳病的產(chǎn)前診斷過程，通過對(duì)21三體綜合征的診斷設(shè)計(jì)，培養(yǎng)運(yùn)用遺傳學(xué)現(xiàn)代技術(shù)解決醫(yī)學(xué)實(shí)際問題的能力。,二、實(shí)驗(yàn)原理,1. 羊水中有一定數(shù)量胎兒脫落細(xì)胞，通過羊膜穿刺獲取羊水中的胎兒細(xì)胞，經(jīng)體外培養(yǎng)后通過G顯帶實(shí)驗(yàn)進(jìn)行核型分析，判斷染色體是否畸形，診

4、斷是否患有21三體綜合征。,,2. G顯帶是指以Giemsa染料染色后，使染色體顯帶的技術(shù)。Giemsa染料是由噻嗪和曙紅組成的，著色時(shí)DNA先于2個(gè)噻嗪分子結(jié)合，然后再與一個(gè)曙紅分子結(jié)合，形成沉淀物，而DNA的某些部位對(duì)染料不敏感，由此形成明暗相間的條帶。,三、實(shí)驗(yàn)材料、試劑及器材,（1）器材：離心管，離心機(jī)，天平，37℃溫箱，載玻片，蓋玻片，恒溫水浴鍋，光學(xué)顯微鏡，標(biāo)本板，玻璃鉛筆，定時(shí)鐘，染色缸，直柄虹膜鑷，滴管。（2）

5、藥品：pH6.8 PBS，Giemsa，0.025%胰蛋白酶（取0.9%氯化鈉100ml，加0.25%胰蛋白酶1ml）。,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取材↓體外細(xì)胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,取材,1、腹部備皮，排光膀胱，平臥位常規(guī)消毒后鋪無菌洞巾。 2、麻醉，一般不必需要，精神緊張者或可用普魯卡因或利多卡因麻醉。,取材,3、選擇穿刺部位，經(jīng)B超胎盤定位后避開胎盤?！　?中期妊娠時(shí)，一

6、般選擇在恥骨聯(lián)合上3橫指相當(dāng)于子宮下段處，于腹中線或其左右側(cè)旁，捫及囊樣感的部位做穿刺；也可于宮底與恥骨聯(lián)合連線中點(diǎn)或左右任何一側(cè)穿刺?！　?晚期妊娠時(shí)，先捫清胎先露，然后上推先露部，在先露部下方穿刺；也可在胎兒頸背部空隙處或胎兒肢體側(cè)空隙處穿刺。,取材,4、確定穿刺部位后，以20～21號(hào)腰椎穿刺針垂直刺入腹壁，通過腹壁及宮壁兩次阻力，當(dāng)有落空感時(shí)即進(jìn)入羊膜腔，抽出芯針，見羊水溢出，接上注射器，順利抽得清亮羊水

7、，再次證實(shí)在羊膜腔內(nèi)后，可注射藥物。如欲做羊水檢查，則抽取羊水20ml立即送檢?！　?5、穿刺完畢后拔出穿刺針，局部壓迫5分鐘，穿刺部位敷以無菌紗布，膠布固定。,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取材↓體外細(xì)胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,細(xì)胞體外培養(yǎng),,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取材↓體外細(xì)胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,制片,,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取材↓體外細(xì)胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,顯帶,1、將制

8、好的染色體標(biāo)本，置72℃～75℃烤箱中烤片3h。 2、放入預(yù)溫至37℃的0.025%胰酶溶液中（pH=7.2～7.4）消化1min左右，每次的作用時(shí)間并不完全相同，可先試一張片子，再根據(jù)顯帶效果調(diào)整胰酶作用時(shí)間。,顯帶,3、在Giemsa 染液中染色10min，自來水沖洗干凈，晾干后，即可閱片。 4、鏡檢：在顯微鏡高倍目鏡下檢查顯帶標(biāo)本，在染色體上若出現(xiàn)清晰的深淺相間的帶型，即為可取標(biāo)本，可

9、供攝像分析,四、實(shí)驗(yàn)步驟,取材↓體外細(xì)胞培養(yǎng)↓制片↓顯帶↓核型分析,核型分析,純 合 型,核型分析,易 位

10、 型,核型分析,,五、注意事項(xiàng),（1）胰蛋白酶濃度和處理時(shí)間隨氣溫高低有所不同。一般規(guī)律是標(biāo)本存放時(shí)間越長，在胰蛋白酶當(dāng)中處理時(shí)間越長。太新鮮的標(biāo)本，染色體會(huì)出現(xiàn)毛茸現(xiàn)象。片齡很長的標(biāo)本往往會(huì)導(dǎo)致斑點(diǎn)狀的染色體。（2）胰蛋白酶溫度：溫度越高，反應(yīng)的速度就越快，一般是室溫，但溫度必須穩(wěn)定至少20min。（3）胰蛋白酶處理的時(shí)間：如果細(xì)胞呈紫藍(lán)色，說明胰蛋白酶的作用時(shí)間不夠，如果細(xì)胞呈桃

11、紅色，說明作用時(shí)間剛好。,結(jié)果判斷,(1)標(biāo)準(zhǔn)型 占患者總數(shù)的92.5%，患兒體細(xì)胞染色體有47條，有一條額外的21號(hào)染色體，核型為47，XX（或XY）+21。其發(fā)生機(jī)制為親代（多為母親）的生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂時(shí)染色體不分離所致。,結(jié)果判斷,(2)嵌合型 僅占21-三體綜合征的2.5%-5%，是指受精卵在有絲分裂期間染色體不分離而導(dǎo)致的，因此只是部分而不是所有的細(xì)胞存在缺陷?；純后w內(nèi)含有正常和21-三體細(xì)胞二

12、種細(xì)胞株，形成嵌合體，核型為46，XX（或XY）/47，XX（或XY）+21，其臨床表現(xiàn)隨正常細(xì)胞所占百分比而定。嵌合型的患兒的智商較其它兩型高，臨床并發(fā)癥的發(fā)生率也相對(duì)較少。,結(jié)果判斷,(3)易位型 約占全部病例的2.5%～5%，多為羅伯遜易位，即著絲粒融合，其額外的21號(hào)染色體長臂易位到另一近端著絲粒染色體上。最常見為D/G易位，D組中以14號(hào)染色體為主，核型為46，XX（或XY）-14，+ t（14q;21q），少