基于金龜子綠僵菌和低劑量撲虱靈協(xié)同作用的稻飛虱防治替代策略研究.pdf

1、稻飛虱屬于同翅目(Homoptera)飛虱科(Delphacidae)，系水稻主要害蟲，分布廣，繁殖力強(qiáng)，嚴(yán)重威脅著水稻生產(chǎn)。長期以來，稻飛虱依賴于化學(xué)防治，抗藥性問題十分突出，研究探索稻飛虱微生物防治的新技術(shù)是一項(xiàng)重大挑戰(zhàn)。昆蟲病原真菌在害蟲生物防治中已被廣泛研究和應(yīng)用，但針對(duì)稻飛虱的研究報(bào)道十分有限，并一直存在菌劑殺蟲效果滯后及不穩(wěn)定等問題。本研究從建立金龜子綠僵菌(Metarhizium anisopliae)對(duì)稻飛虱毒力的定量評(píng)

2、價(jià)技術(shù)體系入手，以褐飛虱(Nilaparvata lugens)為靶標(biāo)，篩選獲得了對(duì)褐飛虱三齡若蟲高毒力的菌株，揭示了真菌感染對(duì)褐飛虱生殖力的影響，評(píng)價(jià)了基于當(dāng)選菌株的孢子懸乳劑與低劑量噻嗪酮對(duì)褐飛虱的協(xié)同作用效果，并以優(yōu)化的菌藥互作劑量進(jìn)行了稻飛虱的田間藥效試驗(yàn)。主要內(nèi)容和結(jié)果分述如下：
　　 防治褐飛虱的高毒力菌株篩選研究建立了綠僵菌(Metarhizium spp.)對(duì)褐飛虱若蟲的定量評(píng)價(jià)技術(shù)體系，比較測(cè)定了不同地理和寄主

3、來源的35株綠僵菌對(duì)褐飛虱三齡若蟲的毒力。用0.02％吐溫80的無菌水將各菌株孢子粉配制成1×108個(gè)孢子/mL的高濃度懸液，以只加0.02％吐溫80作為對(duì)照，三次重復(fù)，噴霧接種杯栽稻苗上的三齡若蟲，孢子沉降量為706-1496個(gè)孢子/mm2，因菌株而異。若蟲接種后在25℃和14L:10D條件下飼養(yǎng)，連續(xù)10天逐日定時(shí)觀察記錄死亡率，病死蟲尸保濕培養(yǎng)確定顯癥率。所試菌株中只有金龜子綠僵菌Ma456和Ma576誘發(fā)若蟲50％以上的校正死亡

4、率。繼之，用Ma456和Ma576的3個(gè)梯度孢子濃度(19-29、118-164及978-1088個(gè)孢子/mm2)對(duì)杯栽稻苗上的三齡若蟲進(jìn)行噴霧接種，以0.02％吐溫80作為對(duì)照，每個(gè)劑量處理重復(fù)4次。所獲生測(cè)數(shù)據(jù)經(jīng)時(shí)間一劑量一死亡模型模擬分析，Ma456和Ma576接種后第7天的LC50及其95％置信區(qū)間分別為731(405-1319)和1124(546-2311)個(gè)孢子/mm2，第10天下降為284(172-472)和306(188

5、-498)個(gè)孢子/mm2，說明二者都是可用于褐飛虱生物防治的潛力菌株。
　　 金龜子綠僵菌對(duì)褐飛虱生殖力及壽命的影響以Ma456的l×108個(gè)孢子/mL高濃度孢子懸液噴霧接種褐飛虱短翅型成蟲，以0.02％吐溫80作為對(duì)照，評(píng)價(jià)真菌感染對(duì)褐飛虱生殖力的影響。接種后，將雌雄成蟲配對(duì)，單對(duì)轉(zhuǎn)移到兩頭通玻璃管(直徑3Cm，高25cm)內(nèi)的分蘗期單株稻苗上，用飽含水稻營養(yǎng)液的脫脂棉包稻苗根部封住管一端，另一端用網(wǎng)紗封住，置于25℃和14L

6、:10D條件下飼養(yǎng)。處理和對(duì)照重復(fù)30次（每對(duì)成蟲為一個(gè)重復(fù)），逐日檢查并更換新鮮稻苗，直至成蟲死亡并記錄死亡時(shí)間。每日換下的稻苗置于上述相同條件下每天觀察若蟲孵化數(shù)，同時(shí)移除所有若蟲；連續(xù)3天檢查無若蟲孵出，稻株在解剖鏡下解剖，記錄未孵化卵粒數(shù)，由此統(tǒng)計(jì)每雌蟲產(chǎn)卵量和卵孵化率。結(jié)果表明，受金龜子綠僵菌侵染后，成蟲壽命縮短約55％，短翅雌成蟲的平均產(chǎn)卵量與對(duì)照組相比減少71％，孵化率降低36％，兩者共同作用使褐飛虱生殖力下降81.4％，

7、即接種處理的褐飛虱實(shí)際產(chǎn)若蟲117頭/雌，大大低于對(duì)照的595頭/雌。
　　 孢子懸乳劑與低劑量噻嗪酮對(duì)褐飛虱的協(xié)同作用評(píng)價(jià)以Ma456孢子懸乳劑的低、中、高稀釋液濃度(2×106、2×107和2×108個(gè)孢子/mL)分別與低濃度噻嗪酮(0、10、20、30和40ug AI/mL)對(duì)褐飛虱進(jìn)行協(xié)同互作的5個(gè)生物測(cè)定（生測(cè)1～5），生測(cè)6以不含孢子的載體乳油100倍稀釋液添加100和200ug/mL噻嗪酮測(cè)定純藥對(duì)褐飛虱的致死作用

8、。每個(gè)互作處理重復(fù)4次，每個(gè)重復(fù)包括約30頭3齡若蟲。對(duì)生測(cè)1～5的觀察數(shù)據(jù)進(jìn)行時(shí)間一劑量一死亡模型模擬分析，基本結(jié)果有以下幾個(gè)方面。一是Ma456孢子懸乳劑對(duì)褐飛虱的致死作用優(yōu)于未劑型化孢子粉的水懸液。按孢子懸乳劑稀釋液中添加噻嗪酮10、20、30和40ug AI/mL能大幅增強(qiáng)菌劑對(duì)褐飛虱的致死作用，生測(cè)1-5接種后第10天的LC50分別為199、92、96、76和27個(gè)孢子/m,m2，說明菌藥混用的協(xié)同增效作用顯著，尤以孢子懸乳劑

9、稀釋液中添加噻嗪酮40ug AI/mL的互作最佳，LC50值最?。?br>　　 孢子懸乳劑與低劑量噻嗪酮混用對(duì)稻飛虱的田間防效基于以上室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)金龜子綠僵菌Ma456和Ma576的孢子懸乳劑(1×1010個(gè)孢子/mL)于2008年8-9月在浙江金華兩塊單季晚稻田（試驗(yàn)1和試驗(yàn)2）進(jìn)行同低劑量噻嗪酮混用的田間藥效試驗(yàn)，考查純菌劑、純藥劑及菌藥混用各處理對(duì)稻飛虱的田間防效。試驗(yàn)1和試驗(yàn)2均包括7個(gè)處理，即4個(gè)用菌處理、1個(gè)純用藥對(duì)照

10、(藥液含噻嗪酮40μg/mL)、1個(gè)純?nèi)橛蛯?duì)照和1個(gè)清水對(duì)照。4個(gè)菌劑處理分別為2個(gè)純菌處理和2個(gè)菌藥混用處理。每處理小區(qū)(13×3 m)重復(fù)3次，各處理隨機(jī)區(qū)組分布。菌劑用水稀釋500倍，采用背負(fù)式機(jī)動(dòng)彌霧器，按769 L/ha的用液量進(jìn)行機(jī)動(dòng)彌霧，間隔2周用菌1次，共用菌3次，用菌量為1.54×1013個(gè)孢子/ha;噻嗪酮用量為30.8gAI/ha，相當(dāng)于常規(guī)推薦用藥量的1/5。試驗(yàn)1與試驗(yàn)2的初始蟲口密度分別為12.7和12.8頭

11、/樣點(diǎn)。首次噴霧后的一周為卵孵化高峰，并受持續(xù)高溫影響而效果不理想。除第一次抽樣調(diào)查的結(jié)果外，兩個(gè)試驗(yàn)每周歷次抽樣調(diào)查的平均相對(duì)防效，在試驗(yàn)l和試驗(yàn)2中純菌Ma456處理分別為61％和65％，Ma576分別為47％和54％，均高于純藥處理的39％和32％。在與低劑量噻嗪酮的互作處理中，Ma456和Ma576在試驗(yàn)1中的平均相對(duì)防效分別為81％和85％，試驗(yàn)2中分別為78％和80％。與純菌處理相比，菌藥混用的相對(duì)防效提高了25％左右。與清

12、水對(duì)照和載體乳油稀釋液對(duì)照相比，菌藥混用3次，持續(xù)40天控制稻飛虱的防效達(dá)80％左右。
　　 綜上所述，本研究的主要成果和創(chuàng)新點(diǎn)，一是研究建立了生防真菌殺褐飛虱效果的評(píng)價(jià)技術(shù)體系，篩選獲得了2株生防潛力菌株，并客觀評(píng)價(jià)真菌感染對(duì)褐飛虱生殖力的影響。二是將選到的2株金龜子綠僵菌創(chuàng)制為孢子懸乳劑，揭示了新菌劑與低劑量噻嗪酮對(duì)褐飛虱的協(xié)同作用，并建立了相應(yīng)互作的評(píng)價(jià)方法，確定了適宜的菌藥互作劑量。三是首次開展了新菌劑防治稻飛虱的田間試