犬布氏桿菌分離鑒定及omp25基因分析.pdf

1、本研究采用虎紅平板凝集試驗(yàn)和OIE標(biāo)準(zhǔn)間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)初篩，試管凝集試驗(yàn)復(fù)核，對我國部分省市進(jìn)行了犬布氏桿菌病血清學(xué)流行病學(xué)調(diào)查。共檢測的4750份犬血清中60份為陽性，其中，29份檢測到粗糙型布氏桿菌抗體（牧區(qū)2份、農(nóng)區(qū)4份、城區(qū)23份），31份檢測到光滑型布氏桿菌抗體（牧區(qū)19份、農(nóng)區(qū)2份、城區(qū)10份）。個(gè)體陽性率為1.26％（牧區(qū)6.69%，農(nóng)區(qū)1.53%，城區(qū)0.84%），被調(diào)查省市均有犬感染布氏桿菌。
　　分別對3份

2、犬脾臟和1份犬全血病料進(jìn)行了布氏桿菌分離鑒定。結(jié)果從1份全血中分離到1株布氏桿菌（命名為Xue-1），經(jīng)傳統(tǒng)的鑒定方法鑒定為犬布氏桿菌。
　　對犬布氏桿菌 Xue-1（本實(shí)驗(yàn)分離）、RuGao（中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心監(jiān)測室人獸共患病實(shí)驗(yàn)室保存）和1124（中國疾病預(yù)防控制中心傳染病所布病室保存）進(jìn)行了多種PCR方法的鑒定。3株分離菌株經(jīng)VirB8-PCR均擴(kuò)增出大小為716bp的片段，與參考標(biāo)準(zhǔn)菌株B.suis1330、B.a

3、bortus A544、B.canis RM6/66和B.melitensis16M擴(kuò)出的片段大小一致。采用Bruce-ladder PCR和Multi-PCR將分離株1124鑒定為犬布氏桿菌，而將分離株Xue-1和RuGao鑒定為豬布氏桿菌。通過犬布氏桿菌缺失序列鑒定實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，菌株Xue-1和RuGao擴(kuò)增出的1674bp的片段與B.suis1330完全一致；菌株1124擴(kuò)增出的607bp的片段與B.canis RM6/66完全一致。

4、這說明菌株Xue-1和RuGao在ppdk基因沒有缺失，故認(rèn)為Xue-1和RuGao為非典型布氏桿菌，而菌株1124為典型犬布氏桿菌。通過對3株分離株的omp25基因和Genbank、ICB、EBI等公共數(shù)據(jù)庫的布氏桿菌及遺傳相關(guān)性較高的其他細(xì)菌的omp25基因序列進(jìn)行多序列比對，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)1124與B.RM6/66聚為一枝，而Xue-1和RuGao與其他的非典型犬布氏桿菌聚為一枝。
　　MLVA鑒定方