非發(fā)酵菌及檢驗課件

1、非發(fā)酵革蘭陰性桿菌p335,程曦,復(fù)習(xí),疑為傷寒沙門菌感染，應(yīng)如何進行微生物學(xué)檢驗？Widal test 的定義和結(jié)果解釋。根據(jù)生化反應(yīng)和O抗原，可將志賀菌屬怎樣分群？請解釋什么是“外斐試驗”。,內(nèi)容,概述假單胞菌屬（銅綠假單胞菌和嗜麥芽窄食單胞菌）不動桿菌屬（鮑曼不動桿菌）軍團菌屬,要求,1.掌握非發(fā)酵革蘭陰性菌（非發(fā)酵菌）的概念、特點及非發(fā)酵菌的初步辨認(rèn)和初步分群方法；掌握銅綠假單胞菌的生物學(xué)特性及細(xì)菌學(xué)檢驗方法。2

2、.熟悉嗜麥芽窄食單胞菌和不動桿菌屬的生物學(xué)特性及細(xì)菌學(xué)檢驗方法。3.了解常見非發(fā)酵菌在醫(yī)院感染中的意義，了解軍團菌屬的生物學(xué)特性及檢驗方法。,,定義：非發(fā)酵菌(nonfermenters) 革蘭陰性桿菌， 指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用糖類的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌。,主要特點：,菌屬菌種多，在分類學(xué)上分別屬于不同的科、屬和種 ；大多數(shù)不發(fā)酵糖類或僅以氧化形式利用糖類；大多數(shù)為專性需氧菌；主要存在于外界環(huán)境

3、中，大多數(shù)為條件致病菌，是目前醫(yī)院感染的主要病原菌。,常見菌屬,假單胞菌屬(Pseudomonas)不動桿菌屬(Acinetobacter)窄食單胞菌屬(Stenotrophmonas)伯克菌屬（Burkholderia）產(chǎn)堿桿菌屬(Alcaligenes)無色桿菌屬(Achromobacter)莫拉菌屬(Moraxella),黃桿菌屬(Flavobaterium)艾肯桿菌屬(Eikenella) 土壤桿菌屬(Ag

4、robacterium)黃單胞菌屬(Xanthomonas)叢毛單胞菌屬(Comamonas)金氏桿菌屬(Kingella)食酸菌屬（Acidovorax）,鑒定系統(tǒng),假單胞菌屬 (Pseudomonas),,一、分類 P335,假單胞菌屬包括200多個菌種，尤以銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）多見。惡臭假單胞菌生物變種(P.putica biovars)斯氏假單胞菌（P.stutizeri）曼多辛假單胞菌(P.

5、mendocina)產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)假產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes),二、概述部分（自學(xué)）,生物學(xué)特性致病物質(zhì)和所致疾病微生物學(xué)檢驗藥物敏感試驗,三、銅綠假單胞菌,（一）細(xì)菌特性1. 形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，菌體細(xì)長，且長短不一，有時呈球桿狀或絲狀，單個、成對或短鏈狀排列，無芽胞，有莢膜，菌體一端有單鞭毛。,2. 培養(yǎng)特性專性需氧，最適生長溫度25~30℃，可在42℃生長，

6、4℃不生長。營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上均能生長。產(chǎn)生多種色素，常見有綠膿素和熒光素。在液體培養(yǎng)基中呈表面菌膜生長，菌液上層為藍(lán)綠色。,,普通瓊脂平板：菌落圓形、大小不一、邊緣不整齊、扁平稍隆起、濕潤光滑、常成融合狀態(tài)。血瓊脂平板：菌落大而扁平、有金屬光澤、有生姜味，菌落周圍有透明溶血環(huán)。麥康凱瓊脂平板：菌落微小、無色透明，中心常呈綠色。,3. 生化反應(yīng),氧化酶＋ O/F試驗為氧化型（O）精氨酸雙水解酶試驗＋硝酸鹽還原試驗＋

7、。,4.抗原構(gòu)造 P338,O抗原： 2種，成分分別是外膜蛋白（屬特異性）和脂多糖（型特異性）。H抗原黏液抗原（S抗原）菌毛抗原,1. 致病因子 （1）侵襲力： 粘附素、莢膜多糖 （2）毒素： 外毒素、內(nèi)毒素 （3）綠膿素 （4）侵襲性酶類：彈性蛋白酶、磷脂酶C,（二）臨床意義 P338,2. 所致疾病,醫(yī)院感染的主要病原菌。燒傷創(chuàng)面感染、皮膚感染、肺部感染、泌尿道感染、中耳炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血

8、癥、急性角膜穿孔等。也可引起小兒類似沙門菌和霍亂樣的嚴(yán)重腹瀉。,多重耐藥，能天然抗多種藥物耐藥機制：酶、菌體成分、外排泵、外膜滲透性改變、生物膜等,（三）微生物學(xué)檢驗,,,,三、其它假單胞菌,,,不動桿菌屬(Acinetobacter) P341,歸屬奈瑟氏菌科。根據(jù)DNA-DNA雜交和營養(yǎng)特征分為32個基因種，但只有10個基因種16種不動桿菌有菌名，臨床常見：基因種1：醋酸鈣不動桿菌(A.calcoaceticus)基因種2

9、：鮑曼不動桿菌(A.baumannii) 基因種4：溶血不動桿菌(A.haemolyticus)基因種5：瓊氏不動桿菌(A.junii)基因種7：約氏不動桿菌(A.johnsonii)基因種8：洛菲不動桿菌(A.1woffi),一、分類,1. 形態(tài)染色 革蘭陰性桿菌，多為球桿狀，單個存在或成雙排列，無芽胞，無鞭毛，粘液型菌株有莢膜。,二、細(xì)菌特性,2. 培養(yǎng)特性專性需氧，營養(yǎng)要求不高，最適生長溫度為37℃，但有些菌株可

10、在42℃生長。 血瓊脂平板：菌落圓形、光滑、邊緣整齊、灰白色，多數(shù)菌株不溶血，有些β溶血。麥康凱瓊脂平板：菌落呈粉紅色，但在SS瓊脂培養(yǎng)基上只有部分菌株生長。,3. 生化反應(yīng),氧化酶－ O/F試驗為氧化型（O）硝酸鹽還原試驗－,三、臨床意義,條件致病菌，醫(yī)院感染的常見病原菌。 可從各種臨床標(biāo)本如血液、尿液、膿液、呼吸道分泌物及腦脊液等中分離出來。,鮑曼不動桿菌 P342,對全部氨基青霉素，第一、二代頭孢菌素，第一代喹諾酮類抗生

11、素天然耐藥。,四、微生物學(xué)檢驗 P172,窄食（寡養(yǎng)）單胞菌屬 P343(Stenotrophmonas）,寡養(yǎng)單胞菌目前5個種，最重要的是嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌（S.maltophilia） 。其分類經(jīng)過了兩次改名：假單胞菌屬（嗜麥芽假單胞菌）→黃單胞菌屬（嗜麥芽黃單胞菌）→窄食單胞菌屬（嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌）。,,一、分類,1. 形態(tài)染色 革蘭陰性桿菌，有一端或兩端叢鞭毛，多數(shù)在三根以上， 無芽胞，無莢

12、膜，可產(chǎn)生菌毛。,二、細(xì)菌特性,專性需氧，營養(yǎng)要求不高，最適生長溫度35℃，4℃不生長。血瓊脂平板：菌落血平板上呈淡紫綠色，有氨味；麥康凱瓊脂平板：菌落呈淡黃色。,2. 培養(yǎng)特性,3. 生化反應(yīng),氧化酶試驗－ O/F試驗：麥芽糖＋，但葡萄糖氧化分解可陰性 硝酸鹽還原試驗＋ 賴氨酸脫羧酶＋ DNA酶＋,廣泛分布于自然界中，亦可寄居于人的呼吸道和腸道中，為條件致病菌。臨床感染標(biāo)本中，除銅綠假單胞菌之外最常見的非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

13、。,三、臨床意義,耐藥性強,對亞胺培南天然耐藥,軍團菌屬 P375（Legionella）,一、分類,軍團菌科，軍團菌屬。已命名的菌種共有45種，64個血清型。現(xiàn)已命名了39種軍團桿菌，至少19種是人類肺炎的病原。其中最常見病原體為嗜肺軍團菌(占病例的85%~90%)。,二、細(xì)菌特性,1. 形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，有端鞭毛或側(cè)鞭毛，動力陽性。無芽胞，無莢膜,免疫熒光染色,革蘭染色,菌落掃描電鏡圖,2.培養(yǎng)特性需氧菌，首次分離需5%C

14、O2，營養(yǎng)要求嚴(yán)格，常用培養(yǎng)基為緩沖活性炭-酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE）。生長緩慢，在BCYE上3～5d形成直徑1～2mm，圓形凸起、灰白色有光澤的菌落，初期外觀呈刻花玻璃樣花紋，繼續(xù)培養(yǎng)消失。,軍團菌屬,3.生化反應(yīng)觸酶陽性部分菌株氧化酶陽性液化明膠不分解糖類不還原硝酸鹽脲酶陰性嗜肺軍團菌能水解馬尿酸鹽多數(shù)菌株β-內(nèi)酰胺酶陽性,4.抵抗力,對熱和常用化學(xué)消毒劑敏感。蒸餾水中可存活100天以上，下水道污水中可存活1年。

15、,三、臨床意義,廣泛存在于水和土壤中，在人工管道的水源中常見，如醫(yī)院空調(diào)器的冷卻水、淋浴頭和輔助呼吸機等產(chǎn)生的氣溶膠顆粒中常有此菌，是醫(yī)院感染的主要病原菌之一。臨床表現(xiàn)多種多樣，主要有流感樣型（輕癥型）、肺炎型（重癥型）和肺外感染三種臨床類型。最常見的是肺炎型。,軍團菌屬,致病性與免疫性,嗜肺軍團菌病,軍團菌屬,微生物學(xué)檢查與防治原則：,根據(jù)病情采集痰液、氣管分泌物、血液及病理組織標(biāo)本等。用熒光抗體染色鏡檢或培養(yǎng)后做生化鑒定（p247

16、）。,定時清潔空調(diào)，加強監(jiān)測消毒,用紅霉素、慶大霉素等治療,軍團菌為細(xì)菌性肺炎的前3位病原之一，早已存在于我們生活中，并對人群構(gòu)成了潛在威脅,軍團菌病是1976年在美國費城首次被發(fā)現(xiàn)的急性呼吸道傳染病，當(dāng)時在退伍軍人大會上暴發(fā)流行，導(dǎo)致221人發(fā)病，34人死亡。此后，世界上許多國家均有軍團菌病的發(fā)生，每次暴發(fā)都引起世人的廣泛關(guān)注。世界衛(wèi)生組織由此把本病列入疾病傳報范圍。我國自1982年在南京首次證實軍團菌病例以來，全國已有多起軍團菌病的

17、散發(fā)與暴發(fā)流行的報道。,水是軍團菌的自然棲息地,目前，隨著百姓生活水平的逐步提高，城市中高層建筑的日益增多，熱水管、噴水池、空調(diào)、淋浴及加濕器等設(shè)備的普及，這些都有可能增加軍團菌病的危險性。因而，軍團菌病在國際上已被視為“現(xiàn)代生活文明病”。國際化標(biāo)準(zhǔn)組織（ISO）早已把水源中軍團菌的檢測作為水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌檢驗的一部分，世界上許多國家的賓館、飯店都必須有“軍團菌檢驗合格”的證明。我國也于2006年3月頒布了《公共場所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)