生物傳感與實時熒光定量技術(shù)檢測堆肥微生物酶編碼基因的研究.pdf

1、隨著社會發(fā)展，農(nóng)業(yè)廢物的無害化、減量化和資源化處理，越來越受到人們的重視。通過合理的堆肥可以實現(xiàn)這一目標。木質(zhì)素、纖維素是農(nóng)業(yè)廢物堆肥化過程中的主要限速有機物，其降解被認為是快速堆肥的關(guān)鍵。黃孢原毛平革菌在降解木質(zhì)素方面有著重要意義。
　　 本研究以黃孢原毛平革菌的基因組DNA為模板，根據(jù)木素過氧化物酶的基因序列設(shè)計引物，比較了此菌基因組DNA的提取方法，并通過聚合酶鏈式反應(yīng)和酶切反應(yīng)得到339bp及265bp的待測特異性DNA

2、片段，制作DNA傳感器以檢測所得DNA片段。利用自組裝單分子膜法，將巰基修飾的探針固定在金電極表面，并研究了夾心式和競爭式兩種雜交機制，采用辣根過氧化物酶作為標記物。在電化學分析中采用了循環(huán)伏安法、交流阻抗法、方波伏安法、微分脈沖伏安法等一系列電化學分析方法。研究表明：SDS-CTAB法提取黃孢原毛平革菌基因組DNA效果較好。電化學分析中，電流響應(yīng)值與DNA檢測濃度成線性關(guān)系。夾心式雜交機制中，線性回歸方程為y=8×1010x+0.28

3、0，線性相關(guān)系數(shù)為0.981，回收率為97.93％～113.53％。競爭式雜交機制中，作出生物傳感器檢測黃孢原毛平革菌DNA低濃度段曲線，回歸方程為y=-4×1010x+0.366，線性相關(guān)系數(shù)為0.993。其中y為電流躍遷值(μA)；x為DNA檢測鏈濃度(mol/mL)。此外，對傳感器進行再生，實驗結(jié)果表明再生性能較好。纖維素的降解是堆肥中很重要的一個過程，產(chǎn)纖維素酶能力最強的常用的微生物是木霉屬的里氏木霉。本研究采用DNA生物傳感技