阿魏化學(xué)成分對(duì)阿魏側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)及蛋白質(zhì)表達(dá)的研究.pdf

1、野生阿魏菇腐生（或寄生）在傘形科植物阿魏的根莖部，研究以阿魏菇NB-1和準(zhǔn)噶爾阿魏為材料，通過(guò)活性引導(dǎo)分離阿魏化學(xué)成分。研究不同化學(xué)組分對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)、多種保護(hù)酶活性，以及蛋白質(zhì)表達(dá)產(chǎn)生的影響，探索阿魏中的化學(xué)物質(zhì)對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)的生物效應(yīng)。研究的主要結(jié)果如下：
　　 （1）準(zhǔn)噶爾阿魏肉質(zhì)根莖，95%乙醇提取。提取物(Extracts)采用不同溶劑萃取，得到石油醚萃取物(Ex.P)、三氯甲烷萃取物(Ex.T)、乙酸乙酯萃取物(

2、Ex.EA)、水相萃余物(R)?；钚砸龑?dǎo)選擇三氯甲烷萃取物(Ex.T)，采用硅膠柱分離，活性引導(dǎo)選擇Ex.Tc，再次硅膠柱分離，活性引導(dǎo)選擇Ex.Tc.3進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，發(fā)現(xiàn)Ex.Tc.3有7個(gè)主要的化學(xué)成分。
　　 （2）Extracts對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn)表明，低添加量對(duì)菌絲生長(zhǎng)的促進(jìn)作用顯著優(yōu)于CK，高濃度時(shí)表現(xiàn)出對(duì)菌絲生長(zhǎng)促進(jìn)的抑制作用。Ex.P、Ex.T、Ex.EA、R，均表現(xiàn)出對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，但以Ex.T效

3、果最好。Ex.T采用柱分離得到的12個(gè)組分中，有10個(gè)組分表現(xiàn)出對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，其中以Ex.Tc的效果最好。Ex.Tc柱分離得到6個(gè)組分，與CK相比對(duì)菌絲生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用，其中Ex.Tc.3的效果最好。低濃度的Ex.Tc.3對(duì)阿魏菇菌絲生長(zhǎng)沒有明顯的促進(jìn)作用，高濃度時(shí)對(duì)菌絲的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用。
　　 （3）與CK相比，Ex.T、Ex.Tc、Ex.Tc.3均能提高阿魏菇菌絲體CAT、POD、SOD活力。隨著培養(yǎng)基中

4、Ex.T和Ex.Tc添加量的增加，阿魏菇菌絲體CAT活力呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢(shì)，表現(xiàn)出很強(qiáng)的劑量效應(yīng)，Ex.Tc.3對(duì)菌絲體CAT活力具有雙重效應(yīng)。隨著培養(yǎng)基中Ex.T添加量的增加，阿魏菇菌絲體POD活力呈現(xiàn)逐漸提高的趨勢(shì)，Ex.Tc和Ex.Tc.3對(duì)菌絲體POD活力具有雙重效應(yīng)。Ex.T對(duì)阿魏菇菌絲體SOD活力具有雙重效應(yīng)，隨著培養(yǎng)基中Ex.Tc和Ex.Tc.3添加量的增加阿魏菇菌絲體SOD活力呈逐漸提高的趨勢(shì)，兩者之間具有劑量效應(yīng)。Ex

5、.T、Ex.Tc、Ex.Tc.3對(duì)阿魏菇菌絲體PPO活力的影響均表現(xiàn)出雙重作用，低濃度時(shí)能提高阿魏菇菌絲體PPO活力，高濃度時(shí)對(duì)菌絲體PPO活力產(chǎn)生抑制作用。
　　 （4）雙向凝膠電泳從CK中能清晰的分離到826個(gè)蛋白點(diǎn)，從Ex-P中能清晰的分離到592個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)，從Ex.T-P中能清晰的分離到697個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)。CK和Ex-P共有397個(gè)蛋白點(diǎn)匹配，匹配率為55.99%，Ex-P中有134個(gè)蛋白點(diǎn)較CK發(fā)生了明顯的上調(diào)，有113

6、個(gè)蛋白點(diǎn)發(fā)生了明顯的下調(diào)。CK和Ex.T-P共有571個(gè)蛋白點(diǎn)匹配，匹配率為74.98%，Ex.T-P中有170個(gè)蛋白點(diǎn)較CK發(fā)生了明顯的上調(diào)，有112個(gè)蛋白點(diǎn)發(fā)生了明顯的下調(diào)。Ex.T-P和Ex-P共有359個(gè)蛋白點(diǎn)匹配，匹配率為55.70%，Ex-P中有113個(gè)蛋白點(diǎn)較Ex.T-P發(fā)生了明顯的上調(diào)，有97個(gè)蛋白點(diǎn)發(fā)生了明顯的下調(diào)。在培養(yǎng)基中添加Extracts、Ex.T抑制了菌絲體中pI 5.0-pI 8.0蛋白的表達(dá)，Extrac

7、ts能促進(jìn)菌絲體中pI 4.0-pI 5.0（酸性）蛋白的表達(dá)，Ex.T能促進(jìn)菌絲體中pI 7.0- pI 9.0（偏堿性）蛋白的表達(dá)。與CK相比Extracts和Ex.T均能促進(jìn)阿魏菇菌絲體小分子量蛋白的表達(dá)，而對(duì)高分子量蛋白的表達(dá)卻產(chǎn)生了顯著地抑制作用，Extracts對(duì)阿魏菇菌絲體小分量蛋白的激活表達(dá)作用最為明顯。
　　 （5）質(zhì)譜鑒定差異蛋白點(diǎn)Spot 748為假想蛋白MPER_07859，Spot 1180為1,4-苯