廣西巖溶地區(qū)煙草黑脛病拮抗細(xì)菌的篩選與特性研究.pdf

1、煙草黑脛病是桂西巖溶區(qū)煙草的主重病害,目前以化學(xué)防治為主,農(nóng)藥殘留污染環(huán)境、危害人畜健康并使病原產(chǎn)生耐藥性。生物防治具有無污染、無公害和長效性等優(yōu)點(diǎn),是今后煙草病害防治的主要方法。因此,本研究從廣西巖溶區(qū)靖西縣優(yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)區(qū)分離煙草黑脛病病原及土壤細(xì)菌,通過拮抗試驗(yàn)、抗病能力測試等方法篩選拮抗菌株,對(duì)效果良好的株系再進(jìn)行分類鑒定、抗病物質(zhì)分析、小規(guī)模發(fā)酵和田間施用技術(shù)等研究,結(jié)果如下:1.從8份土壤樣品中分離獲得462株細(xì)菌,其中82株

2、對(duì)煙草黑脛病菌有拮抗效果;復(fù)篩后得到拮抗效果較好的細(xì)菌16株;再依據(jù)抑菌圈大小、盆栽實(shí)驗(yàn)結(jié)果,獲得拮抗效果良好的拮抗菌3株,編號(hào)為8-23、6-70和13。2.采用形態(tài)觀察、生理生化測定、16S rDNA序列分析三種方法相結(jié)合,鑒定8-23、6-70和13三個(gè)菌株的種屬關(guān)系。結(jié)果表明,菌株8-23為芽孢桿菌屬(Bacillus spp.)枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis的近緣種;菌株6-70可能為溶菌桿屬(Lysobact

3、er spp.)細(xì)菌;菌株13為假單胞桿菌屬(Pseudomonas spp.)細(xì)菌。3.三個(gè)拮抗細(xì)菌的基本發(fā)酵工藝:(1)菌株8-23:種子菌齡12 h,接種量1％;在pH6.0馬鈴薯麥芽糖培養(yǎng)液、90/200 ml(培養(yǎng)基體積/三角瓶容積,以下相同)、30℃、180 rpm條件下培養(yǎng)24 h。(2)菌株6-70:種子菌齡12 h,接種量1%,在pH6.0馬鈴薯麥芽糖培養(yǎng)液、30/200 ml、30℃、180 rpm條件下培養(yǎng)24 h

4、。(3)菌株13:種子菌齡12 h,接種量1%,在pH6.0馬鈴薯麥芽糖培養(yǎng)液、30/200 ml、30℃、240 rpm條件下培養(yǎng)24 h。4.三個(gè)拮抗細(xì)菌的抗病機(jī)制及其抗病物質(zhì)特性:菌株8-23、6-70、13的抗病機(jī)制都是通過溶解細(xì)胞壁、使細(xì)胞質(zhì)滲漏、破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能,從而達(dá)到抑菌抗病的目的。其抑菌物質(zhì)的基本特性如下:(1)菌株8-23的抑菌成分大部分為耐高溫蛋白質(zhì),對(duì)有機(jī)溶劑敏感,(NH4)2SO4鹽析沉淀物有抑菌活性;(2)