利用家蠶細(xì)胞表達(dá)蝎毒素蛋白及其殺蟲效果分析.pdf

1、利用家蠶核型多角體病毒BmNPV Bac-to-Bac表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建了能夠表達(dá)蝎毒素蛋白基因的重組病毒載體，在培養(yǎng)細(xì)胞中進(jìn)行了表達(dá)，并通過生物學(xué)實(shí)驗(yàn)分析了重組蝎毒素蛋白的生物活性和殺蟲效果。研究結(jié)果如下：
　　 1、為了提高表達(dá)水平，利用BmNPV多角體蛋白編碼基因部分序列與蝎毒素基因進(jìn)行融合表達(dá)，構(gòu)建了兩個(gè)帶有多角體蛋白編碼基因15 bp和35 bp的兩個(gè)供體質(zhì)粒，并進(jìn)一步通過細(xì)菌轉(zhuǎn)座作用獲得了兩種融合表達(dá)蝎毒素基因的重組BmN

2、PV病毒。利用家蠶培養(yǎng)細(xì)胞BmN進(jìn)行了重組蛋白的表達(dá)，SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)重組蛋白得到了較高水平的表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)融合表達(dá)策略可以提高蝎毒素蛋白的表達(dá)水平。
　　 2、利用經(jīng)口添食含重組病毒表達(dá)的蝎毒素蛋白的BmN細(xì)胞勻漿液，分析了它對(duì)不同齡期家蠶幼蟲和棉鈴蟲幼蟲的生物學(xué)毒性。發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物具有較好的殺蟲效果。對(duì)不同齡期家蠶幼蟲的添食實(shí)驗(yàn)表明，蟻蠶添食后的死亡率達(dá)80％；給1齡期的家蠶和棉鈴蟲幼蟲經(jīng)口添食，當(dāng)添食劑量在2.8μg/