基于meq基因的MDV感染PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用研究.pdf

1、馬立克氏病(Marek's Disease，MD)是由馬立克氏病病毒(Marek'sDisease Virus，MDV)引起的一種雞的惡性淋巴細(xì)胞增生性腫瘤疾病，具有高度接觸傳染性，可在各種內(nèi)臟器官、皮膚等多處誘發(fā)廣泛性淋巴細(xì)胞增生性腫瘤。感染后大量淋巴細(xì)胞發(fā)生損傷和轉(zhuǎn)化，引起雞體持續(xù)性免疫抑制、導(dǎo)致患病雞群原發(fā)或繼發(fā)感染引起的死淘率升高。隨著MD毒株毒力不斷增強(qiáng)，通過(guò)疫苗免疫已不能為商業(yè)雞群提供完全保護(hù)力，給目前養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)巨大的損失。

2、一般在生產(chǎn)上使用基于疫苗株與野毒株132-bpr基因拷貝數(shù)差異而建立的多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測(cè)方法進(jìn)行MDV感染快速診斷，但由于疫苗免疫、個(gè)體差異和不同毒株的體內(nèi)復(fù)制能力不同等因素共同作用，造成檢出率偏低，診斷準(zhǔn)確性不足，本試驗(yàn)旨在建立一種更為準(zhǔn)確的MDV感染PCR檢測(cè)方法。
　　 meq基因作為MDV特有的致瘤相關(guān)基因，在不同毒株間的序列保守性較高，而且其能在感染細(xì)胞和轉(zhuǎn)化腫瘤組織細(xì)胞中高度表達(dá)。因此，本研究基于其上述特點(diǎn)

3、，將其確定為建立的PCR檢測(cè)方法的靶基因，通過(guò)生物軟件設(shè)計(jì)出一對(duì)擴(kuò)增其部分保守序列的引物，建立起一種用于快速診斷MDV感染的PCR檢測(cè)方法。隨后，將所建立方法與其他檢測(cè)MDV感染的PCR方法即實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)方法和132-bpr檢測(cè)方法，對(duì)強(qiáng)毒株攻毒試驗(yàn)中采集的140份組織臟器樣品進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比試驗(yàn)。
　　 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)方法雖然具有最高的檢測(cè)準(zhǔn)確性，但是其儀器與試劑價(jià)格昂貴，造成檢測(cè)成本過(guò)高，不適合于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)應(yīng)用。