犬細小病毒的分離鑒定及其蛋白基因的序列分析研究.pdf

1、本研究進行了犬細小病毒(CPV)的分離鑒定及其VP2蛋白基因的序列分析研究。
　　 用F81細胞從2008～2010年間不同地區(qū)送檢的30份腸炎犬病料中分離出11株細小病毒，經(jīng)形態(tài)學(xué)、理化學(xué)、生物學(xué)和分子病毒學(xué)等鑒定。結(jié)果這11株病毒均能在F81細胞上生長，產(chǎn)生典型的CPV細胞病變；，抗氯仿，耐酸，耐熱，能被5-IUDR抑制，為DNA病毒，可凝集豬、馬、貓的紅細胞，不能凝集人、雞、豚鼠、兔的紅細胞，HA試驗?zāi)鼙豢笴PV的特異性抗

2、體所抑制。鑒定結(jié)果證明這10株病毒均為細小病毒。
　　 根據(jù)Genbank上發(fā)表的CPV與FPV基因序列，利用DNAstar軟件分別設(shè)計擴增CPVVP2基因。擴增CPVVP2基因的引物，上游引物：5`-CATGAGTGATGGAGCAGTTCAACCAGAC-3`，下游引物：5`-CTAGGTGCTAGTTGATATGTAATAAAC-3`。采用分子克隆技術(shù)對對所分離的11株CPVVP2蛋白基因進行了序列分析。根據(jù)CPVVP2蛋

3、白10個關(guān)鍵位點氨基酸的突變情況，結(jié)果CPV08-01、CPV09-02為CPV-2a；CPV09-04和CPV10-05與CPV-2a的關(guān)系最為密切，但是其VP2第898位核苷酸發(fā)生G→A替換使其第300位氨基酸發(fā)生G→S替換(300G→S)。CPV08-022、CPV09-01、CPV09-03、CPV10-01、CPV10-02、CPV10-03、CPV10-04為CPV-2b。
　　 不同毒株的VP2蛋白還發(fā)生其他的氨基

4、酸替換，CPV09-04和CPV10-05的核苷酸發(fā)生700C→T替換使氨基酸發(fā)生234H→Y替換；CPV10-03的核苷酸發(fā)生767G→A替換，氨基酸發(fā)生256R→K替換；CPV09-03、CPV09-04、CPV10-01、CPV10-02的核苷酸發(fā)生800T→A替換，氨基酸發(fā)生267F→Y替換。CPV08-011、CPV09-02的核苷酸發(fā)生889T→G替換，氨基酸發(fā)生297S→A替換。
　　 所分離的CPV毒株與參考毒株