實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法

1、實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌的芽孢染色法,1,一、實(shí)驗(yàn)的目的要求,2,學(xué)習(xí)并掌握芽孢染色法初步了解芽孢桿菌的形態(tài)特征,,二、實(shí)驗(yàn)原理,芽孢又稱內(nèi)生孢子，能否形成芽孢及芽孢的形狀、芽孢在孢囊的位置、芽孢囊是否膨大等特征是鑒定細(xì)菌的依據(jù)之一。芽孢壁厚，透性低，不易著色，一般染色法只能使菌體著色而芽孢不著色（芽孢呈無(wú)色透明狀），而一旦染上色后又難以脫色。芽孢染色法根據(jù)芽孢特點(diǎn)設(shè)計(jì)，除了用著色力強(qiáng)的染料外，還需要加熱，以促進(jìn)芽孢著色。當(dāng)染芽孢時(shí)，菌體

2、也會(huì)著色，然后水洗，芽孢染上的顏色難以滲出，而菌體會(huì)脫色。然后用對(duì)比度強(qiáng)的染料對(duì)菌體復(fù)染，使菌體和芽孢呈現(xiàn)出不同的顏色，因而能更明顯地襯托出芽孢，便于觀察。,細(xì)菌芽孢的基本構(gòu)造,4,孢外壁芽孢衣皮層芽孢壁芽孢質(zhì)膜芽孢質(zhì)芽孢核區(qū),,芽孢具有多層厚而致密的胞膜，由內(nèi)向外依次為核心、內(nèi)膜、芽孢壁、皮質(zhì)、外膜、芽孢殼和芽孢外衣 .,細(xì)菌芽孢的基本特性,5,形成芽孢需要一定的外界條件，這些條件因菌種而異。炭疽芽孢桿菌在有氧(O2)條件

3、下才能形成芽孢，而破傷風(fēng)芽孢桿菌則在無(wú)氧條件下形成芽孢。通常細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)不足時(shí)形成芽孢，但蘇云金芽孢桿菌是例外。,,細(xì)菌芽孢的基本特性,6,芽孢對(duì)惡劣環(huán)境條件有很強(qiáng)的抵抗能力，尤其耐高溫。有的芽孢可耐100℃沸水煮沸數(shù)小時(shí)。在一定條件下，芽孢保持活力數(shù)年至數(shù)十年之久。高溫滅菌的判斷標(biāo)準(zhǔn)就是細(xì)菌的芽孢是否被殺滅。,細(xì)菌芽孢的基本特性,7,芽孢在適宜條件下，營(yíng)養(yǎng)物如葡萄糖、乳酸和水分，會(huì)發(fā)芽形成菌體，但細(xì)菌的數(shù)量并未增加，所以芽孢不是一種繁殖

4、方式。,芽孢抵抗力強(qiáng)的原因,8,1.芽孢含水量少，蛋白質(zhì)受熱后不易變性；2.芽孢具有多層致密的厚膜，理化因素不易透入；3.芽孢中含有一種特有的化學(xué)組分吡啶二羧酸（DPA），DPA與鈣結(jié)合生成的鈣鹽能提高芽孢中各種酶的熱穩(wěn)定性。,三、實(shí)驗(yàn)器材,1.菌種：枯草芽孢桿菌、梭狀芽孢桿菌。2.染色劑： 5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液3.儀器、材料：二甲苯、香柏油、蒸餾水、95%乙醇、顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙

5、、吸水紙。,四、實(shí)驗(yàn)方法（Schaeffer－Fulton氏染色法）,1.制片：常規(guī)方法涂片、干燥、固定。2.染色：(1) 涂片上滴加3－5滴5%孔雀綠水溶液。(2)用試管夾夾住載玻片一端，微火加熱，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)，計(jì)時(shí)5min。加熱過(guò)程中切勿使染料蒸干，及時(shí)補(bǔ)加染液。待玻片冷卻后，用自來(lái)水沖洗至孔雀綠不再褪色為止。(3)0.5%堿性番紅復(fù)染2min，水洗。(4) 制片干燥后油鏡觀察。芽孢呈綠色，菌體紅色,五、實(shí)驗(yàn)