1型鴨甲肝病毒(DHAV-1)致雛鴨肝損傷機(jī)制的研究.pdf

1、鴨病毒性肝炎是由1型鴨甲肝病毒（DHAV-1）引起雛鴨的一種急性高度接觸性傳染病，主要侵害3周齡以內(nèi)的雛鴨，特別是1周齡以內(nèi)的雛鴨最易感，病死率達(dá)90％以上。雖然近兩年DHAV-1的全基因序列公布于世使得DVH得到了人們的關(guān)注，國內(nèi)眾多研究者的注意力集中在病原學(xué)的研究，而對(duì)于DVH的發(fā)病機(jī)制的研究仍局限在上世紀(jì)的組織學(xué)和血清學(xué)水平。自然感染DHA-V與日齡有關(guān)，1～2周齡是發(fā)病的高峰期。我們前期研究已經(jīng)證實(shí)4日齡的雛鴨人工感染DHAV-

2、1后1～2天急性死亡，而35日齡的大鴨僅見一過性的精神沉郁。35日齡鴨為什么不發(fā)病，除了與免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善以外，是不是與鴨肝臟發(fā)育相關(guān)，國內(nèi)外對(duì)不同品種的8周齡以上鴨的肥肝發(fā)生機(jī)制研究的較多，而對(duì)于35日齡以下肉鴨肝臟脂代謝還未見報(bào)道。本課題第一部分?jǐn)M對(duì)3-35日齡鴨的脂肪代謝規(guī)律進(jìn)行動(dòng)態(tài)的研究。其次雛鴨感染DHAV-1后快速死亡與急性肝損傷及其導(dǎo)致的低血糖昏迷或肝性腦病密切相關(guān)。因此本研究第二部分以臨床分離的DHAV-1JX株感染動(dòng)

3、物模型，研究病毒感染后，肝臟脂質(zhì)過氧化、脂代謝相關(guān)調(diào)控基因和炎癥因子的改變，從而闡明鴨肝炎病毒致雛鴨肝損傷的機(jī)制。
　　1.3-35日齡櫻桃谷肉鴨肝臟脂代謝的特點(diǎn)
　　為了弄清鴨肝炎病毒和鴨日齡的易感性差異，本研究擬在自由采食的飼養(yǎng)條件下，從鴨血清學(xué)和肝組織學(xué)的變化著手，動(dòng)態(tài)觀察35日齡內(nèi)肉鴨肝臟脂肪的代謝規(guī)律。結(jié)果表明3-35肉鴨肝組織內(nèi)粗脂肪的含量均大于10％，其中以3日齡肉鴨肝臟內(nèi)粗脂肪含量最高，可達(dá)38.65％;肝組

4、織冰凍切片油紅O染色發(fā)現(xiàn)4日齡雛鴨肝臟內(nèi)中性脂肪含量最高。3-35日齡肉鴨血漿脂代謝指標(biāo)顯示3-7日齡總膽紅素(TBIL)、總膽固醇(TC)、高密度膽固醇脂(HDLC)、低密度膽固醇脂LDLC均下降，而甘油三酯(TG)升高，TBIL、TC、HDLC、LDLC、TG的變化明顯的時(shí)間集中在7、14日齡。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)肝組織內(nèi)的微粒體脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)、過氧化物酶增值激活受體(PPAR)和脂肪酸結(jié)合蛋白(FABP)表達(dá)進(jìn)行觀察:

5、14日齡時(shí)雛鴨血漿TG升至最高，可能與組織內(nèi)MTP的表達(dá)量7-14日齡下降密切相關(guān)，21日齡時(shí)肝組織中粗脂肪含量最低與該時(shí)間點(diǎn)的MTP的表達(dá)量上升至最高有關(guān)，暗示MTP參與肝細(xì)胞內(nèi)TG的轉(zhuǎn)運(yùn);PPAR在3-28日齡表達(dá)量逐漸上升，與肝組織內(nèi)粗脂肪含量下降呈負(fù)相關(guān);FABP的表達(dá)可能與肉鴨后期肝臟內(nèi)TG的合成密切相關(guān)。結(jié)論:櫻桃谷肉鴨1-3周齡是肝內(nèi)脂質(zhì)向機(jī)體其他部位輸送的關(guān)鍵時(shí)期。
　　2.鴨肝炎病毒對(duì)4日齡櫻桃谷肉鴨的肝損傷機(jī)制

6、研究
　　禽類的肝臟是禽體內(nèi)含巨噬細(xì)胞（枯否氏細(xì)胞）最多的器官，機(jī)體受到應(yīng)激時(shí)，這些細(xì)胞的活化在鴨肝炎病毒感染時(shí)的作用還不清楚。鑒于雛鴨肝臟的特點(diǎn)，本研究從鴨肝炎病毒感染雛鴨后肝脂代謝、自由基及細(xì)胞因子等變化來闡明肝損傷的可能機(jī)制。DHAV-1JX感染雛鴨后5d，肝臟內(nèi)總抗氧化能力下降，丙二醛(MDA)在感染后2-3d升高，一氧化氮(NO)及誘導(dǎo)性一氧化氮合酶(iNOS)在2-3d升高，引起肝臟出血和大量肝細(xì)胞變性壞死及膽管上皮的

7、增生。熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄水平:干擾素a(INFa)轉(zhuǎn)錄1d升高后下降，而細(xì)胞因子白細(xì)胞介素1(IL-1)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)轉(zhuǎn)錄水平均下降，血清IL-1β感染后1d升高明顯，血清IL-6變化不明顯。肝細(xì)胞受損引起血液中轉(zhuǎn)氨酶迅速升高，肝內(nèi)MTP表達(dá)量1d急劇下降，脂代謝異常，血漿TG升高，TC降低，DLDC升高，肝脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)異常引發(fā)脂肪變性。DHAV-1JX致4日齡雛鴨急性肝損傷至肝功