接種抗原后歐洲鰻鱺免疫組織形態(tài)學(xué)變化及抗體產(chǎn)生細(xì)胞分析.pdf

1、歐洲鰻鱺是我國(guó)最主要的鰻鱺養(yǎng)殖品種。自引進(jìn)中國(guó)后,養(yǎng)殖規(guī)模和密度不斷擴(kuò)大,隨之,日漸多發(fā)的病害嚴(yán)重影響了養(yǎng)殖效益。為了探知?dú)W洲鰻鱺的免疫生物學(xué)特點(diǎn),本研究結(jié)合組織形態(tài)學(xué)觀察和ELISPOT方法,以嗜水氣單胞菌-MOMPISCOMs疫苗作為抗原接種歐洲鰻鱺,分析免疫器官組織形態(tài)學(xué)變化和抗體產(chǎn)生細(xì)胞(Antibody Secreting Cell,ASC)增殖情況,同時(shí)了解血清中非特異性免疫物質(zhì)的變化規(guī)律。研究結(jié)果如下:
　　 1.

2、嗜水氣單胞菌-MOMP的提取及ISCOMs的制備:根據(jù)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的嗜水氣單胞菌-MOMP提取方法進(jìn)行優(yōu)化,采用SDS-PAGE對(duì)所提取的產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析,同時(shí)利用透射電鏡對(duì)制備的ISCOMs進(jìn)行觀察,確定該方法可以成功制各嗜水氣單胞菌-MOMPISCOMs抗原。
　　 2.接種抗原后歐洲鰻鱺免疫器官組織形態(tài)學(xué)變化觀察:①接種后脾臟僅出現(xiàn)白髓增殖現(xiàn)象,未見(jiàn)其他明顯病理癥狀。②腸道結(jié)構(gòu)良好,絨毛整齊。③抗原經(jīng)過(guò)口服和腹腔注射接種后歐

3、洲鰻鱺腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量變化規(guī)律不同?？诜臃N組表現(xiàn)為:前、中腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量均先下降后上升,第21d達(dá)到實(shí)驗(yàn)期峰值(P＜0.01);后腸接種第7d小幅上升后持續(xù)下降。注射接種組表現(xiàn)為:前、中、后腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量在第一次接種后略微上升,第7d下降至低于對(duì)照組;二次接種后淋巴細(xì)胞數(shù)量再次增加,第14d達(dá)到峰值后下降(P＜0.01),而后腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量在第21d維持較高水平(P＜0.01)。④口服和腹腔注射接種ISCOMs抗

4、原后歐洲鰻鱺腸上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞數(shù)量總體上增加。口服接種組腸道上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞均表現(xiàn)為先下降后達(dá)到峰值,前腸上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞在第14d達(dá)到峰值(P＜0.01),中腸在第21d達(dá)到峰值(P＜0.01),后腸則在第7d達(dá)到峰值(P＜0.01)。注射組表現(xiàn)為接種后第1d前、中腸上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01),后腸顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);經(jīng)過(guò)二次注射接種,第14d前、中、后腸上皮內(nèi)杯狀細(xì)胞均和對(duì)照組差異均極顯著(P＜0.01)。

5、
　　 3.接種抗原后歐洲鰻鱺.ASC的增殖規(guī)律:①口服和注射接種后歐洲鰻鱺腎臟中分離的細(xì)胞數(shù)量均有增加。口服組腎臟中ASC和特異性ASC第14d都極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01),第28d都顯著高于對(duì)照組(P＜0.05);注射組第14d腎臟中ASC維持正常水平(P＞0.05),特異性ASC顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),第28d腎臟ASC和特異性ASC都極顯著高于對(duì)照水平(P＜0.01)。②口服接種后皮膚中分離的細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增

6、長(zhǎng);而注射組先增長(zhǎng),第28d降至正常。口服接種至第14、28d皮膚中ASC都極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01);皮膚中特異性ASC在第14d顯著高于對(duì)照組(P＜0.05),第28d恢復(fù)正常(P＞0.05)。注射組皮膚中ASC和特異性ASC在第14d極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01),第28d顯著高于對(duì)照組水平(P＜0.05)。
　　 4.接種抗原后歐洲鰻鱺血清中非特異性免疫指標(biāo)消長(zhǎng)情況:口服和注射接種后歐洲鰻鱺血清中溶菌酶、轉(zhuǎn)鐵蛋白

7、(Tf)和堿性磷酸酶(ALP)的含量均得到提高,且注射接種后血清中干擾素(IFN)含量也上升;同時(shí)檢測(cè)到血清中產(chǎn)生特異性抗體。
　　 綜上所述,嗜水氣單胞菌-MOMPISCOMs疫苗副作用較小,使用安全?？诜妥⑸浣臃N均能不同程度影響歐洲鰻鱺腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)量,誘導(dǎo)局部免疫應(yīng)答反應(yīng);提高皮膚和腎臟中的淋巴細(xì)胞數(shù)量、ASC和特異性ASC數(shù)量,刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫保護(hù),同時(shí)魚(yú)體非特異性免疫能力得到增強(qiáng)。研究結(jié)果進(jìn)一步闡明了