基于芯片雜交結(jié)果克隆疏葉駱駝刺、苦馬豆相關(guān)基因的研究.pdf

1、疏葉駱駝刺(Alhagi sparsifolia Shap.)是豆科駱駝刺屬(Alhagi Gagneb.)多年生草本植物，耐旱、耐鹽堿和抗?jié)硰?qiáng)，是干旱區(qū)的優(yōu)良牧草，也是很好的蜜源植物和藥用植物。苦馬豆[Swainsona salsula Taub.（Sphaerophy salsula（Pall.)DC.)]又名羊尿泡、馬尿泡，是多年生豆科苦馬豆屬植物，是耐鹽堿、抗?jié)硰?qiáng)的植物，具有改良土壤及抗癌調(diào)節(jié)免疫活性的作用。
　　 本實(shí)

2、驗(yàn)通過(guò)對(duì)疏葉駱駝刺、苦馬豆與截形苜蓿芯片雜交結(jié)果的分析，結(jié)合截形苜蓿生物信息學(xué)數(shù)據(jù)，從疏葉駱駝刺中篩選出非共生血紅蛋白nSHb和甲酸脫氫酶FDH兩個(gè)基因，從苦馬豆中篩選出異黃酮還原酶IFR基因。
　　 我們分別提取疏葉駱駝刺和苦馬豆的總RNA，利用oligo dT反轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后根據(jù)截型苜蓿GenBank中nSHb、FDH和IFR的cDNA序列設(shè)計(jì)引物，采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出三個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA序列，分別命名為Asn

3、SHb，AsFDH和StIFR。其中，AsnSHb基因長(zhǎng)度為483bp，編碼160個(gè)氨基酸；AsFDH長(zhǎng)度為1170bp，編碼389個(gè)氨基酸；StIFR長(zhǎng)度為957bp，編碼318個(gè)氨基酸，通過(guò)與苜蓿序列的同源性比較，發(fā)現(xiàn)基因序列的同源性分別為92.50%、89.41%和81.82%，翻譯蛋白的同源性分別為91.51%、92.03%和83.39%。并且構(gòu)建了表達(dá)載體，通過(guò)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的方法將這三個(gè)基因分別轉(zhuǎn)到煙草和擬南芥中，為進(jìn)一步驗(yàn)證n