廣西巴馬小型豬手工體細(xì)胞核移植的初步研究.pdf

1、巴馬小型豬是我國廣西特有的小型豬種，其體格小，與人體器官很接近，是優(yōu)秀的醫(yī)學(xué)動物模型。手工核移植是在無透明帶核移植基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種不需昂貴儀器的新型核移植技術(shù)，目前該技術(shù)在國內(nèi)尚不成熟。以巴馬小型豬為對象來研究手工核移植技術(shù)，既可促進(jìn)該技術(shù)的發(fā)展，又可為巴馬小型豬的育種及在醫(yī)學(xué)模型中的應(yīng)用提供服務(wù)。
　　 本試驗研究共分三章，分別探討了供體細(xì)胞類型與傳代培養(yǎng)次數(shù)、去核方法與曲古菌素(TSA)處理對手工核移植胚胎發(fā)育的影響，此

2、外還探討了亮甲酚藍(lán)染色對孤雌激活胚胎和核移植胚胎發(fā)育的影響。主要結(jié)果如下：
　　 1．相同代數(shù)的巴馬小型豬耳部、腎臟和睪丸成纖維細(xì)胞對手工核移植胚胎發(fā)育的影響無顯著差異(P>0.05)；在重構(gòu)胚的囊胚率方面，三種供體細(xì)胞均在第八代時較高，但與其第四代和第十二代相比無顯著差異(P>0.05)。
　　 2．脫羰秋水仙堿(DM)化學(xué)輔助去核法與極體定向去核法在手工核移植胚胎的囊胚率之間無顯著差異(P>0.05)，極體定向去核法

3、重構(gòu)胚的分裂率高于脫羰秋水仙堿化學(xué)輔助去核法(71.9％ vs67.0％)，但差異不顯著(P>0.05)。用不同濃度的TSA處理豬手工核移植重構(gòu)胚，各濃度處理組隨后的發(fā)育率與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)，但濃度為40 nmol/L時效果較好(17.9％ vs9.4％)。
　　 3．用13μmo1/L的亮甲酚藍(lán)染色篩選卵母細(xì)胞，其陽性組的核成熟率(80.8％)顯著高于對照組(72.4％)和陰性組(44.2％)(P<0.0

4、5)；在孤雌胚的囊胚發(fā)育率方面，陽性組顯著高于陰性組(32.9％ vs10.1％，P<0.05)，但與對照組相比無顯著差異(32.9％ vs25.8％)(P>0.05):顯微操作核移植胚胎的囊胚率在陽性組與對照組之間無顯著差異(14.1％ vs10.6％)(P>0.05)，但二者的囊胚率均顯著高于陰性組(14.1％ vs3.45％，10.6％ vs3.45％)(P<0.05):手工核移植胚胎的發(fā)育率在各組之間無顯著差異(P>0.05)。