轉(zhuǎn)哈茨木霉雙幾丁質(zhì)酶基因(Ech42+Nag70)提高棉花黃萎病抗性的研究.pdf

1、棉花黃萎病(V.Wilt)是化學(xué)藥劑難以防治的土傳病害之一，爆發(fā)時會嚴重影響棉花的纖維品質(zhì)和產(chǎn)量。我國是棉花生產(chǎn)大國，主要以種植陸地棉為主。而黃萎病高抗材料主要存在于野生棉和少數(shù)海島棉中，陸地棉中幾乎沒有，因此常規(guī)育種技術(shù)難以有效培育抗黃萎病的陸地棉品種。轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展為棉花抗黃萎病育種提供了一條有效的途徑。
　　本研究擬將來源于哈茨木霉的內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因Ech42和外切幾丁質(zhì)酶Nag70，通過農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術(shù)轉(zhuǎn)入中棉所49中

2、，獲得轉(zhuǎn)基因植株，研究其對黃萎病病原菌的抗性。同時，為提高田間篩選的效率，選用抗草銨膦基因bar作為篩選基因，創(chuàng)制同時含有抗黃萎病基因和抗草胺磷基因的棉花新種質(zhì)。獲得的主要結(jié)果如下:
　　1.利用原載體pBIN（Ech42+Nag70）構(gòu)建出含有內(nèi)切幾丁質(zhì)酶基因Ech42和外切幾丁質(zhì)酶基因Nag70的雙價植物表達載體載體pCAMBIA（Ech42+Nag70）。
　　2.利用農(nóng)桿菌活體轉(zhuǎn)化技術(shù)將植物表達載體pCAMBIA（E

3、ch42+Nag70）導(dǎo)入棉花中，獲得了種子T0。用10mg/L的草銨膦對T0的幼苗進行篩選，獲得了轉(zhuǎn)基因候選植株，并通過對候選植株進行PCR和Southern blot檢測驗證，最終獲得了轉(zhuǎn)Ech42和Nag70基因的種質(zhì)系.
　　3.用大麗輪枝菌孢子懸浮液的接種試驗表明，轉(zhuǎn)基因植株的抗病性明顯高于對照植株;同時對轉(zhuǎn)基因棉花的外源胞壁降解酶活性的測定表明，轉(zhuǎn)基因棉花的內(nèi)、外幾丁質(zhì)酶的活性高于非轉(zhuǎn)基因植株。
　　4.獲得的轉(zhuǎn)