抗?fàn)倥８篂a益生菌株的篩選及其產(chǎn)芽孢和產(chǎn)抗菌蛋白條件優(yōu)化.pdf

1、從健康牛的糞便中篩選出對(duì)大腸桿菌(Escherichia coli)有較強(qiáng)抑制作用的芽孢桿菌，并對(duì)其進(jìn)行鑒定。以大腸桿菌為指示菌進(jìn)行初篩和復(fù)篩，采用SPSS軟件對(duì)復(fù)篩結(jié)果進(jìn)行顯著性分析，以選擇抑制大腸桿菌活性較強(qiáng)的菌株，經(jīng)過(guò)形態(tài)觀察、生理生化試驗(yàn)和16S rDNA全序列分析鑒定其種屬；采用稀釋活菌計(jì)數(shù)法測(cè)繪這些菌株的生長(zhǎng)曲線，利用SPSS軟件結(jié)合修正的Gompertz方程和Logistic方程對(duì)生長(zhǎng)曲線進(jìn)行擬合，以獲得這些菌株的生長(zhǎng)動(dòng)力

2、學(xué)參數(shù)。經(jīng)過(guò)鑒定，篩選得到的對(duì)大腸桿菌有較強(qiáng)抑制作用的4株牛源芽孢桿菌均屬于解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)；采用SPSS軟件擬合得到的生長(zhǎng)曲線的相關(guān)系數(shù)(R)在0.985以上。篩選并鑒定了4株牛源腸道益生菌；采用SPSS軟件可以較準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)這些菌株的生長(zhǎng)動(dòng)力學(xué)參數(shù)。 研究E.coli拮抗菌株Bacillus amyloliquefaciens BN-10菌株的最佳產(chǎn)芽孢條件，以提高其芽孢生

3、成率。采用單因素試驗(yàn)方法，選擇益生菌BN-10菌株的適宜碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽；采用正交試驗(yàn)方法，結(jié)合SPSS軟件進(jìn)行極差分析和一般線性模型分析，確定BN-10菌株的最適宜發(fā)酵培養(yǎng)基組成和最適宜發(fā)酵產(chǎn)芽孢條件。BN-10菌株產(chǎn)芽孢的最適宜培養(yǎng)基組成及發(fā)酵條件為：蔗糖1.5％，蛋白胨1.0％，MnSO40.05％，CaCl20.01％；培養(yǎng)基初始pH6.0，種齡12 h，接種量10％，裝瓶量30mL/250mL，搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1，

4、37℃發(fā)酵培養(yǎng)72 h。通過(guò)研究，獲得了BN-10菌株產(chǎn)芽孢的最佳培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件，優(yōu)化后BN-10菌株的芽孢生成率提高到98.70％，細(xì)菌數(shù)達(dá)到2.25×108cfu/mL。 對(duì)強(qiáng)烈抑制E.coli的牛源腸道益生菌Bacillus amyloliquefaciens BN-10菌株產(chǎn)抗菌蛋白的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。利用單因素分析法，分別考察碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽對(duì)BN-10菌株發(fā)酵產(chǎn)抗菌蛋白的影響；結(jié)合培養(yǎng)基組成正交試驗(yàn)和發(fā)酵條件

5、正交試驗(yàn)，利用SPSS軟件進(jìn)行極差分析和一般線性模型分析，考察培養(yǎng)基組成對(duì)發(fā)酵產(chǎn)抗菌蛋白的影響，確定適宜的發(fā)酵產(chǎn)蛋白條件。BN-10菌株產(chǎn)抗菌蛋白的最佳培養(yǎng)基和發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基組成為蔗糖含量2％，黃豆粕粉5％，ZnSO4含量0.01％，KCl含量0.02％；初始pH6.0，種子液按2％接種量接種至裝瓶量為30mL/250mL的三角瓶中，200 r·min-1，37℃培養(yǎng)24 h。優(yōu)化后，表征抗菌蛋白產(chǎn)量的抑菌圈面積增大了65.20％。