牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗病家系的選育及抗病相關(guān)微衛(wèi)星標(biāo)記篩選.pdf

1、牙鲆是我國(guó)海水養(yǎng)殖的重要經(jīng)濟(jì)魚類之一，由于其體大味美，適于沿海養(yǎng)殖等特點(diǎn)，市場(chǎng)十分廣闊，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高，從上世紀(jì)90年代開始，我國(guó)牙鲆養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展。然而，近年來由于野生牙鲆資源匱乏、親魚來源單一等情況，造成牙鲆苗種出現(xiàn)成活率低、生長(zhǎng)慢、抗病力差等現(xiàn)象。培育生長(zhǎng)快、抗病力強(qiáng)的牙鲆新品種是解決牙鲆養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的根本途徑。2003年通過自然選擇和人工感染本地牙鲆的方法獲得抗鰻弧菌病牙鲆群體，即選育一代；2003年引進(jìn)日本牙鲆群體進(jìn)行培

2、育；并將從黃海海域捕撈的黃海野生牙鲆群體作為黃海基礎(chǔ)群體。2007年和2008年，利用以上三個(gè)群體作為基礎(chǔ)群體建立家系，篩選出一些生長(zhǎng)快和抗病力強(qiáng)的家系，即選育二代。2008年引進(jìn)韓國(guó)牙鲆群體作為基礎(chǔ)群體的補(bǔ)充。
　　 2009年利用選育一代抗病群體(SS-1)、2007年從牙鲆家系中篩選的選育二代家系群體(SS-2)，以及從日本和韓國(guó)引進(jìn)的牙鲆群體作為親本，通過各種組合的交配及雌核發(fā)育，建立牙鲆家系43個(gè)。對(duì)其中33個(gè)家系進(jìn)行

3、鰻弧菌感染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：在抗病性能上，感染家系與對(duì)照組相比，其中兩個(gè)差異極其顯著(P＜0.01)，三個(gè)差異顯著(P＜o(jì).05)。通過優(yōu)勢(shì)比分析發(fā)現(xiàn)，有四個(gè)家系的存活率是對(duì)照組的十倍以上，其中兩個(gè)是選育二代抗病家系(SS-2R)的后代。SS-2R的雌核發(fā)育和全同胞近交家系組合，即選育三代抗病家系(SS-3R)與親本一方為SS-2R的組合、所有家系組合及三元雜交家系組合在存活率上都存在顯著差異(P＜0.05)，與親本之一為韓國(guó)牙鲆的家系組

4、合差異極其顯著(P＜0.01)。研究發(fā)現(xiàn)SS-3R性能良好，可以用于抗病純系的建立和抗病牙鲆新品種的培育。
　　 為了分析后代的遺傳多樣性，應(yīng)用10對(duì)微衛(wèi)星引物對(duì)2007年建立抗病家系之一(將其定義為親本家系)及其回交家系和全同胞近交家系進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)10個(gè)位點(diǎn)的等位基因?yàn)?.667～3.000，平均等位基因?yàn)?.3，有效等位基因?yàn)?.5532～2.8878，平均有效等位基因?yàn)?.0541，雜合度觀測(cè)值為0.3070～0.6

5、648，平均雜合度觀測(cè)值為0.4870，無偏期望雜合度值為0.2000～0.6068，平均無偏期望雜合度值為0.6068，多態(tài)信息含量為0.2334～0.5794，平均多態(tài)信息含量為0.3995，三個(gè)家系均為中度多態(tài)，多態(tài)信息含量從大到小依次為：親本家系、回交家系、全同胞近交家系，其中Poli194TUF位點(diǎn)在全同胞近交家系中發(fā)生純合。家系間的
　　 為了篩選抗病相關(guān)標(biāo)記，對(duì)2009年建立的102號(hào)家系的感染材料進(jìn)行全基因組微衛(wèi)

6、星掃描，從牙鲆連鎖圖譜上隨機(jī)選取78個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行篩選，最終得到39個(gè)多態(tài)、穩(wěn)定的位點(diǎn)，分布在18個(gè)連鎖群上，多態(tài)位點(diǎn)最多的連鎖群為6、7、15、16號(hào)連鎖群，均為4個(gè)位點(diǎn)，應(yīng)用這39個(gè)位點(diǎn)對(duì)根據(jù)存活時(shí)間而劃分的四組牙鲆進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Kop19位點(diǎn)有兩個(gè)基因型，分別為189/189，189/199，存活時(shí)間越長(zhǎng)的小組，189/199的比例越低，最先死亡組的比例是存活組的2.89倍，初步認(rèn)為Kop19位點(diǎn)與牙鲆抗鰻弧菌病相關(guān)，通過連