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1、近年來(lái)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究發(fā)展迅速,大豆和棉花等轉(zhuǎn)基因作物已大面積推廣應(yīng)用,取得了巨大的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。小麥?zhǔn)鞘澜缰饕募Z食作物,1992年第一株轉(zhuǎn)基因小麥誕生,為開(kāi)展小麥分子育種奠定了基礎(chǔ)。本課題針對(duì)目前小麥轉(zhuǎn)基因中存在的低轉(zhuǎn)化率、栽培品種少、抗蟲(chóng)基因單一等問(wèn)題,擬利用掌葉半夏凝集素(Pinelliapedatisecta agglutinin,PPA)基因轉(zhuǎn)化小麥,建立較成熟的小麥栽培品種抗蚜蟲(chóng)基因的轉(zhuǎn)化體系。
本文選用
2、了“石4185”、“揚(yáng)麥12”等7個(gè)小麥品種,研究了品種、激素等條件對(duì)小麥愈傷組織誘導(dǎo)及分化的影響,并通過(guò)檢測(cè)GUS基因的瞬時(shí)表達(dá)情況,研究了基因槍介導(dǎo)法的主要參數(shù)對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響。將含有抗蚜蟲(chóng)基因(PPA基因)和GUS報(bào)告基因的質(zhì)粒載體導(dǎo)入小麥愈傷組織,在含潮霉素的選擇培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選、分化及壯苗,獲得了抗性植株。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,最適的轉(zhuǎn)化受體是幼胚誘導(dǎo)的胚性愈傷組織,轟擊前6小時(shí)及轟擊后18小時(shí)將愈傷組織置于含甘露醇0
3、.4 mol·L-1的高滲培養(yǎng)基上進(jìn)行高滲處理有助于提高轉(zhuǎn)化率,當(dāng)轟擊壓力為1100 psi,質(zhì)粒1μg/槍及金粉300μg/槍時(shí),GUS瞬時(shí)表達(dá)率及表達(dá)量最高。將已轟擊愈傷組織在含2 mg·L-1的2,4-D的恢復(fù)培養(yǎng)基上恢復(fù)培養(yǎng)5天至7天能有效提高愈傷組織的植株再生能力。用60 mg·L-1的潮霉素篩選30天后可以獲得抗性愈傷組織,經(jīng)過(guò)檢測(cè)抗性愈傷組織中GUS基因穩(wěn)定表達(dá)。在KT濃度為1 mg·L-1且NAA濃度為0.1 mg·L-
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