壬基酚對中華絨螯蟹(Eriocheir sinensis)的免疫毒性及雌激素效應(yīng)研究.pdf

1、中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）又名河蟹,是我國極為重要的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動物。隨養(yǎng)殖規(guī)模的擴(kuò)大,中華絨螯蟹病害也隨之加劇,給養(yǎng)殖業(yè)造成了極大經(jīng)濟(jì)損失。自身的免疫能力下降、病原體增加以及其生存水環(huán)境污染是導(dǎo)致河蟹疾病的三大主要原因。其中環(huán)境因素起著重要作用,不僅影響甲殼動物機(jī)體抗病能力同時也導(dǎo)致病原生物的大量繁殖。
　　 對甲殼動物來說,水體污染物引起的環(huán)境壓力是其免疫力下降的一個重要原因。甲殼動物機(jī)體變化或患病率的上

2、升可以作為環(huán)境壓力的標(biāo)志。目前對中華絨螯蟹的環(huán)境脅迫研究主要集中在氨氮,溫度,pH值,重金屬離子等環(huán)境因子方面,有關(guān)壬基酚(NP)等環(huán)境內(nèi)分泌干擾化學(xué)物質(zhì)對河蟹的毒性作用的研究未見報道。NP是一種常見的、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的,并且容易在生物體內(nèi)積累的污染物。隨著工業(yè)的發(fā)展,污染加劇,我國長江流域水體和沉積物中發(fā)現(xiàn)了NP的存在。目前已有大量研究證實NP可對生物體產(chǎn)生的不良作用:包括對內(nèi)分泌、生殖和發(fā)育、致癌、免疫等方面。中華絨螯蟹的生存環(huán)境也受

3、到NP的威脅,因此,有必要探索NP對水產(chǎn)養(yǎng)殖蝦蟹類的脅迫效應(yīng),為建立相應(yīng)的評價體系提供理論指導(dǎo)。
　　 本研究借助免疫檢測技術(shù)和分子生物學(xué)手段,通過對免疫相關(guān)酶活性的測定,對血細(xì)胞密度(THC)、酚氧化酶激活系統(tǒng)(proPO、PPAF)、抗菌肽(crustin)、抗氧化酶系統(tǒng)(SOD、CAT、GPX)等免疫相關(guān)基因表達(dá)量以及卵黃蛋白原(VTG)的變化的檢測,分別從細(xì)胞和分子水平檢測腹腔注射NP對中華絨螯蟹的免疫毒性及雌激素效應(yīng),

4、為NP對中華絨螯蟹作用的研究豐富資料。
　　 主要研究結(jié)果如下:
　　 l、NP暴露lOd后,中華絨螯蟹總血淋巴細(xì)胞THC密度下降,且與NP的劑量(10mk/kg～1000mg/kg)呈反比線性關(guān)系。在本實驗的中劑量300mg/kgNP進(jìn)行的時間效應(yīng)實驗中,中華絨螯蟹THC密度在腹腔注射暴露后的3d內(nèi)呈下降；暴露6d后,血細(xì)胞數(shù)回升,此后血細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)明顯的回升,并在第14d接近對照組。
　　 2、較低劑量(≤10

5、0mg/kg) NP可提高中華絨螯蟹血細(xì)胞ProPO和PPAF基因的表達(dá)量,但是高于此濃度時,誘導(dǎo)效應(yīng)反而下降。NP對中華絨螯蟹ProPO和PPAF基因表達(dá)的誘導(dǎo)具有時間效應(yīng),注射后6d內(nèi)表達(dá)量一路上調(diào),其后回落。
　　 3、低劑量的NP同樣可以使中華絨螯蟹血淋巴細(xì)胞抗菌肽甲殼素crustin mRNA表達(dá)的上調(diào)。經(jīng)低劑量NP預(yù)暴露Id的中華絨螯蟹,感染嗜水汽單胞菌時血淋巴細(xì)胞中crustin的表達(dá)量遠(yuǎn)高于未預(yù)暴露組,但是NP暴

6、露14d后的個體,受細(xì)菌感染時血淋巴細(xì)胞中crustin的表達(dá)量低于未感染組,顯示出短時間免疫應(yīng)激效應(yīng)。
　　 4、中華絨螯蟹肝胰腺超氧化物歧化酶SOD、過氧化氫酶CAT和過氧化物酶GPX對NP暴露的感應(yīng)靈敏。最低劑量(10mg/kg)的NP即可誘導(dǎo)酶活性的升高,并且有明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。NP對中華絨螯蟹抗氧化酶類的作用是雙向的,即較低劑量的NP暴露可以顯著提高酶的活性,并誘導(dǎo)抗氧化酶基因的表達(dá),而較高劑量組暴露反而使得酶活性顯

7、著低于對照組,表現(xiàn)為抑制效應(yīng)。此外,NP對中華絨螯蟹的毒性作用有時間變化過程,即呈現(xiàn)先緩慢上升,后下降的過程。
　　 5、NP對中華絨螯蟹也有雌激素效應(yīng)。不僅可提高雌蟹肝胰腺中卵黃蛋白原基因的表達(dá)水平,也可誘導(dǎo)雄性中華絨螯蟹肝胰腺VTG基因的表達(dá)。10mg/kg劑量組NP暴露就檢測到了VTG基因的表達(dá)量的升高,500mg/kg表達(dá)量達(dá)到最大值。
　　 綜合分析各項實驗結(jié)果可知,低劑量的NP可刺激中華絨螯蟹產(chǎn)生免疫應(yīng)激反應(yīng)