血細(xì)胞分析儀原理一

1、第三章 血液分析儀檢驗(yàn),重點(diǎn) : 血液分析儀測(cè)定的原理、方法,血液分析儀功能：①全血細(xì)胞計(jì)數(shù)功能。 ②白細(xì)胞分類功能。③擴(kuò)展功能。,血液分析儀優(yōu)勢(shì)檢測(cè)項(xiàng)目多速度快精度高易操作,§2 檢測(cè)原理,檢測(cè)原理,,,電學(xué),光學(xué),,電阻抗法,,射頻電導(dǎo)法,激光散射法,分光光度法,,血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理,懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞相對(duì)于電解質(zhì)溶液為非導(dǎo)電顆粒，其電阻比溶液大。利用兩者導(dǎo)電性能的差異，當(dāng)體積大小不同的血細(xì)胞通過計(jì)數(shù)小

2、孔時(shí)，可引起小孔內(nèi)，外電流或內(nèi)電壓的變化，形成與血細(xì)胞數(shù)量相當(dāng)，體積大小相應(yīng)的脈沖電壓，從而間接區(qū)分血細(xì)胞群，并分別計(jì)數(shù)即電阻抗原理（庫爾特原理）,一、電阻抗法,血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理即庫爾特原理（Coulter principle):根據(jù)血細(xì)胞非傳導(dǎo)的性質(zhì)，以電解質(zhì)溶液中懸浮的血細(xì)胞在通過計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起的電阻變化進(jìn)行檢測(cè)為基礎(chǔ)，進(jìn)行血細(xì)胞計(jì)數(shù)和體積測(cè)定。,小孔管是電阻抗法細(xì)胞計(jì)數(shù)的一個(gè)重要組成部分。檢測(cè)期間，當(dāng)電流接通后，位于小孔兩側(cè)的電極產(chǎn)

3、生穩(wěn)定的電流。如果供給的阻抗也是穩(wěn)定的，則小孔的電壓是不變的。,當(dāng)有一個(gè)細(xì)胞通過小孔時(shí)，由于電阻增加，于瞬間引起電壓變化——通過脈沖。細(xì)胞體積越大，脈沖振幅越高；細(xì)胞數(shù)量越多，脈沖數(shù)量也越多。,脈沖信號(hào)經(jīng)過下列步驟，得出細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果：放大 由于血細(xì)胞通過微孔時(shí)產(chǎn)生的脈沖信號(hào)微弱，必須通過放大器將訊號(hào)放大。2. 閾值調(diào)節(jié) 在一定范圍內(nèi)調(diào)節(jié)參考電平的大小，使計(jì)數(shù)結(jié)果盡可能符合實(shí)際。,3. 甄別 利用甄別器根據(jù)閾值調(diào)節(jié)器提供的參考

4、電平，將低于參考電平的假訊號(hào)（細(xì)胞碎片，雜質(zhì)微粒）去掉。4. 整形 通過整形器作用，將脈沖訊號(hào)波形修整成一致標(biāo)準(zhǔn)的平頂波，才能觸發(fā)電路,5 計(jì)數(shù) 血細(xì)胞的脈沖信號(hào) 放大 甄別 整形后，送入計(jì)數(shù)系統(tǒng)，得出計(jì)數(shù)結(jié)果。 電阻抗法可準(zhǔn)確測(cè)量出細(xì)胞（或類似顆粒）的大小，是三分群血液分析儀的主要應(yīng)用原理，并與光學(xué)檢測(cè)原理組合應(yīng)用于五分類血液分析儀中。,,,,,,,三分群血液分析儀基本組成,① 信號(hào)

5、發(fā)生器各種微粒通過檢測(cè)小孔產(chǎn)生電阻抗脈沖信號(hào)的檢測(cè)源。②放大器將血細(xì)胞微弱脈沖信號(hào)放大以觸發(fā)電路系統(tǒng)。③閾值調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)能區(qū)分不同群細(xì)胞合適的信號(hào)電平。,④甄別器去除非參考電平的各種假信號(hào)以提高計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。⑤整形器將不一致的脈沖波形信號(hào)調(diào)整為標(biāo)準(zhǔn)的波形后觸發(fā)計(jì)數(shù)電路系統(tǒng)。⑥計(jì)數(shù)系統(tǒng) 將整形后的血細(xì)胞脈沖信號(hào)顯示為不同類群的細(xì)胞數(shù)。,二、激光散射法,激光散射法應(yīng)用了流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry, FCM) 檢

6、測(cè)原理。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)原理：細(xì)胞通過激光束被照射時(shí)，產(chǎn)生與細(xì)胞特征相應(yīng)的各種角度的散射光。對(duì)經(jīng)信號(hào)檢測(cè)器接收的散射光信息進(jìn)行綜合分析，即可準(zhǔn)確區(qū)分正常類型的細(xì)胞。,,,,半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞術(shù),側(cè)向熒光（RNA/DNA含量）,激光（波長(zhǎng)633nm）,側(cè)向散射（細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，如核的大小）,,前向散射光 （細(xì)胞大?。?低角度散射光（前向散射光）：反映細(xì)胞的數(shù)量和表面體積大小。高角度散射光（側(cè)向散射光）：反映細(xì)胞的內(nèi)部顆粒、細(xì)胞核

7、等復(fù)雜性。,激光散射法在區(qū)別體積相同而類型不同的細(xì)胞特征時(shí)，比電阻抗法分群更加準(zhǔn)確。故激光散射法已成為現(xiàn)代五分類血液分析儀的主要檢測(cè)原理之一。,流式細(xì)胞儀的技術(shù)特點(diǎn),流式細(xì)胞儀在設(shè)計(jì)上采用了許多獨(dú)特的技術(shù)，比如液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、信號(hào)測(cè)量和細(xì)胞分選方面都有自己的技術(shù)特點(diǎn)。著重講述液流系統(tǒng)——鞘流原理。,,,通常把標(biāo)本流的流速控制在10m/s以內(nèi)，就能保持標(biāo)本流處于穩(wěn)流狀態(tài)。外面包被有高速流動(dòng)的鞘液，實(shí)現(xiàn)標(biāo)本與鞘液穩(wěn)定的同軸流動(dòng)狀態(tài)。

8、同時(shí)利用液流聚焦原理，使標(biāo)本流直徑變小，通常只有10～20μm，避免細(xì)胞多個(gè)重疊進(jìn)入檢測(cè)區(qū)。,激光散射法系統(tǒng)基本組成,1、光源氣體（氦－氖）激光或固體（半導(dǎo)體）激光（單色光）；鎢光源（多色光）。2、鞘流維持顆粒于液流中央，順序、單個(gè)、恒速向前流動(dòng)，即流體動(dòng)力學(xué)聚焦。,3、細(xì)胞懸液被檢測(cè)細(xì)胞（顆粒）的懸液，由氣壓導(dǎo)入流動(dòng)池。4、光檢測(cè)器接受來自各種角度的散射光或吸收光信號(hào)，并轉(zhuǎn)換成相應(yīng)特征的電信號(hào),三、射頻電導(dǎo)法,射頻（r

9、adio frequency, RF) 指射頻電流，是每秒變化大于10 000次的高頻交流電磁波。高頻電流能通過細(xì)胞壁。 用高頻電磁探針滲入細(xì)胞膜脂質(zhì)可測(cè)定細(xì)胞的導(dǎo)電性，提供細(xì)胞內(nèi)部化學(xué)成分、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)、顆粒成分等特征信息。,,,四、分光光度法,Lambert-Beer定律：A=lg(I0 / I)A:吸光度，或稱光密度；I0：?jiǎn)紊肷涔鈴?qiáng)度； I ：透過光強(qiáng)度分光光度法儀器的組成：?jiǎn)紊庠?、檢測(cè)池和比色容器、光檢測(cè)器。,分

10、光光度法是所有類型的血細(xì)胞分析儀檢測(cè)Hb 的原理：被稀釋的血液加入溶血?jiǎng)┖螅t細(xì)胞溶解，釋放血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┙Y(jié)合形成Hb衍生物，在特定波長(zhǎng)（530～550nm）下比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成比例。,,血紅蛋白,,血紅蛋白衍生物,,吸光度,,Hb濃度,溶血?jiǎng)?,,λ＝540nm,,,,,血紅蛋白測(cè)定的溶血?jiǎng)?溶血?jiǎng)?,,含氰化物的溶血?jiǎng)?不含氰化物的溶血?jiǎng)?分群,經(jīng)溶血素處理脫水后，血細(xì)胞體積大小發(fā)生了變化?。?！第一群（