生物傳感技術(shù)檢測(cè)堆肥體系中木質(zhì)纖維素功能編碼基因的研究.pdf

1、堆肥化技術(shù)在城市生活垃圾處理中已經(jīng)得到越來(lái)越廣泛地應(yīng)用。堆肥系統(tǒng)中，微生物降解木質(zhì)素的代謝過(guò)程由一系列酶共同完成，而錳過(guò)氧化物酶(MnP)和纖維二糖水解酶(CBH)在其中起了關(guān)鍵性作用。用DNA及酶生物傳感器檢測(cè)其編碼基因，能更好地了解這兩種酶的協(xié)同作用。本研究擬制備固定化核酸探針傳感器用于檢測(cè)黃孢原毛平革菌錳過(guò)氧化物酶和里氏木酶纖維二糖水解酶的編碼基因，探討DNA傳感器用于同時(shí)檢測(cè)堆肥高效降解菌產(chǎn)酶基因的可行性。同時(shí)運(yùn)用漆酶?jìng)鞲衅骷夹g(shù)

2、對(duì)環(huán)境中污染物對(duì)苯二酚進(jìn)行了檢測(cè)。
　　首先研究了DNA生物傳感器檢測(cè)黃孢原毛平革菌錳過(guò)氧化物酶編碼基因。利用液態(tài)搖床和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)了黃孢原毛平革菌，對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，同時(shí)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得所需要的目標(biāo)基因段列。利用自組裝單分子膜技術(shù)，將疏基修飾的探針固定在金殼磁性納米顆粒表面。采用交流阻抗法和循環(huán)伏安法，表征基修飾的ssDNA在碳糊電極上的固定及雜交過(guò)程。再用計(jì)時(shí)電流法掃描，得出電化學(xué)信號(hào)與目標(biāo)鏈濃度間的線性關(guān)系。研究

3、了目標(biāo)序列的線性檢測(cè)范圍、特異性以及各種影響因素。該傳感器的線性范圍為1×109～1×10-15M，檢測(cè)限為1.0×10-17M。
　　接著，DNA生物傳感器單獨(dú)檢測(cè)里氏木酶纖維二糖水解酶編碼基因。利用液態(tài)發(fā)酵法培養(yǎng)了里氏木酶，對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，同時(shí)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得所需要的目標(biāo)基因段列。利用自組裝單分子膜技術(shù)，將氨基修飾的探針固定在金殼磁性納米顆粒表面。采用交流阻抗法和循環(huán)伏安法，表征基修飾的ssDNA在碳糊電極上的固

4、定及雜交過(guò)程。再用計(jì)時(shí)電流法掃描，得出電化學(xué)信號(hào)與目標(biāo)鏈濃度間的線性關(guān)系。研究了目標(biāo)序列的線性檢測(cè)范圍、特異性以及各種影響因素。該傳感器的線性范圍為1×10-9～1×10-13M，檢測(cè)限為1.2×10-14M。同一目標(biāo)鏈濃度均平行測(cè)定三次，其RSD為2.28％。該傳感器特異性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性和穩(wěn)定性也較好。
　　最后，通過(guò)構(gòu)建基于納米金/碳納米管修飾的漆酶?jìng)鞲衅?，?shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境中對(duì)苯二酚含量的檢測(cè)。通過(guò)化學(xué)及物理方法制備了羧基化可