乙肝相關(guān)性肝病患者外周血SOCS1、SOCS3表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、一、研究背景： 慢性乙型肝炎感染嚴(yán)重影響全球人類的健康，全球超過20億人口感染HBV，4億人為慢性感染者，在亞太地區(qū)更為重要，75％感染者在亞洲，中國和印度占50％，我國每年有約30萬人死于HBV感染導(dǎo)致的肝衰竭、肝硬化、肝癌。 慢性乙型肝炎的發(fā)展受病毒復(fù)制狀態(tài)和機體免疫應(yīng)答兩個主要因素的影響。近年研究顯示，宿主免疫應(yīng)答中，細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制因子(Suppressor of cytokine signaling) SO

2、CS1、SOCS3通過抑制細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)機體對細(xì)胞因子的過度刺激，可能與肝病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 二、研究目的： 本課題通過熒光定量PCR的方法檢測HBV相關(guān)性肝病外周血中SOCS1、SOCS3mRNA的表達(dá)情況，對SOCS1與SOCS3與HBV相關(guān)性肝病的臨床意義進(jìn)行了初步分析。為進(jìn)一步研究與治療(如未來細(xì)胞因子的治療等)提供依據(jù)。 三、材料和方法： 3.1研究對象 選取2008年9月—20

3、09年3月中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院感染科門診及住院患者，診斷符合2006年中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會和中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會制定我國第一部《肝衰竭診療指南》及2000年西安《病毒性肝炎防治方案》，并排除了合并甲、丙、丁、戊型肝炎、肝細(xì)胞肝癌、酒精性肝病、藥物性肝病、自身免疫性肝病；伴有冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、動脈硬化癥等心腦血管疾?。毁Y料不完整者。根據(jù)入院時是否使用核苷類抗病毒藥物，分為抗病毒組(至少2周以上)和綜合治療組。 3.2實驗

4、方法 (1)臨床資料收集：年齡、性別、以患者住院3天內(nèi)化驗數(shù)據(jù)為計算指標(biāo)，包括ALT、AST、總膽紅素(TBIL)(umol/L)、肌酐(CREAT)(umol/L)、凝血酶原時間國際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)，乙型肝炎病毒標(biāo)記物：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗體(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗體(HBeAb)、乙型肝炎C抗體(HBcAb)、乙肝病毒去氧核糖核酸的定量檢測(HBV—DNA)、是

5、否服用核苷類抗病毒藥物及使用的種類、時間長短。 (2)設(shè)計SOCS1、SOCS3及內(nèi)參β actin上、下游引物，收集肝素抗凝血3ml，用紅細(xì)胞裂解液分離外周血單個核細(xì)胞，TRIZOL提取總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)為引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA，采用半定量RT—PCR法檢測外周血單個核細(xì)胞中SOCS1、SOCS3mRNA表達(dá)。 (3)數(shù)據(jù)分析采用2-△△Ct法，Ct值的定義：PCR擴增

6、過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達(dá)到設(shè)定的閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)次數(shù)．計算公式：F=2-[待測組目的基因平均Ct值—待測組管家基因平均C±值]—[對照組目的基因平均Ct值—對照組管家基因平均Ct值] 3.3統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計，兩組均數(shù)比較采用t檢驗，等級相關(guān)資料使用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析，檢驗水準(zhǔn)是0.05。 四、結(jié)果： 4.1一般資料 本研究90例乙肝患者，正常對

7、照組10例，男性7例，女性3例，最小24歲，最大40歲，平均年齡28.2歲。 表1 HBV相關(guān)性肝病基礎(chǔ)資料 4.2乙肝相關(guān)性肝病外周血單個核細(xì)胞中SOCS1和SOCS3表達(dá) 正常組、肝衰竭組、肝硬化組、慢性肝炎組外周血單個核細(xì)胞中均可見SOCS1、SOCS3mRNA表達(dá)，對肝衰竭組、肝硬化組、慢性肝炎組和正常組進(jìn)行兩兩比較，結(jié)果顯示各組SOCS1mRNA在外周血中表達(dá)水平不同，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值均>0.0

8、5)。 SOCS3mRNA在肝衰竭組外周血單個核細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于正常組，是正常組的4.39倍，P值=0.012(<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；肝硬化組SOCS3mRNA表達(dá)高于正常組，P值=0.001(<0.01)，是正常組的3.9倍，慢性肝炎組SOCS3表達(dá)與正成組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4.3外周血中SOCS1、SOCS3 mRNA表達(dá)與抗病毒治療、HBeAg、乙肝病毒復(fù)制狀態(tài)的關(guān)系

9、 4.3.1 SOCS1、SOCS3 mRNA表達(dá)與抗病毒治療的關(guān)系 根據(jù)是否有2周以上核苷類抗病毒藥物治療史，將肝衰竭組、肝硬化組患者分為抗病毒組及綜合治療組，采用T檢驗法，分析各組SOCS1、SOCS3表達(dá)與抗病毒治療的關(guān)系。 結(jié)果顯示：肝衰竭、肝硬化抗病毒組和綜合治療組外周血中SOCS1、SOCS3mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P值>0.05)。 4.3.2 SOCS1、SOCS3 mRNA表達(dá)與HBeAg

10、關(guān)系 肝衰竭、慢性肝炎HBeAg陽性組、陰性組SOCS1、SOCS3在外周血單個核細(xì)胞中的表達(dá)無差異(P>0.05) 肝硬化HBeAg陽性組SOCS1mRNA表達(dá)高于陰性組，P值=0.021(<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，SOCS3表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 4.3.3 SOCS1、SOCS3 mRNA表達(dá)與HBV—DNA定量關(guān)系 慢性肝炎外周血中SOCS1因子表達(dá)水平與血HBV DNA定量表達(dá)水平之間存在

11、負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(rs=-0.555，p=0.017<0.05)。SOCS3與血HBVDNA定量表達(dá)水平之間無相關(guān)性。 肝衰竭、肝硬化外周血中SOCS1、SOCS3表達(dá)水平與血清HBV DNA定量之間無相關(guān)性(p>0.05)。 4.4外周血單個核細(xì)胞中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平與病情輕重的關(guān)系 采用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析，對各組外周血單個核細(xì)胞中SOCS1、SOCS3mRNA表達(dá)水平與肝功生化

12、指標(biāo)(PT、PTA、ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間的相關(guān)關(guān)系進(jìn)行分析。 4.4.1乙肝慢加急肝衰竭患者 結(jié)果顯示，SOCS1、SOCS3mRNA表達(dá)水平與肝功生化指標(biāo)、MELD評分無相關(guān)性(P>0.05)。 4.4.2乙肝肝硬化患者 肝硬化外周血單個核細(xì)胞中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平顯著相關(guān)，(rs=0.524，P=0.003，P<0.01)。SOCS1表達(dá)水平與乙肝肝

13、硬化臨床生化指標(biāo)PT負(fù)相關(guān)，(rs=—0.515，P=0.004，P<0.01)，與PTA正相關(guān)(rs=0.509，P=0.004，P<0.01)。SOCS1表達(dá)水平與其它肝功生化指標(biāo)(ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間無相關(guān)性。SOCS3mRNA表達(dá)與肝功生化指標(biāo)(PT、PTA、ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL)及MELD評分之間無顯著性相關(guān)。 4.4.3慢性乙型肝炎患者 SOC

14、S1表達(dá)水平與慢性肝炎臨床生化指標(biāo)AST負(fù)相關(guān)，(rs=—0.533，P值為0.019，P<0.05)，但與ALT、ALB、TBIL、DBIL、PT、PTA、MELD評分無顯著性相關(guān)(P>0.05)。SOCS3表達(dá)水平與慢性乙型肝炎臨床生化指標(biāo)ALT、AST、ALB、TBIL、DBIL、PT、PTA、MELD評分均無明顯相關(guān)，(P>0.05)。 4.5外周血中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平之間的關(guān)系 肝衰竭外周血單個核細(xì)

15、胞中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平顯著正相關(guān)，(rs=0.737，P值為0.000，P<0.01)。 肝硬化外周血單個核細(xì)胞中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平顯著正相關(guān)，(rs=0.57，P值為0.011，P<0.05)。 慢性肝炎外周血單個核細(xì)胞中SOCS1和SOCS3表達(dá)水平無相關(guān)(P>0.05)。 五、結(jié)論： 1.乙肝肝衰竭、肝硬化患者外周血單個核細(xì)胞中SOCS3mRNA表達(dá)增高，肝硬化組SOCS1m