雙鏈RNA介導(dǎo)的哈茨木霉mapk和rac基因沉默.pdf

1、許多絲狀真菌營(yíng)養(yǎng)器官、生殖器官以及侵染機(jī)構(gòu)的產(chǎn)生都需要受環(huán)境條件產(chǎn)生的物理或化學(xué)信號(hào)的誘導(dǎo)，所以細(xì)胞外的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對(duì)絲狀真菌的生長(zhǎng)、發(fā)育和成功侵染至關(guān)重要。哈茨木霉作為一種重要的植物病原生物防治菌，其防治機(jī)理一直是今年研究的熱點(diǎn)。MAPK作為絲裂原活化蛋白激酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，通過(guò)磷酸化底物蛋白，在絲狀真菌中參與真菌的生長(zhǎng)、發(fā)育、脅迫反應(yīng)及致病性。RAC作為小 G蛋白 Rho家族成員，通過(guò)有活性的GTP結(jié)合形式與無(wú)活性的GD

2、P結(jié)合形式之間的轉(zhuǎn)換，調(diào)控著細(xì)胞骨架的重排和過(guò)氧化物的產(chǎn)生。對(duì)這兩個(gè)基因在木霉菌生物防治過(guò)程中功能研究有助于闡明木霉菌生物防治分子機(jī)理，為進(jìn)一步提高哈茨木霉生物防治效果奠定基礎(chǔ)。
　　本實(shí)驗(yàn)利用RNA干涉技術(shù)，導(dǎo)入可形成鏈內(nèi) dsRNA的沉默載體，用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)入哈茨木霉，獲得分別對(duì)特異基因 mapk和rac表達(dá)抑制的沉默轉(zhuǎn)化子。通過(guò)比較轉(zhuǎn)化子的酶活表達(dá)、滲透條件下的生長(zhǎng)、及與病原菌平皿對(duì)峙實(shí)驗(yàn)分析mapk基因與rac基因?qū)w維素

3、酶、β-1,3-葡聚糖酶、滲透應(yīng)急及菌絲的調(diào)節(jié)。
　　本實(shí)驗(yàn)成功獲得了哈茨木霉 T88 mapk和rac基因全長(zhǎng)編碼區(qū) cDNA序列，提交至 Genbank上，登陸號(hào)分別為：FJ716099和FJ595933，mapk編碼406個(gè)氨基酸，理論分子量為46.28 kDa。rac編碼204個(gè)氨基酸，理論分子量為22.4 kDa。構(gòu)建了分別沉默 mapk和rac基因的質(zhì)粒 pCambla1301-mapk和pCambla1301-rac