脂質(zhì)沉積性肌病白細胞脂滴

1、脂質(zhì)沉積性肌病外周血白細胞脂滴沉積的超微結(jié)構(gòu)研究,福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 慕容慎行 王 檸 福建省泉州市第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 蔡 江 萍,脂質(zhì)沉積性肌病( lipid storage myopathy, LSM )是由于肉毒堿（carn

2、itine）或作用于脂質(zhì)代謝的一些酶等缺乏，直接或間接地干擾了肌肉細胞內(nèi)的脂質(zhì)代謝，導致脂滴在肌纖維中的異常積聚而引起的肌病,LSM有許多不典型的臨床表現(xiàn)，其診斷必須依靠肌肉病理檢查。但肌肉活組織檢查，具有損傷性，不易重復，病人較難接受，不適于隨訪病人。因此探討LSM的其他輔助性診斷手段，配合肌肉活組織病理檢查具有重要的臨床意義。,研究現(xiàn)況,國外陸續(xù)有學者報道LSM患者的周圍血液白細胞脂肪染色可觀察到脂滴存在。但文獻中未見進一步

3、系統(tǒng)研究的報道。國內(nèi)在這一研究領(lǐng)域尚為空白。,研究目的,利用電鏡檢查較為深入地研究周圍血液白細胞超微結(jié)構(gòu)特征探討白細胞胞漿脂滴檢測在LSM中的臨床應(yīng)用價值,研究對象,LSM患者8例，男3例，女5例；年齡：10-41歲，平均年齡20.9±9.7歲；病程2-12年。全部病例均經(jīng)臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、電鏡和病理組化等檢查綜合確診。健康對照者5名，男性2名，女性3名，年齡：23-44歲，平均年齡30.6±8.3歲。5

4、位自愿者血清CPK、LDH、ALT、AST、Mb均正常，無遺傳性疾病家族史。,臨床資料,全部LSM病例均呈亞急性或慢性病程，復發(fā)者4例。均以肌無力為首發(fā)癥狀，雙側(cè)對稱性，近端肌肉受累嚴重，遠端肌肉受累較輕。各部位肌肉受累情況：下肢8例，上肢7例，肩胛帶及骨盆帶肌各7例，頸肌7例，咀嚼肌5例，吞咽肌2例，呼吸肌2例。肌萎縮6例，肌痛及肌壓痛5例，有家族史5例。實驗室檢查：CPK：241-3297 IU/L，LDH：303-308

5、0IU/L，ALT：52-418IU/L，AST：31-717IU/L，3例Mb＞110μg/L。肌電圖均為肌源性損害。,研究方法,標本取材及制作：采血→離心→吸去上清液→加入3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1M磷酸鹽緩沖液→4℃固定半小時→細切成長條狀標本→ 4℃固定2小時以上→ 0.1M PBS漂洗三次→ 1%鋨酸-1.5%亞鐵氰化鉀溶液4℃固定2小時→系列梯度酒精、丙酮脫水→定向包埋→超薄切片→電子染色。電鏡觀察及細胞計數(shù)：

6、Hu-12A型透射電鏡觀察并攝片。每份標本均按固定方向統(tǒng)一順序計數(shù)50個中性粒細胞，統(tǒng)計沉積的脂滴總數(shù)和含有脂滴的陽性細胞數(shù)。,統(tǒng)計學分析,兩組中性粒細胞含脂滴總數(shù)及含脂滴的中性粒細胞陽性率比較，若方差齊性采用t檢驗，若方差不齊采用t´檢驗，并用SPSS10.0軟件包統(tǒng)計。,結(jié) 果,LSM患者：周圍血液白細胞胞漿中可見到脂滴存在，多圓形或橢圓形，內(nèi)容物接近透明，有的電子密度較高，體積大小不等，直徑約0.1-1.1

7、μm，同一個細胞中脂滴常為2-3個，有的細胞脂滴多達5個，脂滴沉積以中性粒細胞明顯，淋巴細胞及紅細胞胞漿中未見脂滴。健康對照者：周圍血液白細胞中脂滴極為罕見，細胞中脂滴多為1個，體積細小，直徑約0.1-0.2μm。,表1　兩組中性粒細胞中沉積的脂滴數(shù),,*平均值為同組數(shù)據(jù)的均值, **P＜0.01,表2 兩組周圍血含脂滴的中性粒細胞陽性率,*平均值為同組數(shù)據(jù)的均值, **P＜0.001,討 論,本文研究結(jié)果顯示：

8、LSM患者周圍血液白細胞胞漿中可觀察到脂滴沉積,以中性粒細胞明顯，紅細胞及淋巴細胞未見脂滴存在。健康對照組只在個別白細胞胞漿中觀察到細小脂滴，極為罕見。,,白細胞胞漿中出現(xiàn)脂滴沉積，其機制可能為：白細胞膜存在肉毒堿攝取功能減弱，導致長鏈脂肪酸代謝異常；全身型患者肝臟合成肉毒堿功能缺陷，血清肉毒堿水平降低。,,紅細胞中未出現(xiàn)脂滴沉積，其原因可能為：紅細胞的能量供應(yīng)，95%來源于糖原酵解，脂肪氧化代謝障礙時對其影響小，不導致脂滴沉

9、積。,,國外有多位學者對其他神經(jīng)肌肉病的周圍血液白細胞進行研究：發(fā)現(xiàn)除了LSM外，其他神經(jīng)肌肉疾病均未見到類似的脂滴沉積說明周圍血液白細胞脂滴沉積僅見于LSM因而周圍血液白細胞脂滴沉積的電鏡檢查，對LSM的的診斷具有較高的特異性,Hart等[4]報道1例23個月的LSM患兒在發(fā)病初期周圍血液白細胞未出現(xiàn)脂滴沉積。病情加重時，很快出現(xiàn)脂滴，油紅O染色陽性。說明周圍血液白細胞脂滴沉積，隨病情加重而變化。國內(nèi)也有文獻報道[5]，2例L