小麥抗銹基因的RAPD標(biāo)記.pdf

1、由于RAPD反應(yīng)體系本身的不穩(wěn)定性及其移植性差,一般不同的研究者需對(duì)其反應(yīng)體系進(jìn)行優(yōu)化和摸索.通過以小麥基因組DNA為模板,對(duì)RAPD反應(yīng)程序中的一些重要參數(shù)進(jìn)行摸索和優(yōu)化試驗(yàn),建立了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA分析應(yīng)用反應(yīng)體系.利用上述RAPD反應(yīng)體系,以抗葉銹基因Lr34、抗稈銹基因Sr31的小麥近等基因系、染色體代換系為主要材料進(jìn)行DNA多態(tài)性分析,分別篩選獲得了對(duì)Lr34和Sr31有特異性RAPD標(biāo)記OPZ12-800和OPS4-430

2、.用OPS4引物分別對(duì)攜帶和不攜帶Sr31基因的16個(gè)小麥品種(系)進(jìn)行隨機(jī)擴(kuò)增,結(jié)果發(fā)現(xiàn)8個(gè)攜帶有該基因材料能擴(kuò)增出430bp的條帶,而不具有該基因的品種(系)則未出現(xiàn)此條帶.表明OPS4-430片段與抗稈銹基因Sr31有關(guān).將標(biāo)記OPS4-430回收、克隆.并用T7端正向引物對(duì)其進(jìn)行序列測(cè)定,在其兩端設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物,從而轉(zhuǎn)化成SCAR標(biāo)記.經(jīng)檢驗(yàn)其靈敏性好,可靠性高.利用它可對(duì)F2代材料進(jìn)行檢測(cè),從而確定該標(biāo)記的連鎖程度與Sr3