尿液葡萄糖酮體及其他化學(xué)檢查

1、一、尿液葡萄糖檢查,生理情況下，原尿中的葡萄糖可被腎小管和集合管全部被重吸收進(jìn)入血液。所以正常人尿液中幾乎不含或僅含微量葡萄糖，一般尿糖定性試驗(yàn)為陰性。當(dāng)機(jī)體發(fā)生病變，尿液中出現(xiàn)葡萄糖，葡萄糖定性試驗(yàn)為陽性的尿液稱為糖尿（glucosuria）。,糖尿定義,一、尿液葡萄糖檢查,糖尿形成的原因,血糖濃度,腎血流量,腎糖閾,一、尿液葡萄糖檢查,尿液葡萄糖檢查方法,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法,班氏還原法,薄層層析法,鄰甲苯胺法,葡萄糖+H2O

2、+O2 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸內(nèi)酯+H2O2 H2O2 +色原劑 過氧化物酶 有色物質(zhì),,,葡萄糖氧化酶—過氧化物酶法,一、尿液葡萄糖檢查,葡萄糖氧化酶—過氧化物酶法,一、尿液葡萄糖檢查,檢測特異性強(qiáng)、靈敏度高、簡便快速,氧化還原反應(yīng)，易受尿液中的氧化劑還原劑的影響,班氏還原法,一、尿液葡萄糖檢查,在高熱和強(qiáng)堿溶液中，葡萄糖或者其他還原性糖，能將溶液中藍(lán)色的硫酸銅還原為氫氧化亞銅沉淀，進(jìn)而形成紅色的氧化亞銅沉淀。

3、,班氏還原法,一、尿液葡萄糖檢查,許多單糖和非糖還原物質(zhì)都能反應(yīng)，測定的是尿中總還原物。,氧化還原反應(yīng)，易受尿液中的氧化劑還原劑的影響。,化學(xué)物質(zhì)對(duì)尿糖測定的影響,化學(xué)物質(zhì)對(duì)尿糖測定的影響,一、尿液葡萄糖檢查,檢測結(jié)果分析,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法陰性，班氏還原法陽性。,試紙質(zhì)量問題； 尿液中含有較高濃度的還原性物質(zhì)； 存在少量葡萄糖伴有高濃度的還原物質(zhì)。,一、尿液葡萄糖檢查,檢測結(jié)果分析,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法陽性，班氏還原

4、法陰性。,尿液標(biāo)本被過氧化物或者次氯酸鹽污染。,一、尿液葡萄糖檢查,鄰甲苯胺法,葡萄糖與鄰甲苯胺在強(qiáng)酸溶液中加熱，葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合形成葡萄糖基胺，后者脫水生成席夫堿，再經(jīng)結(jié)構(gòu)重排，生成有色化合物，在630nm有吸收峰。,與尿液中的所有糖類發(fā)生反應(yīng) 。,一、尿液葡萄糖檢查,薄層層析法,在層析法中有固定相和流動(dòng)相，兩相間可做相對(duì)流動(dòng)。當(dāng)樣品中各種糖隨流動(dòng)相通過固定相時(shí)，即反復(fù)發(fā)生吸附、脫附、解析或其他親和作用，由于各種糖在上述性能

5、上的差異而產(chǎn)生移動(dòng)速度的差異，而相互分離。,六種糖的Rf近似平均值,一、尿液葡萄糖檢查,其他糖檢驗(yàn)方法,果糖與溶于強(qiáng)酸的間苯二酚加熱后顯紅色反應(yīng)。,半乳糖與硝酸共熱，可被氧化為白色的粘酸結(jié)晶。,戊糖與鹽酸共沸后生成糠醛，再與二羥基甲苯作用形成綠色化合物。,一、尿液葡萄糖檢查,臨床意義,血糖增高性糖尿,血糖正常性糖尿,暫時(shí)性糖尿,其他糖尿,二、尿液酮體檢查,酮體是脂肪酸在肝內(nèi)氧化不完全而形成的一類中間產(chǎn)物的統(tǒng)稱，包含乙酰乙酸、?-羥丁酸、

6、丙酮三種成分。,生理意義：肝臟向肝外(肌肉/大腦)組織輸出脂肪酸能源的有效形式。,病理意義：在糖尿病或者嚴(yán)重饑餓時(shí)，肝生酮大于肝外利用，發(fā)生酮癥酸中毒。,二、尿液酮體檢查,檢測方法,亞硝基鐵氰化鈉法：乙酰乙酸和丙酮與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)生成紫色化合物。,Gerhardt法：高鐵離子與乙酰乙酸的烯醇式基團(tuán)發(fā)生螯合，形成酒紅色的乙酰乙酸鐵復(fù)合物。,,,檢測方法,二、尿液酮體檢查,二、尿液酮體檢查,臨床意義,不能有效利用碳水化合物,碳水化合物攝

7、入不足,碳水化合物丟失,其他,三、尿液人絨毛膜促性腺激素檢查,人絨毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotrophin, hCG）是胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生的一種具有促進(jìn)性腺發(fā)育的糖蛋白類激素。,hCG分子量約為4.7萬，由α、β兩個(gè)肽鏈組成。單個(gè)亞基（肽鏈）不具有生物學(xué)活性，當(dāng)其連接成完整的化合物時(shí)才具有活性。,三、尿液人絨毛膜促性腺激素檢查,hCG α亞基的氨基酸數(shù)量及其排列順序與卵泡刺激素(FSH)、黃體生成

8、素(LH)和促甲狀腺激素(TSH)的亞基幾乎相同。,臨床上均采用高效的抗hCGβ亞基單克隆抗體進(jìn)行特異性hCG檢查。,受孕后血清HCG變化曲線,,生理作用,三、尿液人絨毛膜促性腺激素檢查,有利于受精卵的生長；,促進(jìn)卵泡成熟、促甲狀腺及睪丸間質(zhì)細(xì)胞的活性；,與黃體生成激素相似的生物活性；,抑制淋巴細(xì)胞免疫性，保護(hù)滋養(yǎng)層不受母體的免疫攻擊。,檢測方法,三、尿液人絨毛膜促性腺激素檢查,ELISA,膠體金實(shí)驗(yàn),電化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn),放射免疫分析,膠乳

9、凝集抑制實(shí)驗(yàn),血凝抑制實(shí)驗(yàn),檢孕卡實(shí)驗(yàn),……,尿液hCG各種檢測方法比較,臨床意義,三、尿液人絨毛膜促性腺激素檢查,早期妊娠診斷,異位妊娠診斷,流產(chǎn)診斷和監(jiān)測,妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病診斷,腫瘤標(biāo)記物,四、尿液膽色素檢查,尿中膽色素包括膽紅素（bilirubin）、尿膽原(urobilinogen)及尿膽素(urobilin)，俗稱尿三膽。由于送檢的多為新鮮尿，尿膽原尚未氧化成尿膽素，故多查前兩者，俗稱尿二膽。,四、尿液膽色素檢查,膽紅素是紅細(xì)

10、胞破壞后的代謝產(chǎn)生?？煞譃槲唇?jīng)肝處理的未結(jié)合的膽紅素和經(jīng)肝與葡萄糖醛酸結(jié)合形成的結(jié)合膽紅素。未結(jié)合膽紅素不溶于水，在血中與蛋白質(zhì)結(jié)合不能通過腎小球?yàn)V膜。結(jié)合膽紅素分子量小，溶解度高，可通過腎小球?yàn)V膜，由尿中排出。,膽紅素檢驗(yàn)方法,重氮法：在強(qiáng)酸介質(zhì)中，結(jié)合膽紅素與重氮鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)呈紅色。,Harrison法：膽紅素被硫酸鋇吸附而濃縮，與氯化鐵反應(yīng)，被氧化為膽青素、膽綠素和膽黃素復(fù)合物。,Smith碘環(huán)法：膽紅素被碘氧化成膽綠素，在尿液

11、與試劑接觸界面呈綠色環(huán)。,四、尿液膽色素檢查,尿膽原檢驗(yàn)方法,四、尿液膽色素檢查,Ehrlich法：尿膽原與ρ-甲氨基苯重氮化硼酸鹽發(fā)生偶聯(lián)反應(yīng)。,改良Ehrlich法：在酸性溶液中，尿膽原與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)成櫻紅色。,Schleisinger法：在無膽紅素尿液中，加入碘液，氧化尿膽原成尿膽素，與鋅離子作用，形成帶綠色熒光復(fù)合物。,五、尿液亞硝酸鹽的檢測,尿路感染時(shí)，一些感染病原菌可將尿液中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽。,體液中有許多細(xì)胞

12、能利用精氨酸在NO合成酶的作用下生成NO，在體內(nèi)有氧的條件下，極易被氧化成為硝酸鹽和亞硝酸鹽，經(jīng)過血液從尿中排出。,五、尿液亞硝酸鹽的檢測,檢測原理：亞硝酸鹽還原法；,臨床意義：作為尿路感染的快速篩檢；,尿液NIT陽性的三個(gè)條件：尿中致病菌是否存在亞硝酸鹽還原酶、尿在膀胱內(nèi)是否停留足夠細(xì)菌作用的時(shí)間、尿液中是否有硝酸鹽的存在。,六、白細(xì)胞檢查,,檢測原理：酯酶法，粒細(xì)胞胞質(zhì)含有特異性酯酶，使試帶吲哚酚酯產(chǎn)生吲哚酚，后者與重氮鹽形成紫紅色