牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白和NS3蛋白單克隆抗體的制備及鑒定.pdf

1、牛病毒性腹瀉病（Bovine viral diarrhea，BVD），是由牛病毒性腹瀉病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）引起的一種疾病，癥狀主要表現(xiàn)為腹瀉，急、慢性黏膜病，持續(xù)性感染，免疫抑制與免疫耐受，母畜流產(chǎn)、畸胎和死胎等。BVDV宿主較為廣泛，可以感染牛、豬、羊、駱駝和其他多種野生動物。該病在全世界廣泛分布，由于該病毒能引起繁殖系統(tǒng)病變并形成持續(xù)性感染，因而對養(yǎng)牛業(yè)造成了重要的影響。BVDV屬

2、于黃病毒科瘟病毒屬成員，與其同屬的有豬瘟病毒（CSFV）、羊邊界病病毒（DBV）及部分未分類瘟病毒。BVDV基因組含有一個大的開放閱讀框架（ORF）和兩側的非翻譯區(qū)（UTR），編碼10～11種蛋白。
　　 E2是BVDV的結構蛋白之一，是免疫原性最強、變異性最強的糖蛋白，在靠近N末端的一半含有多種依賴構象的抗原結構區(qū)，其N端伸出BVDV囊膜表面，是決定BVDV抗原性的主要部位，也是與BVDV抗體結合、介導中和反應及宿主細胞識別、

3、吸附的主要部位，E2蛋白上存在區(qū)分瘟病毒的抗原決定簇。BVDV和CSFV具有很高的同源性和非常相似的感染譜，給疾病的鑒別診斷帶來了一定的困難。因此，本試驗利用BVDVE2的重組真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1-E2免疫BALB/c小鼠，用純化的BVDV全病毒作為陽性雜交瘤細胞的篩選抗原，經(jīng)4次克隆制備了3株單克隆抗體，命名為2E2、3D12、4D6。2E2和4D6株抗體為IgM類，3D12為IgG2a亞類，輕鏈均為1c鏈。通過Western

4、blot和間接免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)：3株單抗均針對E2的構象表位，其中2E2和4D6株單抗針對的表位不是BVDV和CSFV所共有，所制備的3株單抗為鑒別診斷方法的建立提供了物質(zhì)基礎。
　　 NS3是BVDV的一種非結構蛋白，主要負責病毒多聚蛋白的翻譯后加工，產(chǎn)生成熟的病毒蛋白，是病毒自我復制的前提條件。NS3在瘟病毒屬中非常保守，是一種免疫優(yōu)勢蛋白，在自然感染或弱毒疫苗免疫后的動物體內(nèi)均可檢出針對該蛋白的抗體。目前國內(nèi)還未見BVDV