病理技術(shù)概述

1、閩東醫(yī)院 病理科 張 馳 2015.12 .04,病理檢驗(yàn)技術(shù),病理技術(shù),病理技術(shù)是病理學(xué)的一個(gè)重要分支，是病理學(xué)研究中的方法學(xué)，是病理診斷的基礎(chǔ)。常規(guī)病理是病理技術(shù)最重要的部分，任何病理診斷離不開它。,常規(guī)病理,1、收標(biāo)本 8、切片2、取材

2、 9、染色3、固定 10、封固4、脫水 11、對(duì)片5、透明 12、交診6、浸蠟 13、診斷7、包埋 14、發(fā)報(bào)告,固 定,通過添加固定劑讓組織中的所有細(xì)胞及細(xì)胞外成分迅速死亡，以免細(xì)胞中溶酶體成

3、分的破壞作用，保持離體組織細(xì)胞與活組織時(shí)的形態(tài)相似，并防止細(xì)菌繁殖所致的腐敗，以保存蛋白質(zhì)與核酸的基本結(jié)構(gòu)。病理標(biāo)本的制作和組織切片都必須先進(jìn)行固定。,常用固定液的種類,4%甲醛 95%乙醇 乙醇-甲醛 AF液 AAF液中性緩沖甲醛液,脫 水,用某些溶劑逐漸將組織內(nèi)吸收的水分置換出來，以利于透明劑和石蠟的滲入，這一過程叫脫水。,常用脫水劑的種類,酒精丙酮正丁醇叔丁醇異丙醇,酒精：為最常用的脫水劑。高濃度的酒精對(duì)組織

4、有強(qiáng)烈的收縮和脆化的缺點(diǎn)，因此組織在水洗后不能立即投入高濃度的酒精中。應(yīng)在不同濃度的酒精里逐漸脫水，一般在可從70%酒精開始80%、95%、100%酒精，逐步脫水。,組織透明當(dāng)組織全部為透明劑占有時(shí)，光線可以透過，組織可呈現(xiàn)不同程度的透明狀態(tài)，這中現(xiàn)象稱為組織透明。,目的：使石蠟?zāi)芙虢M織塊，便于包埋。多數(shù)脫水劑不能與石蠟相混合，必須通過透明劑的作用長能浸蠟包埋。,透明劑的種類二甲苯苯和甲苯氯仿苯甲酸甲酯,香柏油冬青油

5、松油醇,特性,二甲苯: 為最常用的常規(guī)透明劑，為無色透明液體，易溶于無水酒精，不溶于水，有毒，易揮發(fā)，長期接觸對(duì)呼吸道粘膜有刺激作用。透明力強(qiáng)，易使組織收縮、變脆，所以組織塊在二甲苯中的時(shí)間不宜過長。小塊的組織以30分鐘為宜,較大的組織快可適當(dāng)延長。,注意事項(xiàng),透明的關(guān)鍵是時(shí)間,透明時(shí)間不夠,石蠟不能完全進(jìn)入組織,影響到包埋 切片 .但是如果透明過度,組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)量.特別是肝脾等組織. 透明是制片過程中很重要的環(huán)節(jié)，

6、若干組織不能透明，其原因一般與組織脫水未盡有關(guān)。,浸 蠟 組織透明后，在融化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱浸蠟。,目的 組織經(jīng)過透明后要浸入石蠟內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當(dāng)?shù)挠捕?以利切片。,浸蠟的方法,一般浸蠟須經(jīng)過2到3次, 目前常用的脫水機(jī)上是2-3個(gè)蠟缸。浸蠟時(shí)間約需3-4小時(shí)。浸蠟時(shí)間根據(jù)組織的種類和大小及溫度的高低來具體制定。時(shí)間不宜過長，否則易造成組織變硬、脆，切

7、片如豆渣樣；時(shí)間不足，則不易切成完好的切片。用于浸蠟的石蠟的溶點(diǎn)為56-58度。,組織包埋,組織塊經(jīng)過透明、浸蠟，用包埋劑包起來的過程稱包埋。 目的： 包埋后可使組織達(dá)到一定的硬度和韌度，有利于切成薄片。,包埋面的選擇一般情況下以組織塊的最大面為包埋面。管囊狀結(jié)構(gòu)的組織以橫斷面為包埋面。皮膚組織或有被覆上皮組織，包埋面應(yīng)垂直于上皮面。帶有病變特點(diǎn)的組織，或?qū)Π衩嬗刑貏e要求的組織應(yīng)按預(yù)先標(biāo)記的包埋面包埋。,注意事

8、項(xiàng),包埋用石蠟有雜質(zhì)應(yīng)過濾后再使用。用酒精燈或包埋加熱器，防止熔蠟?zāi)獭A持組織塊的鑷子，不能加熱過度，以防燙傷組織。包埋蠟的溫度與組織塊的溫度應(yīng)接近，否則易引起組織塊與周圍蠟塊的脫裂。號(hào)碼、組織應(yīng)對(duì)應(yīng)，不能遺失。,切片質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn),組織切面完整，內(nèi)鏡咬檢、穿刺標(biāo)本切面數(shù)6個(gè)切片薄3-5微米，厚薄均勻切片無刀痕、裂隙、顫痕切片平坦，無皺褶、折疊切片無污染 、無氣泡、蓋玻片周圍無膠液外溢,細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)染色對(duì)比清晰切片

9、無松散，裱貼位置適當(dāng)切片整潔，標(biāo)簽端正粘牢，號(hào)碼清晰,HE染色,HE染色法，即是蘇木精-伊紅染色法。石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一 。蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核糖體著紫藍(lán)色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)分別稱為嗜堿性和嗜酸性；若于兩種染料的親和力都不強(qiáng)，則稱中性。一般的組織變化和組織產(chǎn)物都可以通過這一染色法顯示出來。是形態(tài)學(xué)最常用的染色方法,(一)脫蠟

10、:1.從溫箱中取出烤干的切片,立即投入二甲苯中脫蠟5～15min(可在三瓶中進(jìn)行),脫蠟時(shí)間長短取決于蠟是不徹底溶解。氣溫低可延長時(shí)間,氣溫高可適當(dāng)縮短時(shí)間或在溫箱中加速脫蠟。2.移入無水酒精(100%)(二瓶)中,約2min。3.移入95%酒精中(二瓶),約2min。4.移入80%酒精中(一瓶),約2min。5.移入水中,洗去酒精,約2～3min。6.移入蒸餾水中,約2min。,(二)染色: 1.移入蘇木素中,浸染2

11、～15min,一般以稍深染為宜。2.移入水中,洗去蘇木素，洗至清水無色。3.移入分化液(1%鹽酸酒精)中,分化幾秒至30秒鐘, 使切片褪色至淡蘭紅色即可。分化的作用,可使細(xì)胞漿蘭色脫去,而細(xì)胞核更加清晰,艷麗,分化不足時(shí),胞漿帶蘭,胞核過染,分化過度時(shí),胞核太淡,難以辯認(rèn),可再退回蘇木素染液, 延長一定時(shí)間。,4.移入流水中,洗滌30～60min,使組織呈鮮蘭色或天蘭色(蘭化)。5.移入伊紅液中,浸染2～5min,如著染緩慢 ,

12、可在伊紅液中加入冰醋酸 (100ml伊紅液加1～2滴冰醋酸)以助染。6.移入水中,洗去伊紅浮液,并用紗布擦凈玻片上的多余染料。,(三)脫水:1.去玻片上的水分后多入80%酒精中脫水,約1～2min, 如在酒精中褪色很快時(shí),可迅速移入95%酒精或返回伊紅液中復(fù)染。2.移入95%酒精中(二瓶)脫水,約2～4min。3.移入無水酒精(100%酒精)徹底脫水,約4～8min。,(四)透明1.移入二甲苯Ⅰ中透明3～5min。2.移入二