辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建及其在CabZip2、CaLRR、CaP等候選基因RNAi載體遺傳轉(zhuǎn)化中的應用.pdf

1、辣椒（Capsicum annuum L）是我國乃至全世界廣泛栽培、十分重要的一種茄科蔬菜，其遺傳改良是生產(chǎn)中確保產(chǎn)量、品質(zhì)和效益的重要基礎。但是，常規(guī)的辣椒育種周期長、效率低，且容易導致栽培品種或組合遺傳背景日趨狹窄，難以滿足需要．而現(xiàn)代基因工程由于其可實現(xiàn)跨物種的基因交流，可實現(xiàn)作物性狀的定向遺傳改良而受到人們的高度重視，基因工程與常規(guī)育種的有機結(jié)合被認為是現(xiàn)代育種的有效手段．遺傳轉(zhuǎn)化體系是實現(xiàn)基因工程的重要基礎，同時也是植物功能基

2、因組學研究的重要手段。但是，當前辣椒轉(zhuǎn)基因體系還不完善，效率不高且存在明顯的基因型依賴性．本文研究建立了辣椒離體培養(yǎng)再生體系和農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化體系，應用該體系進行了幾個載體的遺傳轉(zhuǎn)化。主要結(jié)果如下： 1、辣椒離體再生體系的建立：14d左右的苗齡辣椒無菌苗的子葉和莖尖是組織培養(yǎng)的最佳外植體；建立以辣椒子葉和莖尖為外植體的叢生芽直接誘導體系，在分化培養(yǎng)基中，添加BA和NAA有利于叢生芽的誘導，但NAA過高則易產(chǎn)生根。添加OD600值為1．

3、1的PJ4ml/L的有利于辣椒的分化．本研究中最適合的誘導培養(yǎng)基為MS+ BA5mg/L+ NAA0．1mg/L+ AgNO34mg/L+ PJ4ml/L；不同基因型辣椒子葉和莖尖的叢生芽誘導率有顯著差異；0．5mg/L GA3有利于辣椒叢生芽的伸長，高于此濃度易產(chǎn)生畸形芽；通過篩選確定最佳辣椒生根培養(yǎng)基為：1/2 MS+ NAA0．1mg/L+ IAA0．1mg/L； 2、辣椒遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及應用：辣椒遺傳轉(zhuǎn)化試驗表明：辣

4、椒的卡那霉素致死濃度可以達到70mg/L；辣椒子葉遺傳轉(zhuǎn)化的最佳條件：辣椒子葉必須預培養(yǎng)2d左右，用含有AS濃度200μmol/L的OD600值約0．6的菌液濃度浸泡8min，共培養(yǎng)2d后進行洗菌，篩選培養(yǎng)；通過對比確定辣椒轉(zhuǎn)化體系中生根培養(yǎng)基中應添加頭孢霉素來抑制農(nóng)桿菌生長．應用所構(gòu)建的辣椒離體再生和農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化體系，對CabZip2、CaLRR、CaP等幾個RNAi載體進行了遺傳轉(zhuǎn)化，其中CabZip2載體獲得了8個轉(zhuǎn)化克隆