內(nèi)源乳化凝膠法制備嗜熱鏈球菌微膠囊及其性質(zhì)的研究.pdf

1、腸道益生菌群是構(gòu)筑腸道粘膜屏障的主要組成部分，為機(jī)體抵御病原菌的侵襲提供強(qiáng)大的生物屏障，在維持腸道功能及機(jī)體的健康方面發(fā)揮著重要的生理作用。通過微膠囊化能將益生菌菌體與外界環(huán)境分開，避免其受損害，利于儲存和運(yùn)輸；采用腸溶性壁材，能防止胃液破壞，使其到達(dá)腸道遇腸液后溶解，從而使盡可能多的菌體到達(dá)腸道并定植于腸粘膜上，真正起到保健和治療的作用。 本文以嗜熱鏈球菌為模式菌株，以內(nèi)源乳化凝膠法對其進(jìn)行包埋，得到微米級殼聚糖/海藻酸微膠囊

2、，并研究了其在模擬胃腸道環(huán)境下的釋放性和耐受性，從而可以得到以下結(jié)論： (1)內(nèi)源乳化凝膠法制備微膠囊的最佳條件：海藻酸鈉濃度為15g·L-1，乳化劑Span80用量為O.7％，水與油的體積比為1:8，CaCO3與NaALG質(zhì)量比為1:5。在此條件下得到目的粒徑40～60μm范圍內(nèi)微膠囊的百分含量為80.2％。通過對酪蛋白的包埋及其釋放特性研究，得出最佳的殼聚糖覆膜條件為殼聚糖濃度4mg/mL，殼聚糖溶液pH=6，成膜反應(yīng)時間1

3、0min。 (2)優(yōu)化嗜熱鏈球菌(Streptoccus thermophilus ST1)高密度培養(yǎng)基，最適碳源為蔗糖，最佳濃度為0.5％；最適氮源為大豆蛋白胨，最佳濃度為2.0％；適量的酵母膏和吐溫80能促進(jìn)嗜熱鏈球菌的增殖，最適添加濃度為0.5％和0.1％，過量反而會抑制乳酸菌的增殖；檸檬酸二銨、乙酸鈉和硫酸鎂等無機(jī)鹽也能促進(jìn)乳酸菌的增殖，最適添加濃度為0.2％，0.3％和0.05％，過量也會抑制乳酸菌的增殖。通過Plac

4、kett-Burman試驗得出蔗糖、大豆蛋白胨和酵母膏對菌體生長影響最為顯著。通過響應(yīng)面優(yōu)化試驗得出最適添加濃度為0.56％，0.54％和2.12％，菌體密度達(dá)到1.223。同時研究了溫度、初始pH、接種量對乳酸菌高密度培養(yǎng)的影響。 優(yōu)化嗜熱鏈球菌(Streptoccus thermophilus ST1)高密度培養(yǎng)條件，最適培養(yǎng)溫度39℃，最適初始pH7.7，最適接種量5％。優(yōu)化后大大縮短了生長延滯期，菌體密度達(dá)1.412。在

5、5L發(fā)酵罐中進(jìn)行嗜熱鏈球菌的增殖培養(yǎng)，6h菌體濃度達(dá)到最大，可達(dá)到 1.71。 (3)嗜熱鏈球菌海藻酸微膠囊的最佳制備工藝為菌體：膠量=1:1，Span80濃度為0.7％，乳化時間為15min，海藻酸鈉濃度為1.5％，包埋率為75.6％。 殼聚糖/海藻酸微膠囊較海藻酸微膠囊提高了被包埋嗜熱鏈球菌的存活率，提高了65.74％；殼聚糖/海藻酸微膠囊在人工腸液中較海藻酸微膠囊難釋放，釋放時間長，釋放緩慢；殼聚糖覆蓋后，微膠囊在

6、胃液作用下有更高的胃酸耐受性；同時耐膽汁酸性加強(qiáng)，在人工胃液中(pH=1.2)放置2h，活菌數(shù)仍能達(dá)到8.2x107cfu/mL，在膽汁酸溶液中處理6h，活菌數(shù)能達(dá)到1.99×109cfu/mL。 殼聚糖/海藻酸微膠囊耐胃酸后仍有一定的發(fā)酵活力。放于冰箱中4℃保存2個月，菌體存活率仍然達(dá)到94.8％，根據(jù)國家對保健產(chǎn)品的要求，經(jīng)計算該微膠囊有效期為94.544天，延長了保藏時間。 綜上所述，內(nèi)源乳化凝膠法制備嗜熱鏈球菌殼