環(huán)丙沙星對嗜熱鏈球菌grx02生理功能和蛋白表達(dá)的影響研究.pdf

1、由于動(dòng)物性食品原料（如乳、肉等）中抗生素殘留現(xiàn)象較普遍。所以當(dāng)含有低濃度抗生素的動(dòng)物性原料用于生產(chǎn)發(fā)酵食品時(shí)，發(fā)酵菌株就會(huì)受到低濃度抗生素的應(yīng)激作用。同樣，人們在生病使用抗生素治療過程中，體內(nèi)的益生菌以及外源補(bǔ)充的益生菌也會(huì)受到抗生素的脅迫作用。在低濃度的抗生素作用下，益生菌會(huì)產(chǎn)生一定的生理學(xué)效應(yīng)以防止有害物質(zhì)侵入細(xì)胞內(nèi)，其代謝途徑也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化。此時(shí)是否會(huì)有有害的代謝產(chǎn)物產(chǎn)生，會(huì)對發(fā)酵產(chǎn)品的品質(zhì)產(chǎn)生怎樣的影響，目前還未見報(bào)道。因此

2、，本文研究了微量環(huán)丙沙星對Streptococcusthermophilusgrx02生理功能和蛋白組表達(dá)的影響，從而為進(jìn)一步研究乳酸菌對藥物應(yīng)激的機(jī)制提供參考，為人類科學(xué)合理食用益生菌產(chǎn)品提供理論依據(jù)。
　　 (1)本研究利用兩倍稀釋法測定了環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的最低抑菌濃度(MIC)為3.89μg/mL，說明S.thermophilusgrx02對環(huán)丙沙星中度敏感。
　　 (2)通過對不同

3、濃度的微量環(huán)丙沙星應(yīng)激處理后的菌體進(jìn)行了微觀形態(tài)學(xué)觀察。發(fā)現(xiàn)在光學(xué)顯微鏡下對照組和不同亞抑菌濃度環(huán)丙沙星作用下S.thermophilusgrx02的菌落形態(tài)均呈現(xiàn)長鏈狀，沒有發(fā)生明顯的變化。說明在光學(xué)顯微鏡下觀察到微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的整體菌落形態(tài)并無影響。在透射電鏡下，對照組的細(xì)菌呈橢圓形，而環(huán)丙沙星應(yīng)激下的菌體長度明顯變短，藥物濃度越高半橢圓形越明顯。對照組的莢膜厚而松散，隨著藥物濃度的升高，S.t

4、hermophilusgrx02莢膜明顯變薄且致密，將細(xì)胞緊緊包裹住。說明在透射電子顯微鏡下觀察到微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的細(xì)胞形態(tài)和莢膜影響較大。
　　 (3)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應(yīng)激處理后的菌體進(jìn)行了生長與發(fā)酵特性比較。發(fā)現(xiàn)對照組、1/10MIC和1/50MIC在6h時(shí)進(jìn)入對數(shù)生長期，而1/2MIC的在8h時(shí)后才進(jìn)入對數(shù)生長期。細(xì)菌生長速率和產(chǎn)酸速率分別降低了24.89％和53.29％。說明

5、微量環(huán)丙沙星對S.thermophilusgrx02的生長和產(chǎn)酸產(chǎn)生了顯著影響。
　　 (4)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應(yīng)激處理后的發(fā)酵乳和對照組比較，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵乳的pH值、滴定酸度和硬度的變化不顯著，說明抗生素殘留對發(fā)酵乳的pH值、滴定酸度和硬度無顯著影響。藥物組發(fā)酵乳的黏度在(5037.3-5302.0)Pa·s與對照組(6032Pa·s)相比顯著降低。藥物組脫水收縮性為39.40％-44.33％，與對照組(22.46％)相比

6、顯著升高。說明抗生素殘留能使發(fā)酵乳的穩(wěn)定性降低。
　　 (5)通過對不同濃度微量環(huán)丙沙星應(yīng)激處理后的發(fā)酵乳和對照組比較，發(fā)現(xiàn)1/10MIC組發(fā)酵乳有少量乳清析出，稠厚感不強(qiáng)，其組織狀態(tài)得分顯著低于其他組，且感官鑒定總分84.1±1.5顯著低于其他組;1/30MIC組的感官鑒定總分為88.5±1.7顯著高于1/10MIC組但顯著低于對照組（90.1±1.6）和1/50MIC組（90.2±1.2）;1/50MIC組的感官鑒定總分與對

7、照組無顯著性差異。說明環(huán)丙沙星殘留量較高時(shí)，會(huì)對S.thermophilusgrx02發(fā)酵乳的感官質(zhì)量產(chǎn)生顯著影響，而當(dāng)濃度較低時(shí)，對S.thermophilusgrx02發(fā)酵乳的感官質(zhì)量影響不顯著。
　　 (6)通過利用GC-MS對不同濃度微量環(huán)丙沙星應(yīng)激下的發(fā)酵乳中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)進(jìn)行測定。發(fā)現(xiàn)發(fā)酵乳中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯降低，尤其是雙乙酰類風(fēng)味物質(zhì)的總質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯降低，且主要風(fēng)味物質(zhì)2，3-丁二酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)也明顯降

8、低。
　　 (7)通過利用液氮研磨—TCA/丙酮—尿素/硫脲/TBP裂解提取法制備S.thermophilusgrx02菌體蛋白質(zhì)，利用此法制備的S.thermophilusgrx02蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行雙向電泳，可獲得分離效果良好、重復(fù)性好和分辨率高的S.thermophilusgrx02雙向電泳圖譜，共檢測到298±7個(gè)蛋白點(diǎn)，適合于后續(xù)的質(zhì)譜及差異蛋白質(zhì)質(zhì)組的分析。
　　 (8)通過使用優(yōu)化的雙向電泳體系對對照組和1/2