中藥學(xué)畢業(yè)論文(含文獻綜述)新雪膠囊的質(zhì)量標準提高研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　新雪膠囊的質(zhì)量標準提高研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級 中藥學(xué)(中藥分析與鑒定方向)

2、 </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號 </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p><b>　　誠 信 聲 明</b></p&g

3、t;<p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文是本人在老師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。我承諾，論文中的所有內(nèi)容均真實、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文作者（簽名）： </p><p>　　年

4、 月 日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要Ⅰ-Ⅱ</b></p><p><b>　　1前言1</b></p><p><b>　　2材料與儀器2</b></p><

5、p>　　2.1儀器與試劑2</p><p>　　2.2樣品收集情況2</p><p><b>　　3方法與結(jié)果2</b></p><p>　　3.1色譜條件的摸索3</p><p>　　3.2前處理方法的探索5</p><p>　　3.3方法學(xué)的考察7</p>&l

6、t;p>　　3.4樣品含量測定12</p><p>　　3.5樣品含量限度的確定13</p><p><b>　　4討論14</b></p><p><b>　　參考文獻16</b></p><p><b>　　綜述17</b></p><p

7、><b>　　致謝24</b></p><p>　　新雪膠囊的質(zhì)量標準提高研究</p><p>　　摘要：目的 提高新雪膠囊的質(zhì)量標準。方法 建立穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測定方法并進行方法學(xué)考察，對檢測條件和供試品的前處理方法等統(tǒng)一研究，考察所建立含量測定限度的合理性。結(jié)果 制定新雪膠囊含量測定方法，確定其含量限度。結(jié)論 新建立的新雪膠囊含量測

8、定方法快速、簡便，重現(xiàn)性好，為新雪膠囊質(zhì)量標準提高工作奠定基礎(chǔ)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：新雪膠囊；標準提高；含量測定；高效液相色譜法</p><p>　　注：本論文題目來源于教師的國家藥典標準提高項目，項目編號為： 272 。</p><p>　　Study on improving the quality standards of Xinxue

9、capsules</p><p>　　Abstract：Objective To improve the quality standards of Xinxue capsules. Methods To establish the content determination method and for methodology inspection about the Paniculta lactone a

10、nd the dehydration paniculta lactone. To unified research the test conditions and the test samples pretreatment methods. To inspection the rationality about the content of the established limits. Results To develop the

11、content determination method about the Xinxue capsules and determine the content of its lim</p><p>　　Keywords：Xinxue capsules， Standards to improve， Content determination， HPLC</p><p><b>　

12、　1 前言</b></p><p>　　新雪膠囊由14味藥組成，主要用于邪熱內(nèi)陷，心神被擾所致的壯熱神昏、煩躁譫語，熱極生風(fēng)而致的痙厥、頸項強直。處方中用寒水石、石膏等大寒之品清熱為君藥，竹葉卷心、升麻、人工牛黃、穿心蓮清熱解毒，磁石重鎮(zhèn)安神為臣藥，沉香行氣開竅， 珍珠層粉 、硝石瀉熱散結(jié)為佐藥。諸藥合用有清熱解毒、開竅寧神、各種熱性病之發(fā)熱、重鎮(zhèn)息風(fēng)之功效。</p><p>

13、　　狀標準的研究情況粒劑，目前“新雪膠囊”為“新雪顆粒”同處方不同劑型的仿制品種，新雪顆粒為原研劑型，目前質(zhì)量標準收載于《中國藥典》2010版一部[1]。新雪膠囊分別執(zhí)行國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的兩個企業(yè)注冊標準，注冊標準號為YBZ25542005（遼寧先臻制藥有限公司）、YBZ12072006-2010Z（江蘇同禾藥業(yè)有限公司），兩個企業(yè)的質(zhì)量標準在處方量、工藝制法、檢驗項目上均存在一定差異。</p><p>

14、;　　該品種“2010~2011年度國家藥品標準提高工作（中藥）科研立項任務(wù)單”的要求為：參考《中國藥典》2010年版一部收載的原研品種“新雪顆粒”質(zhì)量標準，建立穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測定方法并進行方法學(xué)考察或驗證原穿心蓮的含量測定方法，對檢測條件和供試品的前處理方法等統(tǒng)一研究，考察所建立含量測定限度的合理性。</p><p>　　現(xiàn)行的兩個企業(yè)注冊標準中均有含量測定項，江蘇同禾藥業(yè)有限公司的注

15、冊標準中[含量測定]項為HPLC法測定穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯總量；遼寧先臻制藥有限公司的注冊標準中[含量測定]項為HPLC法測定梔子中梔子苷的含量?，F(xiàn)按照該品種“科研立項任務(wù)單”的要求，本著系列品種質(zhì)量標準靠齊的原則[2-3]，參考《中國藥典》2010年版一部“新雪顆?！焙繙y定項下方法，同時，以有大量文獻[4-10]證明使用高效液相色譜法測定穿心蓮含量適用性高。因此，本次實驗采用高效液相色譜法測定穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿

16、心蓮內(nèi)酯的含量，并進行了相應(yīng)的方法學(xué)考察。</p><p><b>　　2 材料與儀器</b></p><p><b>　　2.1儀器與試劑</b></p><p>　　儀器：島津 LC-10AT VP高效液相色譜儀，島津 SPD-M10A VP 檢測器，CLASS-VP工作站；Agilent1260液相色譜儀，VWU紫外

17、檢測器，1260 series高效液相色譜工作站；電子分析天平METTLER TOLEDO XS204；超聲波清洗器。</p><p>　　穿心內(nèi)蓮酯對照品（批號110797-201108，含量以98.7%計，購自中國藥品生物制品檢定研究院）；脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品（批號110854-201308，含量以99.7%計，置五氧化二磷減壓干燥器中減壓干燥12小時后使用，購自中國藥品生物制品檢定研究院）。</p&g

18、t;<p>　　中性氧化鋁：200～300目，批號140922，上海五四化學(xué)試劑有限公司。</p><p>　　試劑：甲醇為色譜純；水為超純水；其它試劑均為分析純。</p><p>　　2.2 樣品收集情況</p><p>　　新雪膠囊目前全國有2家企業(yè)生產(chǎn)，分別為遼寧先臻制藥有限公司（國藥準字Z20050717）和江蘇萬禾制藥有限公司（國藥準字200

19、80037）。本次試驗收到企業(yè)提供的樣品共7批，樣品收集情況見表1。</p><p>　　表 1 樣品收集情況</p><p><b>　　3 方法與結(jié)果</b></p><p>　　新雪顆粒的含量測定法：</p><p>　　含量測定 照高效液相色譜法（中國藥典2010版一部附錄Ⅵ D）測定。</p>

20、<p>　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（55：45）為流動相；穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為254nm。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計算均應(yīng)不低于2000。</p><p>　　對照品溶液的制備 取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含穿心蓮內(nèi)酯16µg和脫水穿心蓮內(nèi)酯24

21、81;g的混合溶液，即得。</p><p>　　供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心20分鐘（3000轉(zhuǎn)/分鐘），精密量取上清液5ml，加在中性氧化鋁柱（200～300目，4g，內(nèi)徑為1.5cm）上，用甲醇20ml洗脫，

22、收集洗脫液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。</p><p>　　測定法 分別精密吸取對照品溶液20µl，供試品溶液20µl，注入液相色譜儀，測定，即得。</p><p>　　參考次測定方法，進行一下摸索。</p><p>　　3.1 色譜條件的摸索</p><p>　　3.1.1檢測波長的選擇<

23、/p><p>　　在二極管陣列檢測器上提取對照品及供試品中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯色譜峰在200～400nm波長范圍的紫外光譜掃描圖，結(jié)果顯示穿心蓮內(nèi)酯在225nm波長處有最大吸收（見圖1），脫水穿心蓮內(nèi)酯在254nm波長處有最大吸收（見圖2，供試品中穿心蓮內(nèi)酯峰與脫水穿心蓮內(nèi)酯峰紫外光譜掃描圖與穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品的光譜掃描圖一致（見圖3和4），與《中國藥典》2010年版一部“新雪顆?！盵含量測定]項

24、下檢測波長一致，故選擇穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為254nm。</p><p>　　圖1 穿心蓮內(nèi)酯對照品峰紫外光譜掃描圖 圖2 供試品中穿心蓮內(nèi)酯峰紫外光譜掃描圖</p><p>　　圖3 脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品峰紫外光譜掃描圖 圖4 供試品中脫水穿心蓮內(nèi)酯峰紫外光譜掃描圖</p><p>　　3.1.2 流動相的選擇 </

25、p><p>　　參考《中國藥典》2010年版一部 “新雪顆?！焙繙y定項下方法，采用甲醇-水（55∶45）為流動相。供試品色譜圖中，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯保留時間分別為8分鐘和20分鐘，基線相對平穩(wěn)，陰性樣品無干擾，分析時間也較合理，故選用甲醇-水（55∶45）為流動相。</p><p>　　3.1.3 柱溫的選擇 </p><p>　　本試驗通過同一份供試品溶液（

26、批號110309）進樣20µl，考察了流動相為甲醇-水（55∶45）時，柱溫分別為20℃、25℃、30℃、35℃、40℃的待測色譜峰的保留情況。觀察各色譜圖可知，各柱溫條件下各色譜圖的穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰分離度良好，理論塔板數(shù)均在5000以上，峰面積積分值相近?？梢娭鶞貙π卵┠z囊的含量測定影響不顯著。綜合考慮，本試驗選擇柱溫35℃。</p><p>　　3.1.4 系統(tǒng)適用性試驗 </p&

27、gt;<p>　　色譜柱：Phenomenex Luna C18 (250×4.6mm， 5µm)，No: 696223-7；柱溫：35℃；流動相：甲醇-水（55：45），流速：1.0ml/min；穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為254nm。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計算，結(jié)果見表2。考慮到不同色譜柱的差異，標準正文將理論板數(shù)定為均應(yīng)不低于4000。</p&g

28、t;<p>　　3.1.5 色譜柱的考察 </p><p>　　分別采用不同品牌的色譜柱，按標準正文[含量測定]項下的色譜條件測定同一供試品溶液（批號：110402），結(jié)果見表2。色譜柱分別為 ① Phenomenex Luna C18 (250×4.6mm，5µm)， NO:696223-7；② Ecosil C18 (250×4.6mm，5µm) ，NO

29、: 9AC41106；③ CAPCELL C18 (200×4.6mm，5µm)，NO:120V-17結(jié)果顯示所選用的三種色譜柱均能達到系統(tǒng)適用性的要求?？紤]到不同色譜柱的差異，標準正文將理論板數(shù)定為均應(yīng)不低于4000。</p><p>　　表2 不同色譜柱的比較</p><p>　　3.2 前處理方法的探索</p><p>　　3.2.1 提

30、取溶劑和洗脫溶劑的選擇</p><p>　　取同一批（批號110309）樣品約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別比較三種不同提取溶劑：70％甲醇、甲醇、50%甲醇各20ml超聲處理30分鐘的效果，其余操作同標準正文“供試品溶液的制備”，結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，50%甲醇提取洗脫的效率最低，以甲醇或70%甲醇為提取溶劑，提取效果差別不大，但甲醇提取液顏色最深，雜質(zhì)最多，故提取溶劑和洗脫溶劑均選為70%甲醇。&l

31、t;/p><p>　　表3 提取溶劑的選擇</p><p>　　3.2.2 提取方法的選擇 </p><p>　　取同一批（批號110309）樣品約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，分別比較五種不同提取方法：方法1為超聲處理10分鐘；方法2為超聲處理20分鐘；方法3為超聲處理30分鐘；方法4為冷浸1小時后超聲處理10分鐘，方法5為冷浸1小時后超聲

32、處理20分鐘，其余操作同標準正文“供試品溶液的制備”，結(jié)果見表4。結(jié)果顯示五種提取方法提取效果差別不大，隨著超聲時間提高，穿心蓮內(nèi)酯含量有所提高，脫水穿心蓮內(nèi)酯含量幾無變化，兼顧時間與效率，標準正文選用“超聲處理30分鐘”，方法簡便。</p><p>　　表4 提取方法的考察</p><p>　　3.2.3 中性氧化鋁裝填量及洗脫溶劑體積的考察</p><p>　　

33、取同一批（批號110309）樣品的70%甲醇提取液，分別置不同裝填量、經(jīng)過活化或未經(jīng)活化的干法裝填的中性氧化鋁柱（200～300目，內(nèi)徑1.5cm）上，按標準正文“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液，依法測定，結(jié)果見表5。結(jié)果表明中性氧化鋁裝填量為3～5g對樣品含量測定結(jié)果影響不大，為保證去除雜質(zhì)的干擾，標準正文選擇中性氧化鋁的裝填量為4g；中性氧化鋁活化與否對樣品含量測定結(jié)果影響不大。</p><p>　　表

34、5 中性氧化鋁裝填量的考察</p><p>　　另為考察25ml 70%甲醇能否洗脫完全，分別再用70%甲醇10ml繼續(xù)洗脫，分別收集洗脫液，按標準正文[含量測定]項下方法測定。70%甲醇洗脫液中未檢出待測組分，說明用70%甲醇洗脫至約25ml，已將供試品中的穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯洗脫完全。</p><p>　　3.2.4 標準方法的正文</p><p>　　含

35、量測定 照高效液相色譜法（中國藥典2010版一部附錄Ⅵ D）測定。</p><p>　　色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（55：45）為流動相；穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為254nm。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計算均應(yīng)不低于4000。</p><p>　　對照品溶液的制備 取穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品適

36、量，精密稱定，加甲醇制成每1ml各含穿心蓮內(nèi)酯15µg和脫水穿心蓮內(nèi)酯20µg的混合溶液，即得。</p><p>　　供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物，混勻，取約2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，離心20分鐘（3000轉(zhuǎn)/分鐘），精密

37、量取上清液5ml，加在中性氧化鋁柱（200～300目，4g，內(nèi)徑為1.5cm）上，用70%甲醇20ml洗脫，收集洗脫液，置25ml量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。</p><p>　　測定法 分別精密吸取對照品溶液20µl，供試品溶液10～20µl，注入液相色譜儀，測定，即得。</p><p>　　3.3 方法學(xué)考察 </p><p&

38、gt;　　3.3.1 專屬性 </p><p>　　取穿心蓮的陰性樣品約2.0g，精密稱定，按標準正文[含量測定]項下供試品溶液的制備方法制備穿心蓮陰性對照溶液，依法進行測定，結(jié)果穿心蓮陰性對照溶液色譜圖中，在與穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品色譜峰相應(yīng)的位置上，未見有色譜峰，說明處方中的其他藥味對測定無干擾。其中穿心蓮內(nèi)酯的理論塔板數(shù)為7800，脫水穿心蓮內(nèi)酯的理論塔板數(shù)為13000，液相色譜圖見圖5～6。&

39、lt;/p><p>　　圖5 穿心蓮內(nèi)酯HPLC色譜圖（檢測波長225nm）</p><p>　　其中：穿心蓮內(nèi)酯對照品（上），供試品（中，批號110309，江蘇萬禾制藥有限公司），穿心蓮陰性對照（下）</p><p>　　圖6 脫水穿心蓮內(nèi)酯HPLC色譜圖（檢測波長254nm）</p><p>　　其中：脫水穿心蓮內(nèi)酯對照品（上），供試品（中

40、，批號110309，江蘇萬禾制藥有限公司），穿心蓮陰性對照（下）</p><p>　　3.3.2 線性關(guān)系及范圍</p><p>　　分別精密吸取穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液（濃度為23.42μg/ml）1µl，2µl，5µl，10µl，15µl，20µl，25µl，30µl，35µl，40µl和脫

41、水穿心蓮內(nèi)酯對照品溶液（濃度為21.64μg/ml）1µl，2µl，5µl，10µl，15µl，20µl，25µl，30µl，35µl，40µl，注入高效液相色譜儀，依法測定，以進樣量（µg）為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線（見表6、7和圖7、8）。穿心蓮內(nèi)酯線性方程：y=2E+6x-1619.3，R2＝0.9998；脫

42、水穿心蓮內(nèi)酯線性方程：2E+06x-749.6，R2＝1。結(jié)果表明，穿心蓮內(nèi)酯在0.02342-0.9368µg范圍內(nèi)，脫水穿心蓮內(nèi)酯在0.02164～0.8656µg范圍內(nèi)，其進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。</p><p>　　表6 穿心蓮內(nèi)酯線性考察結(jié)果</p><p>　　表7 脫水穿心蓮內(nèi)酯線性考察結(jié)果</p><p>　　圖7 穿心

43、蓮內(nèi)酯標準曲線圖 圖8 脫水穿心蓮內(nèi)酯標準曲線圖</p><p>　　3.3.3 穩(wěn)定性考察 </p><p>　　取同一份供試品溶液（批號：110309），在室溫放置0，2，4，6，10，22，26，32小時后分別進樣，依法測定，結(jié)果見表8。穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯含量分別為0.65 mg/粒和0.55mg/粒，RSD分別為0.8%和1.3%（n=8），平均總

44、含量為1.20 mg/粒，RSD為1.0%（n=8），表明供試品溶液在32小時內(nèi)測定結(jié)果基本穩(wěn)定。</p><p>　　表8 穩(wěn)定性試驗結(jié)果</p><p>　　3.3.4 重復(fù)性試驗 </p><p>　　取同一批號（批號：110309）樣品，精密稱取6份，按[含量測定]項下方法制備供試液，依法測定，結(jié)果見表9。穿心蓮內(nèi)酯的平均含量為0.649 mg/粒，RSD

45、為1.8%（n=6）；脫水穿心蓮內(nèi)酯平均含量為0.545mg/粒， RSD為1.4%（n=6）；穿心蓮內(nèi)酯與脫水穿心蓮內(nèi)酯總量平均為1.19 mg/粒，RSD為0.7%（n=6）。</p><p>　　表9 重復(fù)性試驗結(jié)果</p><p>　　3.3.5 準確度（以加樣回收率表示） </p><p>　　取已知含量（批號：110309，穿心蓮內(nèi)酯含量為0.649m

46、g/粒，脫水穿心蓮內(nèi)酯含量為0.545 mg/粒）的樣品約0.8g，精密稱取共6份，置具塞錐形瓶中，精密加入穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯混合對照溶液（穿心蓮內(nèi)酯濃度為0.1303mg/ml，脫水穿心蓮內(nèi)酯濃度為0.1236mg/ml）10ml，再精密加入70%甲醇10ml，密塞，稱定重量，按標準正文[含量測定]項下方法制備供試液，依法測定，計算回收率，結(jié)果見表10和11。穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為100.3%，RSD為1.7%（n=6）；脫水

47、穿心蓮內(nèi)酯平均回收率為100.3%，RSD為1.4%（n=6）。</p><p>　　表10 穿心蓮內(nèi)酯加樣回收試驗結(jié)果</p><p>　　表11 脫水穿心蓮內(nèi)酯加樣回收試驗結(jié)果</p><p>　　3.4 樣品含量測定 </p><p>　　取所收集的樣品7批，按標準正文[含量測定]項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算供試品中穿心蓮內(nèi)

48、酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，結(jié)果見表12。</p><p>　　表12 樣品含量測定結(jié)果</p><p>　　3.5 樣品含量限度的確定</p><p>　　《中國藥典》2005年版一部“穿心蓮”藥材[含量測定]項下規(guī)定：本品按干燥品計算，含穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量不得少于0.80%。根據(jù)處方，成品每粒含穿心蓮藥材0.44g（0.5g/粒）或0.2933g（

49、0.35g/粒），穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的理論含量應(yīng)為每粒含穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量不得少于3.52mg（0.5g/粒）與2.35mg（0.35g/粒）。</p><p>　　試驗中共考察了2個企業(yè)提供的共7批樣品的含量，7批樣品(規(guī)格為0.5g/?；?.35g/粒)穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯總量在0.24～1.36mg/粒之間。江蘇同禾藥業(yè)有限公司的現(xiàn)行注冊標準對穿心蓮的含量進行了控制，其[含量測定

50、]項下規(guī)定：本品每粒(規(guī)格為0.35g/粒)含穿心蓮以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量計，不得少于0.85mg，以此計算轉(zhuǎn)移率約為36%，基本合理，本次修訂維持此限量規(guī)定。</p><p>　　遼寧先臻制藥有限公司的現(xiàn)行注冊標準[含量測定]項對梔子中梔子苷的含量進行了控制，未建立穿心蓮的含量控制指標，所測定3批樣品穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量偏低，參考江蘇同禾藥業(yè)有限公司的現(xiàn)行注冊標準及《中國藥典》2010版

51、一部“新雪顆粒”的含量限度，暫規(guī)定為本品每粒(規(guī)格為0.5g/粒)含穿心蓮以穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的總量計，不得少于1.1mg，以此計算轉(zhuǎn)移率約為31%，基本合理。</p><p><b>　　4 討論 </b></p><p>　　4.1 色譜條件的分析</p><p>　　試驗結(jié)果表明，標準方法的色譜條件選擇如下：</p>

52、<p>　　柱溫：35℃；流動相：甲醇-水（55：45）；流速：1.0ml/min；穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為225nm，脫水穿心蓮內(nèi)酯檢測波長為254nm。理論板數(shù)按穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯峰計算，不低于4000。</p><p>　　4.2 前處理方法的分析</p><p>　　4.2.1 溶劑濃度的影響</p><p>　　試驗結(jié)果表明，甲醇濃度越高

53、，提取出的穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量越多，但由于甲醇提取溶液顏色較深，提取出的雜質(zhì)最多，因此，選用70%甲醇作為提取溶劑和洗脫溶劑。</p><p>　　4.2.2 超聲時間的影響</p><p>　　實驗中，隨著超聲提取的時間的增長，穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的溶出率逐漸增加，冷浸1h再超聲的效果比直接超聲的效果更好?？紤]到時間和效率，最終選用超聲處理30分鐘。</p>

54、<p>　　4.2.3 中性氧化鋁的裝填量和活化的影響</p><p>　　實驗結(jié)果表明，無論是中性氧化鋁的裝填量，還是中性氧化鋁是否經(jīng)過活化，對測定結(jié)果并不影響?？紤]到時間效率，同時需要確保雜質(zhì)的完全去除，最終選用4g不經(jīng)過活化的中性氧化鋁進行裝柱。</p><p>　　4.3 提高新雪膠囊質(zhì)量標準的意義</p><p>　　目前，新雪膠囊分別執(zhí)行國

55、家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的兩個企業(yè)注冊標準，分別是遼寧先臻制藥有限公司和江蘇同禾藥業(yè)有限公司，兩個企業(yè)的質(zhì)量標準在處方量、工藝制法、檢驗項目上均存在一定差異。為了能夠統(tǒng)一新雪膠囊的質(zhì)量標準，為監(jiān)管新雪膠囊的質(zhì)量品質(zhì)提供標準依據(jù)，改進并完善新雪膠囊的質(zhì)量標準非常有必要。</p><p>　　同時，新雪膠囊作為新雪系列的品種之一，是新雪顆粒同處方不同劑型的仿制品種，新雪顆粒為原研劑型，目前質(zhì)量標準收載于《中國藥典》2

56、010版一部。因此，本次實驗是參考《中國藥典》2010年版一部收載的原研品種“新雪顆?！辟|(zhì)量標準，通過測定穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，并進行色譜條件考察，供試品的前處理方法考察和方法學(xué)考察，建立新的新雪膠囊的含量測定方法，為新雪膠囊的質(zhì)量標準提高研究奠基。</p><p><b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 國家藥典委員會.中華人民

57、共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010錄XⅢc．</p><p>　　[2] 栗建明，林巧玲．HPLC測定新雪顆粒中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J]．廣東藥學(xué)院學(xué)報，2006(3): 272-274.</p><p>　　[3] 梁永平，農(nóng)小棉，韋敏法.新雪片的質(zhì)量標準研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2007（8）:1953-1954.</p><

58、p>　　[4] 徐曉琴，胡廣林，沈金燦，等.反相高效菠帽色譜法測定穿心蓮藥材及其制劑中的穿心蓮內(nèi)醣和脫水穿心蓮內(nèi)酯[J]色譜，2002，20(5)：446.</p><p>　　[5] Wirat Ruengsitagoon，etal. Flow injection spectrophotometric determination of andrographolide from Andrographis p

59、aniculata [J]. Talanta， 2006，69：900.</p><p>　　[6] G.A.Akowuah，etal. HPLC and HPTLC densitometric determination of andrographolides and antioxidant potential of Andrographis paniculata [J] .Journal of Food Co

60、mposition and Analysis，2006，19：118.</p><p>　　[7] 俞小陶，許江.RP-HPLC測定穿心蓮膠囊中脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報，2003(01)：17.</p><p>　　[8] 毋福海，李光喜，梁漢明.HPLC測定復(fù)方穿心蓮片中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].華西藥學(xué)雜志，2004(02)：133-134.</p

61、><p>　　[9] 曾寶，謝友良，林吉，等.穿心蓮軟膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)蘸的含量測定[J].時珍國醫(yī)國藥，2005，16(10)：997.</p><p>　　[10] 黃筱琴，陳建華，楊安金. HPLC法測定穿心蓮葉中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2007(06).</p><p><b>　　綜 述</b

62、></p><p>　　新雪膠囊的藥理分析與測定方法研究</p><p>　　新雪膠囊由14味藥組成，主要用于邪熱內(nèi)陷，心神被擾所致的壯熱神昏、煩躁譫語，熱極生風(fēng)而致的痙厥、頸項強直。處方中用寒水石、石膏等大寒之品清熱為君藥，竹葉卷心、升麻、梔子、人工牛黃、穿心蓮清熱解毒，磁石重鎮(zhèn)安神為臣藥，沉香行氣開竅， 珍珠層粉 、硝石瀉熱散結(jié)為佐藥。諸藥合用有清熱解毒、開竅寧神、各種

63、熱性病之發(fā)熱、重鎮(zhèn)息風(fēng)之功效。針對其主要藥物的化學(xué)成分、藥理作用、中醫(yī)辨證、臨床應(yīng)用幾方面進行總結(jié)，得出新雪膠囊的研究現(xiàn)狀。</p><p><b>　　1 化學(xué)成分</b></p><p>　　1.1 穿心蓮的化學(xué)成分：</p><p>　　穿心蓮的化學(xué)成分主要為穿心蓮內(nèi)酯類化合物和黃酮類化合物[1]。</p><p>

64、;　?。?）穿心蓮內(nèi)脂類化合物 穿心蓮內(nèi)酯； 穿心蓮新苷[2]； 14-去氧穿心蓮內(nèi)酯； 14-去氧- 11，12-二去氫穿心蓮內(nèi)酯； 異穿心蓮內(nèi)酯； 潘尼內(nèi)酯； 14-去氧穿心蓮內(nèi)酯苷； 穿心蓮內(nèi)酯苷等。</p><p>　　（2）黃酮類化合物 5一羥基一7，8，2’-三甲氧基黃酮； 5一羥基一7，8，2’，3’一四甲氧基黃酮等。</p><p>　　1.2 沉香的化學(xué)成分： <

65、;/p><p>　　沉香的化學(xué)成分主要為三萜類化成分、黃酮類化合物、色原酮類成分和揮發(fā)油成分[3]。</p><p>　　(1) 三萜類成分[4] 沉香螺旋醇、 B-沉香呋喃、 白木香醇、 去氫白木香醇、白木香醛、 羥基何帕酮等。</p><p>　　(2) 黃酮類化合物 芫花素、 木犀草素等。</p><p>　　(3) 色原酮類成分

66、分別為6，8-二羥基-2-[2-（3′ -甲氧基-4′-羥基苯乙基）]色原酮和6-甲氧基-2-[2-（3′-甲氧基-4′-羥基苯乙基）]色原酮。</p><p>　　(4) 揮發(fā)油成分 芐基丙酮、 十六碳烷酸、 6，10，14-三甲基-2-十五碳酮、 十四碳烷酸、 反式-9-十八碳烯酸、 十五碳烷酸、 4，8，12，16-四甲基十七碳烷酸內(nèi)酯、 葉綠醇、 壬酸、 異葉綠醇、 十八碳烷酸等。 </p>

67、;<p>　　1.3 人工牛黃的化學(xué)成分：</p><p>　　人工牛黃的化學(xué)成分主要為膽汁色素類、膽汁酸類、氨基酸和蛋白質(zhì)類、各種微量元素等[5]。</p><p>　　（1）膽汁色素類 膽綠素、 游離膽紅素。</p><p>　?。?）膽汁酸類 包括游離膽汁酸和結(jié)合膽汁酸。游離膽汁酸有膽酸、 豬去氧膽酸、 去氧膽酸、 鵝去氧膽酸、 石膽酸。 結(jié)

68、合膽汁酸包括甘氨膽酸、 ?；悄懰帷??；切苋パ跄懰帷?甘氨鵝去氧膽酸、 ?；蛆Z去氧膽酸、 甘氨去氧膽酸、 ?；侨パ跄懰帷?lt;/p><p>　?。?）氨基酸和蛋白質(zhì)類 丙氨酸、 甘氨酸、 ?；撬?、 精氨酸、 天冬氨酸、 酪氨酸、 蛋氨酸、 蘇氨酸、 絲氨酸、 谷氨酸、 胱氨酸、 纈氨酸、 亮氨酸、 異亮氨酸、 苯丙氨酸、 賴氨酸、 組氨酸、 脯氨酸、 粘蛋白。</p><p>　?。?）微

69、量元素類 鉀、 鈉、 鈣、 鎂、 鐵、 磷等。</p><p>　?。?）膽甾醇類 膽固醇。</p><p>　?。?）此外，還有卵磷脂、 類胡蘿卜素、 油狀強心成分、 維生素類。</p><p><b>　　2 藥理作用</b></p><p>　　新雪膠囊具有清熱解熱，抗炎，鎮(zhèn)痙熄風(fēng)，開竅寧神的效果。</p

70、><p>　　由中國中醫(yī)研究院牽頭的“十五”、“863”計劃重大項目的分課題《治療 SARS 中藥篩選研究》[6]，證明新雪顆粒在對抗內(nèi)毒素、消除肺炎、抗肺纖維化、改善呼吸窘迫等方面有效，為臨床用藥提供了依據(jù)。臨床上新雪顆粒主要用于治療上呼吸道感染所致發(fā)熱，主要是瀉熱降火的作用。</p><p>　　余善強[7]等對新雪顆粒進行了體外抗 RSV 的治療、預(yù)防和中和實驗研究。 結(jié)果表明新雪顆粒與

71、RSV病毒混合液作用12小時后，RSV的感染力明顯減弱，病毒復(fù)制動力學(xué)明顯改變。說明新雪顆粒確實有體外抑制、中和 RSV作用，其機制與直接殺傷病毒和保護細胞免受損害有關(guān)。</p><p>　　陳克敏[8]等人通過對家兔及大鼠使用新雪丹和阿司匹林，對比兩藥的效果。本研究表明，新雪丹對家免及大鼠的發(fā)熱確有明顯的解熱作用，此作用隨劑量增加而加強，尤其是對菌苗引起家兔的發(fā)熱，新雪丹3.109/kg的解熱作用可以比得上阿司

72、匹林0.159/kg的解熱作用。新雪丹對二甲苯刺激引起小鼠耳殼的急性炎癥及棉球刺激大鼠皮下肉芽腫的生成均有一定的抑制作用，這和本方的降火、散結(jié)、止痛有關(guān)。</p><p>　　徐慧聰[9]等臨床觀察新雪片治療高熱的效果，結(jié)果表明，新雪片治療高熱癥之退熱作用緩和持久，目前，常用的西藥退熱藥如乙酰氨基酚、布洛芬等退熱作用雖快，但短時間內(nèi)體溫又見回升。而新雪片注射液退熱后未發(fā)現(xiàn)有體溫復(fù)升的現(xiàn)象，特別是對年老體弱或體溫

73、40℃以上者，不會因大量出汗、體溫驟降而引起虛脫。在應(yīng)用新雪片治療過程中未發(fā)現(xiàn)有明顯不良反應(yīng)，說明新雪片治療高熱癥療效明顯、可靠，可作為治療急性熱病的的首選中藥制劑。</p><p><b>　　3 中醫(yī)辨證</b></p><p>　　從中醫(yī)藥角度分析新雪膠囊的成分，亦可以得出新雪膠囊清熱解熱，鎮(zhèn)痙熄風(fēng)，開竅寧神的效果[10]。</p><p&g

74、t;　　方中石膏性辛甘大寒，歸肺、胃經(jīng)，可清熱瀉火，除煩止渴，適用于溫?zé)岵⌒霸跉夥?，壯熱、煩渴、汗出、脈洪大等實熱證。寒水石辛咸寒，歸心、胃、腎經(jīng)，功效清熱瀉火，常與石膏同用?；?、淡、寒，既能利水，又熄風(fēng)止痙，清解暑熱。牛黃味苦性涼，歸肝、心經(jīng)，功效熄風(fēng)止痙，化痰開竅，清熱解毒，可適用于溫?zé)岵〖靶后@風(fēng)之壯熱神昏，驚厥抽搐等癥。</p><p>　　梔子味苦性寒，歸心、肝、肺、胃、三焦經(jīng)，清熱瀉火除煩，可用于

75、熱病煩悶。升麻辛甘微寒，歸肺、脾、胃、大腸經(jīng)，可發(fā)表透疹、清熱解毒，可用于風(fēng)熱頭痛、麻疹不透、齒痛口瘡、咽喉腫痛等多種熱毒證。穿心蓮味苦性寒，歸肺、胃、大腸、小腸經(jīng)，功效清熱解毒，燥濕消腫，可用于外感風(fēng)熱、溫病初起，肺熱咳喘，肺癰吐膿、咽喉腫痛。竹葉卷心為竹葉中卷而未放的幼葉，甘、辛、淡、寒，歸心、胃、小腸經(jīng)，用于熱病煩渴、口瘡尿赤。冰片辛、苦、微黃，歸心、脾、肺經(jīng)，功效開竅醒神，清熱止痛，可用于熱病神昏，目赤腫痛、喉痹腫痛等。<

76、/p><p>　　珍珠層粉味咸性寒，歸肝、心經(jīng)，功效平肝潛陽，清肝明目，鎮(zhèn)心安神，與上藥合用，加強清熱除煩定驚止痛之功。芒硝咸、苦、寒，歸胃、大腸經(jīng)，功效瀉下、軟堅、清熱，用于實熱積滯、大便燥結(jié)，咽痛、口瘡、目赤及癰瘡腫痛。諸藥合用，清熱解毒功效強，用于各種熱病之發(fā)熱，如扁桃體炎、上呼吸道感染、咽炎、氣管炎所引起的高熱以及溫?zé)岵≈疅岵唤狻?lt;/p><p><b>　　4 測定方法研

77、究</b></p><p>　　4.1主藥的薄層色譜鑒別</p><p>　　薄層色譜法是近年發(fā)展起來的一種微量、快速、簡便的分離分析技術(shù)，多用于成分的定性鑒別。運用薄層色譜法對新雪系列中新雪顆粒、新雪片進行鑒別的文獻已有不少，如梁永平[11]等人對新雪片中的梔子、穿心蓮、冰片進行薄層色譜鑒別；如《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》[12]中對新雪片中人工牛黃進行薄層色譜鑒別；如《

78、中國藥典》2010版[13]中對新雪顆粒中梔子、冰片、人工牛黃進行薄層色譜鑒別。但相比之下，新雪膠囊的定性鑒別卻還沒有相關(guān)的文獻敘述。因此，通過對新雪膠囊進行定性鑒別的制定，是為進一步完善新雪膠囊的質(zhì)量標準鋪墊重要的基礎(chǔ)。</p><p>　　遵循同系列、同處方、同比例、同制法、不同劑型的藥物盡量使用同種質(zhì)量標準檢測原則，參考上述的文獻，可以選擇對新雪膠囊中的梔子、冰片、人工牛黃進行薄層色譜鑒別。</p&g

79、t;<p>　　通過薄層色譜實驗，分別確定新雪膠囊中梔子、人工牛黃、冰片的薄層色譜鑒別方法。設(shè)置陰性對照，用以說明其他成分對本法無干擾，從而證明該方法專屬性較強，結(jié)果可靠。同時，用預(yù)制板和手鋪板分別在常溫常濕、常溫高濕、低溫常濕的情況下對三種鑒別方法進行檢測，觀察結(jié)果呈現(xiàn)是否良好，用以證明該方法的適用性高。</p><p>　　4.2 高效液相色譜法測定含量</p><p>

80、　　高效液相色譜法是現(xiàn)在最常用的一種含量測定方法，具有分離效率高、分析速度快、靈敏度高、使用范圍廣等優(yōu)點。運用高效液相色譜法測定新雪系列中新雪顆粒和新雪片中主要成分的文獻已有不少，如栗建明[14]等人對新雪顆粒中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯進行含量測定；楊凌[15]等人對新雪顆粒中脫水穿心蓮內(nèi)酯進行含量測定；冉桂梅[16]等人對新雪顆粒中梔子苷進行含量測定；梁永平[11]等人和章曙丹[17]等人都對新雪片中梔子苷進行含量測定。但相比之下，

81、新雪膠囊的有效成分的測定卻還沒有相關(guān)的文獻敘述。因此，對新雪膠囊中有效成分進行測定，進一步完善新雪膠囊的質(zhì)量控制標準的工作很有必要。</p><p>　　遵循同系列、同處方、同比例、同制法、不同劑型的藥物盡量使用同種質(zhì)量標準檢測原則，參考上述的文獻，可以選擇對穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯進行含量測定，或者選擇對梔子中梔子苷進行含量測定，來制定新雪膠囊的含量測定方法。由于在制備新雪膠囊過程中，穿心蓮的投料與梔

82、子的投料對比，穿心蓮的投料比例較大，因此，選用穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量測定方法作為新雪膠囊的有效成分測定方法。</p><p>　　使用雙波長高效液相色譜法檢測新雪膠囊中穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯的含量，可同時檢測兩種成分，操作簡便，方法專屬性強，可用于控制該制劑的質(zhì)量。</p><p><b>　　5 小結(jié)</b></p><p&

83、gt;　　以上通過新雪膠囊中重要藥物的化學(xué)成分、藥理研究、中醫(yī)辨證等幾方面資料表明：（1）新雪膠囊是清熱解毒、開竅寧神的重要藥物，是現(xiàn)代中醫(yī)臨床常用的清熱解熱藥。（2）新雪膠囊組方所用藥物比較多，藥物作用之間相輔相成，相得益彰，驗證了中藥的科學(xué)內(nèi)涵。（3）新雪膠囊作為新雪系列中的膠囊劑，對比同系列中的顆粒劑、片劑，質(zhì)量控制標準尚未全面完善。為了保證安全、有效用藥，有必要建立科學(xué)合理的質(zhì)量控制體系。</p><p>

84、;<b>　　參考文獻</b></p><p>　　[1] 朱艷玲.穿心蓮化學(xué)成分和藥理作用的研究進展[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013(14)：238-239.</p><p>　　[2] Matsuda. T，Kuroyanagi. M，Sugiyama. S，etal，Cell differentiation-inducing diterpenes from A

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90、新雪顆粒中脫垂穿心蓮內(nèi)酯的含量[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2005，23（增刊）：199-200.</p><p>　　[16] 冉桂梅，楊凌，張才華，等. 高效液相色譜法測定新雪顆粒中梔子苷的含量[J].色譜，2004，22（6）：639-640.</p><p>　　[17] 章曙丹，徐強，湯建成.HPLC法測定新雪片中梔子苷含量[J].中國新藥與臨床藥理，2007，18（2）：134-135

91、.</p><p><b>　　致 謝</b></p><p>　　本論文是在廣州市藥品檢驗所中藥室顧利紅主任和中藥師李純老師的悉心指導(dǎo)下完成的。</p><p>　　在這里我要感謝顧主任在實習(xí)期間給予我的關(guān)懷和幫助，無論是工作上的還是生活上的，都讓我獲益良多。</p><p>　　我感謝李純老師，感謝她在選題，數(shù)

92、據(jù)統(tǒng)計、分析，論文修改過程中，給予我耐心的指導(dǎo)和熱情的幫助！她淵博的學(xué)識，嚴謹求實的態(tài)度，都對我產(chǎn)生了極大的影響。在此我對她表示由衷的敬意和至深的感謝！</p><p>　　我感謝廣州市藥品檢驗所的所有工作人員在實習(xí)期間給予我的幫助，為我提供了許多學(xué)習(xí)機會。</p><p>　　感謝學(xué)校，感謝所有的老師，感謝他們教導(dǎo)了我四年，為我們打下了專業(yè)知識基礎(chǔ)，這為我以后的學(xué)習(xí)與機會提供了有利條件！