松材線蟲及近緣種熱激蛋白90基因的分子特征及其高溫適應(yīng)性研究.pdf

1、松材線蟲能夠引起松樹萎蔫、失水、褪綠,使松樹迅速死亡,為一種毀滅性森林病害,稱為松材線蟲病。該病害發(fā)病較快,防治難度較大,一旦發(fā)病將造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失,許多國家將該線蟲列為重點(diǎn)植物檢疫對象。松材線蟲分布范圍較廣,對溫度的適應(yīng)性較強(qiáng),而溫度適應(yīng)性是決定松材線蟲分布和擴(kuò)散的一個重要因素。在高溫脅迫下,熱激蛋白90的誘導(dǎo)合成量將發(fā)生明顯的變化,因此,熱激蛋白90可以作為靶基因研究松材線蟲對環(huán)境溫度的適應(yīng)性。本文克隆并分析了松材線蟲及近緣種熱激

2、蛋白90基因分子特征,對松材線蟲的溫度適應(yīng)性進(jìn)行了初步研究。
　　 利用RT-PCR結(jié)合RACE方法,首次克隆得到了松材線蟲、擬松材線蟲、豆傘滑刃線蟲熱激蛋白90基因的cDNA序列全長,分別命名為Bx-hsp90、Bm-hsp90,Bd-hsp90,GenBank登錄號分別為GU013561、HMO34943、HM347331。三者的cDNA序列全長分別為2255bp、2193bp、2232bp、均含有2127bp的開放閱讀框,

3、編碼含有708個氨基酸的蛋白質(zhì),5'端非編碼區(qū)的長度分別為33bp、13bp、13bp,3’端非編碼區(qū)的長度分別為95bp、53bp、92bp,DNA序列全長分別為2440bp、2388bp、2407bp,均含有三個內(nèi)含子,剪切位點(diǎn)符合GT／AG規(guī)則。松材線蟲、擬松材線蟲、豆傘滑刃線蟲熱激蛋白90氨基酸序列的一致性為98.78％,進(jìn)化分析表明,三者與秀麗小桿線蟲的親緣關(guān)系較近,推測三者的進(jìn)化較為低等。
　　 Southern雜交

4、表明,熱激蛋白90在松材線蟲中存在,且為單拷貝基因,這與秀麗小桿線蟲、彭亨絲蟲、大豆孢囊線蟲熱激蛋白90研究結(jié)果一致。線蟲熱激蛋白90基因很有可能均為單拷貝基因,與其它遠(yuǎn)緣相關(guān)基因不易混淆,并且此基因高度保守,因此,熱激蛋白90是研究線蟲進(jìn)化的一個很好的候選基因。熒光PCR分析表明,松材線蟲35℃處理1h后,熱激蛋白90基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著提高,表明高溫脅迫時,熱激蛋白90基因?qū)λ刹木€蟲溫度適應(yīng)性發(fā)揮著重要的作用。松材線蟲熱激蛋白9