非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體第19、21號(hào)外顯子突變研究

1、1,非小細(xì)胞肺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體第19、21號(hào)外顯子突變研究浙江省腫瘤醫(yī)院葉雪梅 毛偉敏 劉杏娥,2,浙江省2009年癌癥發(fā)病率排名,在癌癥發(fā)病人群中，男性肺癌占第一位，女性為第二位。,我省惡性腫瘤報(bào)告發(fā)病率為226.12/10萬(wàn)，死亡率為171.03/10萬(wàn)，占總死亡人數(shù)的27.67%，居我省死因首位。,3,靶向治療的重要性,初次確診3/4患者局部晚期及晚期,失去手術(shù)機(jī)會(huì),以化療主為的綜合治療手段鉑類兩藥聯(lián)合方案是目

2、前標(biāo)準(zhǔn)的 化療方1.仍不能明顯延長(zhǎng)晚期肺癌的生存期2.相互比較無(wú)特別優(yōu)秀方案3.達(dá)到了一個(gè)平臺(tái), 傳統(tǒng)方案1年生存率20%-25% 第3代方案1年生存率33%,2年 生存率11%分子靶向藥物毒性較小，耐受性 較好,,靶向治療的目的:改善患者生活質(zhì)量，延長(zhǎng)生存期,4,EGFR Iinhibition Via Tyrosine Kinase Inhibitors,,,,,,

3、,,,有效預(yù)測(cè)因子,,,,,,課題思路,目的,觀察TKI療效與EGFR突變的關(guān)系,方法,收集標(biāo)本（90例）,提取DNA（酚氯法）,DNA測(cè)序（正反雙向）,9,PCR產(chǎn)物電泳圖片,,A,B,A:Exon19 擴(kuò)增片段電泳圖（371bp）,B:Exon21擴(kuò)增片段電泳圖（371bp）,(注：1為marker，2～10分別為9個(gè)不同標(biāo)本),Exon19、exon21目的片段,10,1. 突變分布,,,delE746-A750delL7

4、47-P753insS S749S 2244(A→G),,突變類型,exon19,,L858R（T→G）L861Q(T→A),,exon21,11,2.Mutation types of EGFR in Exon 19 and Exon21,12,1.delL747- P753insS,CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTCCCGTCGCTATC

5、AAGGAATCGAAAGCCAAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTTCTGC,,,13,2.delE746-A750,CCCGTCGCTATCAAGGAATTAAGAGAAGCAACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCCCGTCGCTATCAAGACATCTCCGAAAGCCAACAAGGAAATCCTTCGATGTGAGTTT,,,14,3. L858R（T→G）,GATTTTGGGCTGGCCA

6、AACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAAGATTTTGGGCGGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA,,,15,4.L861Q(T→A),GATTTTGGGCTGGCCAAACTGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAAGATTTTGGGCTGGCCAAACAGCTGGGTGCGGAAGAGAAAGAA,,,16,5.S749S 2244(A→G)雜合子突變,TGGCAGCTGCTCTGCT

7、CTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCTTGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT,,,17,6.S749S 2244(A→G)純合子突變,TGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCATCTCCACATCCTTGGCAGCTGCTCTGCTCTAGACCCTGCTCGTCTCCACATCCT,,,18,Table3. Relationship between

8、EGFR mutation and the clinical characters of NSCLC patients,,,,19,Table 4. Correlation between EGFR exon19 samesense mutation and the clinical character of NSCLC,,20,分析,從統(tǒng)計(jì)表中看,結(jié)果表明四種經(jīng)典突變的突變率與患者的性別、病理類型、吸煙狀態(tài)相關(guān)，而與年齡、TNM分期無(wú)

9、關(guān)。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)47例患者發(fā)生了Exon19上的同義突變S749S 2244(A→G) ,總突變率為52.2%，此為全球首次報(bào)道。統(tǒng)計(jì)分析顯示該突變與病理類型相關(guān),多發(fā)生于鱗狀細(xì)胞癌中，與其他因素沒(méi)發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有關(guān)同義突變的生物遺傳學(xué)效應(yīng)有待進(jìn)一步深入研究。,討論,EGFR-TK突變類型,EGFR突變與EGFR-TKI療效的關(guān)系,EGFR突變與患者臨床特征的關(guān)系,各種突變類型與EGFR靶向藥物療效的關(guān)系,同義突變及其生

10、物遺傳學(xué)效應(yīng)探討,主要突變類型,,delE746-A750 delS752-I759 delL747-T751insS delL747-P753insS delL747-A750,,S768、V769、R776、T790 S768I、 G719S,、S768I/G719S、D761-E762insEAFQ,,L858R L861Q L833V H835L Q852,Exon19,exon21,exon20,46%,5%

11、,41%,23,結(jié)論,1、90例NSCLC患者檢測(cè)到29例突變，突變率達(dá)32.2%。其中Exon19和Exon21各占總突變的55.2%和44.8%。2、EGFR基因Exon19及Exon21的突變主要見(jiàn)于腺癌，尤其是細(xì)支氣管肺泡癌、女性、非吸煙患者；突變與患者年齡及TNM分期無(wú)相關(guān)性。3、檢測(cè)到了兩種經(jīng)典的Exon19缺失突變和兩種Exon21的替代點(diǎn)突變，它們是：delL747-P753insS（9例）和delE746-A750