糖化血紅蛋白標準化及檢測方法比較

1、糖化血紅蛋白,標準化及不同檢測方法的差異,基蛋生物 市場推廣部,PPT模板下載：www.1ppt.com/moban/ 行業(yè)PPT模板：www.1ppt.com/hangye/ 節(jié)日PPT模板：www.1ppt.com/jieri/ PPT素材下載：www.1ppt.com/sucai/PPT背景圖片：www.1ppt.com/beijing/ PPT圖表下載：www.1ppt.co

2、m/tubiao/ 優(yōu)秀PPT下載：www.1ppt.com/xiazai/ PPT教程： www.1ppt.com/powerpoint/ Word教程： www.1ppt.com/word/ Excel教程：www.1ppt.com/excel/ 資料下載：www.1ppt.com/ziliao/ PPT課件下載：www.1ppt.co

3、m/kejian/ 范文下載：www.1ppt.com/fanwen/ 試卷下載：www.1ppt.com/shiti/ 教案下載：www.1ppt.com/jiaoan/,內(nèi)容目錄,,,,,糖化血紅蛋白標準化,,,,,糖化血紅蛋白（GHB）,檢測方法及產(chǎn)品示例,常用檢測方法之比較,1,2,3,4,糖化血紅蛋白（GHb）,GHb是指結合了任何形式碳水化合物的血紅蛋白，血紅蛋白與糖基發(fā)生非酶促，形成了不可逆的

4、復合物。,,,成人血紅蛋白分三種，HbA為主要成人Hb,非糖化Hb,糖化Hb,,血紅蛋白,<1%,<1%,4%-6%,糖化血紅蛋白的形成,血紅蛋白HbA由兩個α亞基和兩個β亞基組成，α和β亞基上都有糖化位點，其中β亞基第1位纈氨酸主鏈氨基糖化率最高。,根據(jù)糖種類，糖基化血紅蛋白可分為葡萄糖糖化、果糖糖化及乳糖糖基化血紅蛋白等。人體內(nèi)游離的葡萄糖含量遠高于其他糖類物質(zhì)，β 亞基的氮端纈氨酸主鏈氨基的糖化概率最高，因此體內(nèi)大部

5、分糖基化血紅蛋白為β 亞基氮端纈氨酸與葡萄糖的加合物，該物質(zhì)被命名為HbA1c。,HbA1c糖基化位點結構圖,α亞基,β亞基,血紅素,血紅素,血紅素,血紅素,檢測方法學分類,1、親和層析2、免疫法3、酶法4、顯色法,根據(jù)Ghb和非GHb帶電不同,,01,,基于Hb上糖基化基團的結構特點,,1、離子交換層析2、電泳法3、等電點聚焦法,,02,檢測方法：離子交換層析,主要有高效液相色譜法( high performance liq

6、uid chromatography，HPLC) 和手工微柱法。此方法是基于血紅蛋白β 鏈N 末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下，HbA1c 攜帶的正電荷相對較少，因此可通過離子交換層析法將其與其他組分分離。,檢測方法：毛細管電泳法,毛細管電泳能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體，樣品用量少、操作簡便、重復性好、省時、高效。完全自動化操作，簡單易用，在減少人為誤差的基礎上，重復性也得到了極大提高。,SEBIA全自

7、動高壓液相毛細管電泳儀,檢測方法：瓊脂凝膠電泳法,Hb于酸性緩沖液條件下(pH6.0)，在瓊脂糖凝膠上的電泳遷移取決于Hb在凝膠上的吸附情況及其所帶的電荷。HbA0因其Ｎ末端的纈氨酸殘基對凝膠的負電荷有高度的親和力，因此它的遷移速率減慢。HbA1c因它所連接的糖的阻斷作用，不可再與凝膠結合，利用HbA1c和HbA0對凝膠的親和力不同，導致的電泳遷移速率也不同，通過電泳將各成分分開。,SEBIA蛋白質(zhì)電泳儀,檢測方法：等電點聚集法,在聚丙

8、烯酞凝膠中加入載體兩性介質(zhì)（如ampholin）的薄板上形成一個由陽極到陰極逐漸增加的pH梯度。溶血液中各個組分將移動到各自等電點的pH位置上，這樣就得到比一般電泳法更好的分劃效果和比較集中的色帶。,GE Ettan IPGphor 3等電聚焦電泳儀,檢測方法：親和層析法,由交聯(lián)了間氨基苯硼酸的瓊脂糖珠作為分離載體。當總的GHb通過載體時，硼酸可與整合在血紅蛋白分子中的葡萄糖順位二醇基發(fā)生可逆性結合，使糖化的Hb選擇性地結合于凝膠柱上，

9、其他非糖化Hb等隨緩沖液流出；然后用另一種含糖或多羥化合物的緩沖液將GHb洗脫下來，利用兩部分Hb本身的顏色，在415nm條件下測定并計算出親和色譜所測的GHb。,伯樂In2it糖化血紅蛋白儀,Alere Afinion? AS100 Analyzer,檢測方法：免疫法,化學發(fā)光法：又叫離子捕獲法，采用離子捕捉免疫分析法，應用抗原抗體反應原理，聯(lián)合熒光標記物，通過連接帶負電的多陰離子復合物，吸附到帶正電的纖維表面，經(jīng)過一系列徹底清洗等步

10、驟后，測定熒光強度變化率，計算濃度。,檢測方法：免疫法,比濁法：又有膠乳凝集法和免疫比濁法兩種。可實現(xiàn)和自動化分析儀很好地結合起來，具有快速、準確、特異性強、重復性好、靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點，可以使用自動化分析儀進行批量檢測。,檢測方法：免疫法,免疫層析法：免疫層析法操作簡便易行、快速準確、試劑穩(wěn)定。更易于實現(xiàn)POC檢測，有助于醫(yī)生即時獲悉患者血糖水平，并及時給予患者醫(yī)療指導，以避免糖尿病診斷和治療的延誤，未來有著較為廣闊的應用前

11、景。,Bayer 拜安時手持式糖化檢測儀,檢測方法：酶法,全血經(jīng)溶血處理后，用特異蛋白內(nèi)切酶將Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再經(jīng)果糖氨基酸氧化酶作用下產(chǎn)生過氧化氫（H2O2），H2O2的濃度與血液中GHb的含量呈正比。 H2O2在過氧化物酶的作用下與相應的色原耦聯(lián)，發(fā)生顏色變化，根據(jù)其變化程度可得H2O2濃度，進而得知樣本中GHb的含量。,積水醫(yī)療酶法生化試劑,糖化血紅蛋白檢測標準化,,,瑞典Mono S 方法,日本JDS/JSCC 方法

12、,,,,美國NGSP方法,對不同的HbA1c檢測方法采用統(tǒng)一參考標準(采用HPLC Bio-Rex 70 陽離子交換柱)進行校準，使不同方法所測結果具有可比性,2000 年，JSCC 啟用KO500 陽離子HPLC ，與JDS 合作設計了新的HbA1c檢測校準物，通過新校準品校準后的KO500 HPLC HbA1c檢測法，成為JDS/JSCC 的參考標準化方案,2004 年，GE Healthcare 在其離子交換操作手冊中，詳細介紹了

13、Mono S HPLC 方法用于檢測HbA1c的操作步驟。證實Mono S 5/50 GL 柱檢測精度上具有優(yōu)越性。,IFCC法：2007 年國際臨床化學聯(lián)合會(IFCC) 重新明確了HbA1c 的命名、性質(zhì)、單位: 全稱為β 鏈血紅蛋白β鏈N 末端脫氧果糖基血紅蛋白; 特別強調(diào)HbA1c 測定的是“物質(zhì)分數(shù)”，而不是“質(zhì)量分數(shù)”; 推薦使用( mmol /mol) 作為HbA1c 的單位，此建議為HbA1c 結果數(shù)據(jù)提供了非常明確的計

14、量單位，可溯源到溯源鏈的最高等級國際單位制。,糖化血紅蛋白檢測標準化,2004 年，Hoelzel 等發(fā)表了關于HbA1c檢測的IFCC 標準法與美國、日本、瑞典3 個國家標準法之間的比較研究報告。,三種國標法的基本原理是通過蛋白質(zhì)表面凈電荷的差異對Hb 進行分離，并未對HbA1c具有特異性，其結果的溯源僅來自于HPLC 分離的色譜圖的峰值，三者所測得“HbA1c波峰”可能包含其他無法分離開來的非糖化Hb 成分，其測定結果都略高于IFC