油菜黃化突變體葉綠體發(fā)育特性研究.pdf

1、該論文以油菜黃化突變體Cr3529為材料,研究了不同生長(zhǎng)時(shí)期不同器官的基因表達(dá)、色素蛋白含量、葉綠素光譜吸收、LHCII的蛋白含量及組成、類囊體膜的室溫?zé)晒夤庾V、CD譜、DCIP活性和多聚核糖體等.首先,分析了葉綠體重要外被膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Toc33/Toc34的表達(dá).通過蔗糖梯度和差速離心制備生長(zhǎng)60天的油菜突變體及其野生型的葉綠體被膜,利用SDS變性膠分離葉綠體被膜蛋白,以擬南芥Toc33蛋白抗體免疫印跡分析Toc33/34蛋白含量的變化

2、,結(jié)果顯示:無論是在野生型還是突變體油菜被膜中僅能檢測(cè)到Toc33,并且在二者中的表達(dá)差異并不明顯,僅在突變體中有很少的增加.以我們自己克隆得到的油菜Toc33基因?yàn)樘结?檢測(cè)了突變體及野生型油菜下胚軸和子葉中Toc33 mRNA水平上的差異.第二,分析了突變體與野生型油菜生長(zhǎng)30天的幼苗不同器官全蛋白和葉綠素的含量,結(jié)果顯示:(1)突變體幼苗中全蛋白與葉綠素含量都減少,360-720nm光譜吸收也顯示突變體中吸收峰值降低,以相同鮮重上

3、樣SDS-PAGE分析結(jié)果與蛋白定量分析一致,相同鮮重突變體全蛋白含量較低:(2)突變體油菜具有較高的chla/chlb比值,但在不同器官存在差異:子葉中增加30﹪,下胚軸中增加20﹪;(3)相同鮮重上樣,突變體全蛋白中LHCII含量在子葉和下胚軸都降低,但以相同蛋白計(jì),突變體下胚軸中LHCII含量明顯高于其在野生型中的含量;(4)林可霉素處理3-6小時(shí)導(dǎo)致chl含量在野生型油菜子葉中降低,突變體子葉中相反,chla和chlb也呈現(xiàn)出相

4、同的變化趨勢(shì),chla/chlb在突變體中增加,在野生型中先(3h)升高又降至(6h)低于未用林可霉素處理的水平.我們推測(cè)突變體中chla向chlb的轉(zhuǎn)化效率降低,導(dǎo)致chlb的含量下降,進(jìn)而導(dǎo)致chlb結(jié)合蛋白迅速降解而使積累水平降低.第三,借助于葉綠素光譜吸收、室溫?zé)晒夤庾V、SDS-PAGE、LHCII的Western印跡、CD譜和DCIP活性測(cè)定等方法,對(duì)突變體與野生型油菜不同生長(zhǎng)時(shí)期幼苗類囊體膜進(jìn)行了分析.第四,突變體與野生型油