家蠶CREB在環(huán)境誘導(dǎo)卵滯育中的作用.pdf

1、CREB(cAMP response element binding)蛋白是最早被鑒定的轉(zhuǎn)錄因子之一，屬于bZIP(basic leucinezipper)蛋白家族，包括能與DNA上的CRE元件結(jié)合的結(jié)構(gòu)域、促進(jìn)CREB蛋白形成二聚體的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域以及磷酸化的KID轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域。許多磷酸化的信號通路（如PKA、MAPK、PKC和CaMK等）參與CREB的磷酸化，增加了CREB對刺激反應(yīng)的多樣性。CREB還可以通過選擇性剪接產(chǎn)生不同

2、的剪接體，啟動不同的基因轉(zhuǎn)錄。學(xué)習(xí)記憶分子機(jī)制的研究表明CREB蛋白在長時程記憶形成中起重要作用。
　　 環(huán)境條件調(diào)控家蠶二化性品種卵滯育的現(xiàn)象強(qiáng)烈地提示，家蠶卵滯育的形成存在腦對環(huán)境信號的接收、長時程記憶的過程。對此，我們從家蠶腦中克隆了家蠶CREB(BmCREB)基因，定量PCR結(jié)果表明，二化性家蠶（大造）滯育系與非滯育系的腦中Bm CREB基因的表達(dá)量有明顯的差異。為了進(jìn)一步闡明Bm CREB在環(huán)境誘導(dǎo)家蠶卵滯育中的作用，

3、本研究對胚胎發(fā)育過程Bm CREB蛋白和基因以及不同組織中Bm CREB的表達(dá)進(jìn)行了研究。
　　 利用CREB抗體，用Western blot方法在胚胎期檢測到分子量分別為34KD和28KD2個條帶，與前期克隆的Bm CREB1/3和BmCREB2剪接體對應(yīng)，特別是高溫(25℃)光照(LW)條件下發(fā)育后期的胚胎BmCREB2蛋白表達(dá)量明顯地比低溫(i5℃)黑暗(DC)高。用磷酸化CREB(p-CREB)抗體，在胚胎期只檢測到Bm

4、CREB1，而且LW胚胎的p- BmCREB1/3含量比DC的高。不同化性家蠶胚胎的CREB蛋白的Western blot結(jié)果表明，34KD條帶在一化、二化和多化中都存在，28KD條帶在一化(3009)和二化（大造）中存在，但大造的量比3009高，而多化品種（Nistari）沒有檢測到。對于Bm CREB蛋白在五齡幼蟲脂肪體、腸、馬氏管、絲腺和卵巢中的Western blot結(jié)果表明，它們都只有一個34KD蛋白表達(dá)，而蛹腦中34KD和2

5、8KD兩個剪接體都有表達(dá)。同時用PCR的方法檢測了家蠶CREB4個剪接(BmCREB1、BmCREB2、BmCREB3和BmCREBN)在基因水平上的表達(dá)，結(jié)果表明這4個剪接體在家蠶不用組織以及不同化性胚胎中都有表達(dá)，Bm CREB1/3和BmCREB2表達(dá)量沒有差異，BmCREBN的表達(dá)量都很低。這些結(jié)果表明，Bm CREB1/3無論在基因水平還是在蛋白水平都有表達(dá)，而BmCREB2在基因水平也都有表達(dá)，但蛋白水平主要在神經(jīng)組織中表達(dá)