改良抗酸染色法在結(jié)核性腦膜炎診斷中的應(yīng)用價值.pdf

1、目的:結(jié)核性腦膜炎(tuberculousmeningitis，TBM)簡稱結(jié)腦，占全身結(jié)核病的5-10％，是最嚴重的肺外結(jié)核病，致死率和致殘率較高，為全球性的公共衛(wèi)生問題，早期診斷和及時規(guī)范治療是降低致死率和致殘率的關(guān)鍵。結(jié)腦的致病菌是結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)簡稱結(jié)核桿菌(tuberclebacilli)，屬分枝桿菌屬，因菌體含大量分枝菌酸，故不易著色，但加溫或延長染色時間后能抵抗鹽酸

2、乙醇的脫色，為抗酸桿菌（acid-fastbacilli）的一種類型。若腦脊液抗酸染色陽性，則提示結(jié)腦的可能性極大。傳統(tǒng)抗酸染色法的抗酸桿菌檢出率低，對臨床結(jié)腦診斷的意義不大。改良抗酸染色法通過提高有限腦脊液中抗酸桿菌的檢出率，為臨床結(jié)腦的診斷提供直接的病原學(xué)依據(jù)。品紅為抗酸染液的重要成分之一，可以與抗酸桿菌的核酸相結(jié)合，在光鏡下呈現(xiàn)紅色外觀，另外，品紅具有自發(fā)熒光的特性，在特定波長的熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)橘紅色外觀，更易于被發(fā)現(xiàn)。通過

3、對傳統(tǒng)抗酸染色法進行改良，尋求有助于結(jié)腦診斷的高效、簡便、快速、經(jīng)濟的實驗室檢測方法。
　　 方法:對臨床上考慮結(jié)腦患者的病歷資料進行收集，依據(jù)最新的結(jié)腦臨床診斷標準進行評分，根據(jù)得分情況入選確診結(jié)腦組1例，很可能結(jié)腦組15例，可能結(jié)腦組30例，不可能結(jié)腦組5例，病例組共計51例，腦脊液標本共126份。對照組為非結(jié)腦，共36例，腦脊液標本38份，包括腦膜癌病12例，化膿性腦膜炎5例，隱球菌性腦膜炎4例，中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病4例，吉

4、蘭巴雷綜合征5例，腦囊蟲病2例，多發(fā)性硬化2例，病毒性腦膜炎1例，布氏桿菌病1例。病例組與對照組的所有病例均留取至少一次的新鮮腦脊液標本行改良抗酸染色，分別在光學(xué)顯微鏡及熒光顯微鏡下計數(shù)抗酸桿菌的數(shù)量，記錄并對結(jié)果進行分析。
　　 結(jié)果:
　　 1改良抗酸染色法發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌的形態(tài):光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果，在淡藍色背景下發(fā)現(xiàn)的抗酸桿菌為淡紅色，呈細長略彎曲的桿狀，有的呈分枝狀，部分呈短桿狀，測量其長度2～5μm，寬度0.3～0

5、.5μm，多成堆出現(xiàn)，大部分為胞外菌，可見可疑胞內(nèi)菌，位于嗜中性粒細胞、單核細胞及淋巴細胞內(nèi)。熒光顯微鏡下觀察，抗酸桿菌在黑暗背景下為橘紅色外觀，形態(tài)及大小均與光鏡下保持一致，部分視野內(nèi)，相較于光鏡觀察更易于發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。
　　 2病例組與對照組抗酸桿菌檢出情況:病例組51例光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例檢出抗酸桿菌，檢出率86.27％;對照組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有5例檢出抗酸桿菌，5例抗酸染色陽性者，其中3例為腦膜癌病，1例為腦

6、囊蟲病，1例為化膿性腦膜炎，抗酸桿菌檢出率13.89％。病例組與對照組抗酸桿菌檢出率，兩者比較具有統(tǒng)計學(xué)差別(P＜0.001)。改良抗酸染色的敏感性為84.78％，特異性為86.11％。
　　 3光鏡鏡檢與熒光鏡檢結(jié)果:以病例數(shù)為觀察對象，病例組光鏡鏡檢與熒光鏡檢均有44例抗酸染色陽性，抗酸桿菌檢出率為86.27％。以腦脊液份數(shù)為觀察對象，126份腦脊液標本中，光鏡鏡檢抗酸染色陽性85份，其中1+:50份、2+:28份、3+:7

7、份，抗酸桿菌檢出率為67.46％，熒光鏡檢抗酸染色陽性為90份，其中1+:49份、2+:31份、3+:10份，抗酸桿菌檢出率71.43％。兩種鏡檢方法檢出率比較無統(tǒng)計學(xué)差別(P=0.359)，結(jié)果具有一致性(P＜0.001)。
　　 4光鏡鏡檢聯(lián)合熒光鏡檢抗酸桿菌檢出率:病例組126份腦脊液標本，光鏡鏡檢抗酸染色陽性85份，抗酸桿菌檢出率為67.46％，熒光鏡檢抗酸染色陽性為90份，抗酸桿菌檢出率71.43％，光鏡聯(lián)合熒光鏡檢時

8、，抗酸染色陽性97份，檢出率76.98％，比單純光鏡鏡檢或熒光鏡檢的檢出率高，經(jīng)比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.001，P=0.016)。
　　 5單次送檢病例與重復(fù)送檢病例抗酸桿菌檢出率比較:病例組51例中，單次送檢病例26例，重復(fù)送檢病例25例。光鏡鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢組抗酸桿菌陽性均為22例，抗酸桿菌檢出率分別為84.62％、88.00％，兩者比較無統(tǒng)計學(xué)差別(P=0.523);熒光鏡檢單次送檢與重復(fù)送檢抗酸桿菌陽性分別為2

9、1例、23例，抗酸桿菌檢出率分別為80.77％、92.00％，兩者比較亦無統(tǒng)計學(xué)差別(P=0.226)。
　　 6腦脊液細胞數(shù)與抗酸染色關(guān)系:病例組腦脊液標本按細胞計數(shù)達100與否分為兩組，細胞計數(shù)＜100共14份，抗酸染色陽性8份，抗酸桿菌檢出率57.14％，細胞計數(shù)≥100共101份，抗酸染色陽性72份，抗酸桿菌檢出率71.29％，兩組抗酸桿菌檢出率經(jīng)統(tǒng)計學(xué)比較無意義(P=0.218)。
　　 7腦脊液細胞學(xué)與抗酸染

10、色關(guān)系:病例組27份標本以嗜中性粒細胞為主，抗酸染色陽性24份，抗酸桿菌檢出率88.89％;22份標本呈混雜細胞學(xué)，其中抗酸染色陽性18份，抗酸桿菌檢出率81.82％;51份標本以淋巴細胞為主，抗酸染色陽性29份，抗酸桿菌檢出率56.86％。腦脊液細胞學(xué)呈混雜細胞學(xué)或以嗜中性粒細胞為主者，抗酸桿菌檢出率高于以淋巴細胞為主者，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.035，P=0.004)。
　　 8病例組各組分抗酸桿菌檢出率比較:以病例數(shù)為

11、觀察對象，確診組1例，抗酸染色陽性;很可能組15例，抗酸染色陽性12例;可能組30例，抗酸染色陽性26例;不可能組5例，抗酸染色均陽性。以腦脊液標本數(shù)為觀察對象，確診組3份，抗酸染色陽性2份;很可能組51份，抗酸染色陽性36份;可能組65份，抗酸染色陽性42份;不可能組7份，抗酸染色陽性5份。兩種不同觀察對象下進行統(tǒng)計分析，各組分抗酸桿菌檢出率均無差別(P=0.692，P=0.915)。
　　 結(jié)論:
　　 1無論是普通

12、光鏡鏡檢還是熒光鏡檢，改良抗酸染色法相較于傳統(tǒng)抗酸染色可以明顯提高腦脊液標本中抗酸桿菌的檢出率，此法敏感性84.78％，特異性86.11％，可作為臨床上可疑結(jié)腦患者篩查的檢測手段，確診仍需結(jié)合其他實驗室檢查結(jié)果。
　　 2改良抗酸染色光鏡鏡檢與熒光鏡檢的抗酸桿菌檢出率無明顯差別，兩種鏡檢結(jié)果一致性較好，將光鏡鏡檢與熒光鏡檢相結(jié)合，可以提高抗酸桿菌檢出率。
　　 3針對同一患者的腦脊液標本，單次送檢與重復(fù)送檢改良抗酸染色的