基于cart治療結(jié)直腸癌的臨床探索研究設(shè)計

1、基于CAR-T治療結(jié)直腸癌的臨床探索研究設(shè)計,陳 瑞 岳 慶東南大學(xué),2016-9-24 蘇州,第十六次全國消化系病學(xué)術(shù)會議,一,腫瘤精準(zhǔn)免疫治療,二,CAR-T在實體瘤上的臨床試驗,三,CAR-T在結(jié)直腸癌上的應(yīng)用,四,結(jié)直腸癌CAR-T治療的展望,Contents,腫瘤發(fā)生的復(fù)雜性,,,,,,,,,惡性轉(zhuǎn)化細胞,體細胞干細胞,DNA損傷與修復(fù),外環(huán)境：輻射，致癌物，病毒感染內(nèi)環(huán)境：代謝，隨機突變，微生態(tài),遺傳因素：原癌基

2、因 100抑癌基因 30,表觀遺傳學(xué)：甲基化組蛋白修飾,基因突變,基因突變積累,免疫系統(tǒng)識別殺傷,細胞凋亡,各種癌癥發(fā)生,發(fā)生機理-太多的未知領(lǐng)域,基因突變逆分化腫瘤干細胞免疫監(jiān)視。。。。。。*蛋白變異引起腫瘤*腫瘤細胞表達PD-L1，可促進腫瘤細胞增殖,腫瘤表現(xiàn)形式,相同組織器官癌癥引發(fā)機理不一致相同的機理引發(fā)癌癥部位不一致腫瘤突變：數(shù)千個突變類型,腫瘤特征精確分型,K-ras密碼子12、13、61的突

3、變。NCCN 2010年臨床指南西妥昔單抗治療前基因檢測。,靶向藥物存在不足：有效性低；容易產(chǎn)生耐藥性；適用范圍窄等,ACT StrategiesPromote antigen presentationEnhance protective T cell responseOvercome immunosuppression,抗腫瘤免疫反應(yīng),腫瘤精準(zhǔn)免疫治療的開端,《科學(xué)》雜志評論作為2013年度最重要的科學(xué)突破的榜首——癌癥的免疫

4、療法。治療的標(biāo)靶是身體的免疫系統(tǒng)而不是直接針對腫瘤，利用T細胞和其它免疫細胞來對抗腫瘤。,程序性死亡因子1 抗體(anti-PD1) 及其它免疫檢查點抗體嵌合抗原受體T細胞療法（CAR-T療法）,腫瘤免疫治療的突破,Cancer immunotherapy drugs have captured nearly 50% of the overall oncology drugs market, generating about $41.

5、0 billion in 2014 alone,靶向性療法對比,,抗體藥物,,過繼免疫細胞治療,嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）技術(shù),CAR-T細胞治療技術(shù)的發(fā)展,,1st,2nd,3rd,4th,CAR-T細胞治療技術(shù)的優(yōu)缺點,黎明前的黑暗,優(yōu)點,VS,缺點,1）CAR-T細胞治療是靶點依賴型的治療 ，但不少腫瘤類型缺少良好的治療靶點；2）已被視為靶點的一些腫瘤相關(guān)抗原，也會在正常細胞低水平表達，導(dǎo)致CART治療可能會產(chǎn)生脫靶毒性，

6、引發(fā)嚴(yán)重副反應(yīng)；3）細胞因子釋放綜合征（CRS）；4）基于病毒表達體系的CAR-T技術(shù)的生物安全性也需要引起重視。,1）CAR改造的T細胞只能瞄定目標(biāo)細胞表面抗原，具有靶向性；2）CAR改造后的T細胞能夠跨越HLA表達下調(diào)這一腫瘤細胞免疫逃逸機制；3）體內(nèi)存留時間長，可以提供持續(xù)的治；4）在腫瘤微環(huán)境中增強抗腫瘤效果，能夠在相對較短的時間內(nèi)產(chǎn)生大量有腫瘤殺傷效力的T細胞。,CAR-T細胞治療的流程,國內(nèi)CAR-T研究現(xiàn)狀,國內(nèi)

7、研究以與全球趨勢相同，CD19仍是最受研發(fā)單位青睞的靶點，占到所有臨床試驗的34%。值得注意的是，在這些靶點中，也不乏一些最新的靶點，比如MCU-1、EPCAM和GPC3等。而且針對實體瘤的研究占到了CAR-T總臨床研究的50%以上。,國內(nèi)CAR-T研究現(xiàn)狀,一,腫瘤精準(zhǔn)免疫治療,二,CAR-T在實體瘤上的臨床試驗,三,CAR-T在結(jié)直腸癌上的應(yīng)用,四,結(jié)直腸癌CAR-T治療的展望,Contents,CAR-T for solid t

8、umor,Combination therapy strategies,Oncolytic Virus plus CAR-T,Lytic effect plus RANTES and IL-15,Combination therapy strategies,T expressing both CAR and heparanase,in vitro–cultured T lymphocytes lack expression of the

9、 enzyme heparanase (HPSE)Overexpression HPSE in T cells promoted tumor T cell infiltration and antitumor activity,一,腫瘤精準(zhǔn)免疫治療,二,CAR-T在實體瘤上的臨床試驗,三,CAR-T在結(jié)直腸癌上的應(yīng)用,四,結(jié)直腸癌CAR-T治療的展望,Contents,實體瘤-結(jié)直腸癌,結(jié)直腸癌是世界上僅次于肺癌和乳腺癌的第三大常見腫

10、瘤，屬于實體瘤，發(fā)病率在發(fā)達國家和地區(qū)處于較高水平。20世紀(jì)70年代以來，隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，我國居民生活習(xí)慣、膳食結(jié)構(gòu)的改變以及人口老齡化進程的加快，我國結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率呈逐步上升趨勢，結(jié)直腸癌已成為危害我國居民健康的主要惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計，2011年我國新發(fā)結(jié)直腸癌病例31萬余人，死亡約15萬人，位列惡性腫瘤發(fā)病及死亡第五位。,CAR-T在結(jié)直腸癌上的應(yīng)用,,,,,CD46是結(jié)直腸癌中差異表達上調(diào)最顯著的外泌型蛋白,CAR

11、-T在結(jié)直腸癌上的應(yīng)用,Hybridoma from ATCC,HC&LC sequencing,FACS analysis,CAR lentiviral vector,Lentivirus generation,CAR-T Construction,CAR-T evaluation,FACS檢測CD46在結(jié)直腸癌細胞RKO表面的表達水平,單鏈抗體LC1、LC2序列測序,,Light chain 1,Light chain 2,

12、Light chain 1,Light chain 2,LOVO,RKO,LOVO,RKO,Percent lysis of LOVO,Percent lysis of RKO,CAR-T體外殺傷結(jié)直腸癌細胞株,免疫抑制性細胞的存在(regulatory T cells, myeloid derived suppressor cells, and M2 tumor-associated macrophages)抑制性細胞因子 (TGF

13、-β, IL-10)腫瘤細胞表面表達的T細胞功能抑制性蛋白分子 (B7-H family members, Fas ligand）引導(dǎo)CAR-T向腫瘤灶歸巢的趨化因子從外周血侵潤腫瘤組織的足夠的CAR-T細胞(blocking endothelin B receptor*, degradation of tumor extracellular matrix )CAR-T細胞回輸前預(yù)處理CAR-T細胞如何在體內(nèi)有效增殖,CAR–

14、T 治療實體瘤需要克服的障礙,結(jié)直腸癌CAR-T治療的展望,在結(jié)直腸癌的治療上，采用轉(zhuǎn)染和表達效率遠高于傳統(tǒng)的慢病毒系統(tǒng)的非病毒系統(tǒng)介導(dǎo)CAR基因進入T細胞， 通過建立獨特CAR-T細胞(帶剎車的CAR-T及雙信號獨立CAR-T系統(tǒng))的同時，創(chuàng)新性將CAR基因修飾與導(dǎo)入其他相關(guān)基因，這一策略可有效促進CAR-T細胞對結(jié)直腸癌實體瘤的滲透作用，從而提高該療法對結(jié)直腸癌的治療作用。,Thank You！,基于CAR-T治療結(jié)直腸癌的臨床探