雙孢蘑菇栽培菌株As2796提純復(fù)壯的研究.pdf

1、雙孢蘑菇（Agaricus bisporus）栽培菌株在長期的繁殖和生產(chǎn)使用中，會(huì)由于自身變異和環(huán)境因素的影響而產(chǎn)生衰退。因此菌株的提純復(fù)壯對(duì)防止生產(chǎn)菌種在長期生產(chǎn)使用中原有優(yōu)良性能發(fā)生變異和生產(chǎn)性能出現(xiàn)衰退是十分必要的。此外，生產(chǎn)中還急需開發(fā)出鑒定菌種衰退程度的科學(xué)檢測方法。
　　 本研究以生產(chǎn)中普遍使用的雙孢蘑菇栽培菌株As2796作為提純復(fù)壯的出發(fā)菌株，利用原生質(zhì)體再生異核體分離、組織分離、菌絲尖端分離三種方法分離得到若干

2、分離株，經(jīng)過PDPY平板上的生長速度測定、麥粒種長速測定、糞草料試管中的長速測定、CMC酶相對(duì)活力的測定來進(jìn)行初篩，并將初篩菌株進(jìn)行栽培出菇試驗(yàn)，考察栽培菌株的農(nóng)藝性狀，包括菌蓋直徑、菌蓋厚度、菌柄直徑、菌柄長、單菇重、單位面積產(chǎn)量、栽培種滿瓶時(shí)間。采用灰色系統(tǒng)關(guān)聯(lián)度分析法并根據(jù)栽培管理時(shí)期的性狀，綜合評(píng)價(jià)復(fù)壯菌株的優(yōu)劣，選取與出發(fā)菌株關(guān)聯(lián)度最大的分離菌株確定為提純復(fù)壯菌株。菌株衰退程度與細(xì)胞凋亡速率有正相關(guān)性，因此選用細(xì)胞凋亡速率的檢

3、測來反映菌株衰退程度。對(duì)經(jīng)過不同處理得到的8個(gè)菌株進(jìn)行活性氧物質(zhì)含量檢測和染色質(zhì)片斷化檢測，以確定不同菌株的凋亡速率。凋亡速率越大，菌株衰退程度愈大。主要研究結(jié)果如下：
　　 三種分離方法得到的分離株中，吃料能力大于出發(fā)菌株As2796的有27株。栽培試驗(yàn)中，根據(jù)灰色關(guān)聯(lián)度大小得到20株優(yōu)于出發(fā)菌株的分離株，其中的P2、P28、T112、Tip8在產(chǎn)量、菇型等方面綜合表現(xiàn)最佳。出發(fā)菌株的菌蓋較薄，菌柄細(xì)長，產(chǎn)量為7.406 Kg

4、/㎡，與參考菌株（標(biāo)準(zhǔn)菌株）的關(guān)聯(lián)度為0.6230，在所有的初篩菌株中關(guān)聯(lián)序位于第21位。在原生質(zhì)體再生異核體分離株中P2、P28的綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)于其他的原生質(zhì)體分離株。P28不叢生，單菇較重且子實(shí)體圓整，產(chǎn)量為8.444 Kg/㎡，與參考菌株的關(guān)聯(lián)度為0.8192，在所有的初篩菌株中關(guān)聯(lián)序位于第1位。P2子實(shí)體菌蓋直徑較大，子實(shí)體硬實(shí)，產(chǎn)量為7.21 7Kg/㎡，與參考菌株的關(guān)聯(lián)度0.7731，在所有的初篩菌株中關(guān)聯(lián)序位于第2。在組織

5、分離株中T112綜合表現(xiàn)最好，平均單菇重最大，菇型圓整，產(chǎn)量為6.816 Kg/㎡，與參考菌株的關(guān)聯(lián)度為0.7277，關(guān)聯(lián)序位于第3位。在菌絲尖端分離株中，Tip8綜合表現(xiàn)最好，春季出菇較多，菌柄呈粗短的圓柱形，但是產(chǎn)量不高，僅位于18位，與參考菌株的關(guān)聯(lián)度為0.6685，關(guān)聯(lián)序位于第7位。因此，選取上述4個(gè)分離株P(guān)2、P28、T112、Tip8作為本研究得到的提純復(fù)壯菌株。
　　 通過活性氧物質(zhì)含量和染色質(zhì)片斷化兩方面的細(xì)胞凋

6、亡檢測發(fā)現(xiàn)，不同處理得到的菌株的衰退程度不同。受到高溫刺激的菌株的凋亡速率最大，在糞草料試管4℃保存的菌株的凋亡速率最小。菌絲尖端分離菌株的細(xì)胞凋亡速率大于原生質(zhì)體分離菌株的凋亡速率，大于組織分離菌株的凋亡速率。在4℃斜面長期保存的菌株的凋亡速率大于常溫下斜面保存并及時(shí)轉(zhuǎn)管的菌株的凋亡速率。
　　 綜合以上研究結(jié)果可以得出，原生質(zhì)體再生異核體分離、菌絲尖端分離、組織分離均有一定程度的提純復(fù)壯效果，其中原生質(zhì)體再生異核體分離方法的